[學(xué)習(xí)]胃癌her2檢測(cè)亞太工作組建議

1、,胃癌HER2檢測(cè)亞太工作組建議,,目的,了解制訂亞太胃癌HER2檢測(cè)建議的必要性了解HER2亞太工作組建議以及這些建議與國際指南的不同了解亞太建議對(duì)多學(xué)科診斷及治療亞太胃癌患者的意義,HER2，人表皮生長因子受體2.,制訂適用于亞太地區(qū)的指南的必要性,關(guān)于胃癌HER2檢測(cè)的現(xiàn)有指南主要依據(jù)歐洲的檢測(cè)經(jīng)驗(yàn)1 很多APAC國家的當(dāng)?shù)貦z測(cè)環(huán)境不同于歐洲、澳大利亞和美國 APAC建議必須考慮到該區(qū)域?qū)嶒?yàn)室日常工作中所面臨的挑

2、戰(zhàn),1Ruschoff, et al.Mod Pathol 2012;25:637–50.,HER2，人表皮生長因子受體2.,制訂適用于亞太地區(qū)的指南的必要性,修訂或擴(kuò)充了國際指南以體現(xiàn)APAC實(shí)驗(yàn)室的特有經(jīng)驗(yàn)1強(qiáng)調(diào)本地檢測(cè)環(huán)境提高區(qū)域適用性,1Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,,亞太指南：概述,,Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,HER2，人表

3、皮生長因子受體2；IHC，免疫組織化學(xué),HER2多學(xué)科檢測(cè)團(tuán)隊(duì)的原則,實(shí)驗(yàn)室操作建議,適當(dāng)?shù)臉?biāo)本類型,胃癌的獨(dú)有特征,HER2基因擴(kuò)增評(píng)估,IHC HER2染色評(píng)估,HER2檢測(cè)解讀和評(píng)分,質(zhì)量控制,處理和固定,抗原修復(fù),染色,對(duì)照,HER2多學(xué)科檢測(cè)團(tuán)隊(duì)的原則,HER2檢測(cè)需要多學(xué)科協(xié)同,準(zhǔn)確及時(shí)地診斷患者的HER2狀態(tài)需要腫瘤外科、腫瘤內(nèi)科和病理團(tuán)隊(duì)關(guān)鍵成員之間的協(xié)作多學(xué)科團(tuán)隊(duì)?wèi)?yīng)共同推動(dòng)數(shù)個(gè)關(guān)鍵原則以保證檢測(cè)質(zhì)量,Kim, et

4、 al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,HER2，人表皮生長因子受體2.,胃癌檢測(cè)的關(guān)鍵原則,應(yīng)在診斷時(shí)常規(guī)檢查不可手術(shù)、局限性晚期、復(fù)發(fā)性和轉(zhuǎn)移性胃癌和胃食管結(jié)合部（GEJ）癌患者的HER2過表達(dá)情況1HER2狀態(tài)對(duì)于胃和GEJ癌同時(shí)具有預(yù)后和預(yù)測(cè)價(jià)值2–5能否獲取HER2靶向治療不應(yīng)影響受試患者的決策確定HER2狀態(tài)胃癌組織學(xué)診斷的時(shí)間應(yīng)盡可能短1胃和GEJ癌病情進(jìn)展迅速、復(fù)發(fā)率高必須借助對(duì)患者

5、HER2狀態(tài)的全面了解制定治療計(jì)劃1HER2報(bào)告應(yīng)提供確定性診斷不應(yīng)提交或接受不確定的結(jié)果HER2檢測(cè)應(yīng)盡可能自動(dòng)化以提供更精確和可靠的結(jié)果1,1Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014; 2.Bang, et al.Lancet 2010;28:687–97; 3.Ruschoff, et al.Mod Pathol 2012;25:637–50; 4.Kim, et al.Ann Surg

6、Oncol 2011;18:2833–40; 5.Gomez-Martin, et al.Clin Transl Oncol 2011;13:636–51.,GEJ，胃食管結(jié)合部；HER2，人表皮生長因子受體2.,實(shí)驗(yàn)室建議影響檢測(cè)結(jié)果的重要參數(shù),合格的標(biāo)本,手術(shù)切除和活檢標(biāo)本均可接受1更常使用活檢標(biāo)本，因?yàn)楹芏嗤砥?轉(zhuǎn)移性胃癌常不可手術(shù)4-6處新鮮腫瘤組織的活檢標(biāo)本可以接受1腫瘤組織數(shù)量不足不能解釋異質(zhì)性，并會(huì)提高假陰性結(jié)果

7、的風(fēng)險(xiǎn)2,3受測(cè)活檢組織數(shù)量不同可能是亞太地區(qū)HER2陽性率不同的原因4-6處活檢標(biāo)本較國際指南中的6-8處活檢標(biāo)本更有可操作性4 不建議使用組織微陣列進(jìn)行常規(guī)標(biāo)本評(píng)估1不能完全代表異質(zhì)性,1Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014; 2.Warneke, et al.Ann Oncol 2013;24:725–33; 3.Lee, et al.Eur J Cancer 2013;49:1448

8、–57; 4.Ruschoff, et al.Mod Pathol 2012;25:637–50.,HER2，人表皮生長因子受體2.,處理和固定,應(yīng)在切除20分鐘內(nèi)將活檢標(biāo)本置于 10% NBF內(nèi)1,應(yīng)在切除后1小時(shí)內(nèi)將手術(shù)切除標(biāo)本置于 10% NBF內(nèi),1Ruschoff, et al.Mod Pathol 2012;25:637–50.,NBF，中性緩沖福爾馬林,冷缺血時(shí)間和經(jīng)驗(yàn)證的方案1,冷缺血時(shí)間 = 組織切除到開始福爾馬林固

9、定之間的時(shí)間可影響蛋白表達(dá)，使HER2檢測(cè)結(jié)果解釋不準(zhǔn)確，導(dǎo)致假陰性結(jié)果2,3采用指南建議范圍之外的冷缺血時(shí)間必須經(jīng)過驗(yàn)證應(yīng)分別驗(yàn)證活檢和手術(shù)切除標(biāo)本。驗(yàn)證必須將標(biāo)本固定地點(diǎn)（是新鮮轉(zhuǎn)運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室，還是在手術(shù)室內(nèi)開始固定）考慮在內(nèi)在手術(shù)室需要做的：應(yīng)在檢查申請(qǐng)單中注明切除和置于固定劑的時(shí)間應(yīng)將標(biāo)本置于耐用的尺寸適當(dāng)?shù)娜萜鲀?nèi)，浸泡于10% NBF內(nèi)在浸入前應(yīng)切開手術(shù)標(biāo)本并標(biāo)記方向,1Kim, et al.Asia Pac J

10、 Clin Oncol 2014; 2.Yildiz-Aktas, et al.Mod Pathol 2012;25:1098-105; 3.Neumeister, et al.J Natl Cancer Inst 2012;104:1815–24.,HER2，人表皮生長因子受體2；NBF，中性緩沖福爾馬林,固定：一個(gè)影響檢測(cè)結(jié)果的重要因素,可變且未經(jīng)驗(yàn)證的檢測(cè)流程在亞太地區(qū)常見，這是結(jié)果不可靠的主要原因標(biāo)本固定受以下因素影響：溫

11、度滲透速率標(biāo)本尺寸（最好厚度不超過4mm）固定劑與組織體積的比值pH值固定時(shí)間必須優(yōu)化并驗(yàn)證這些參數(shù),Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,,指南對(duì)固定的建議概述,Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,NBF，中性緩沖福爾馬林,遠(yuǎn)距離的樣本運(yùn)送,檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)與當(dāng)?shù)貙?shí)施組織采樣的中心密切協(xié)同以確保對(duì)標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)?shù)倪\(yùn)送準(zhǔn)備如果標(biāo)本將在已驗(yàn)證的固

12、定時(shí)間內(nèi)到達(dá)HER2檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室：當(dāng)?shù)刂行膽?yīng)根據(jù)建議開始固定應(yīng)固定標(biāo)本，密封在適合長距離運(yùn)輸?shù)娜萜鲀?nèi)如果標(biāo)本將在已驗(yàn)證的固定時(shí)間以外到達(dá)HER2檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室：應(yīng)在運(yùn)輸之前處理標(biāo)本，用蠟塊包埋,Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,HER2，人表皮生長因子受體2.,抗原修復(fù)1,推薦自動(dòng)控溫抗原修復(fù)即使是自動(dòng)化系統(tǒng)也必須優(yōu)化，并根據(jù)生產(chǎn)商建議進(jìn)行驗(yàn)證抗原修復(fù)不佳是導(dǎo)致假結(jié)果的常見原因

13、過度修復(fù)可能活化內(nèi)源性生物素，導(dǎo)致基于親和素-生物素染色檢測(cè)中過強(qiáng)的背景染色，并可導(dǎo)致假陽性結(jié)果2,1Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014; 2.Bussolati, et al.Histopathology 1997;31:400–7.,,檢測(cè)1,實(shí)驗(yàn)室應(yīng)使用標(biāo)準(zhǔn)化的商用IHC和ISH分析可能與可靠性和重復(fù)性差相關(guān)應(yīng)建立并驗(yàn)證胃癌標(biāo)本專用的檢測(cè)流程所有檢測(cè)必須在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)驗(yàn)證不同的IHC

14、抗體導(dǎo)致不同的染色強(qiáng)度可能影響陽性率2為無、低和高水平的HER2蛋白表達(dá)生成參考圖像以進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化評(píng)分,1Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014; 2.Cho, et al.Mod Pathol 2013;26:677-84.,HER2，人表皮生長因子受體2；IHC，免疫組織化學(xué)；ISH，原位雜交,對(duì)照,每個(gè)標(biāo)本玻片上都應(yīng)有HER2表達(dá)水平明確的對(duì)照用于檢測(cè)假陽性和假陰性結(jié)果IHC：對(duì)照應(yīng)

15、包括無（IHC 0）和強(qiáng)IHC染色（IHC 3+)的切片如果可能還應(yīng)包括不確定染色（IHC 2+)應(yīng)使用與胃癌標(biāo)本相似的固定劑、處理和石蠟包埋技術(shù)準(zhǔn)備對(duì)照樣品,Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,HER2，人表皮生長因子受體2；IHC，免疫組織化學(xué),胃癌HER2檢測(cè)結(jié)果解讀和評(píng)分建議,胃癌的獨(dú)有特征,胃癌是一種形成腺體和生成粘液的腫瘤，呈不完全基底側(cè)方/側(cè)方染色模式胃癌的結(jié)果解讀和評(píng)分

16、指導(dǎo)原則不同于乳腺癌將乳腺癌的指導(dǎo)原則用于胃癌標(biāo)本將使HER2陽性標(biāo)本評(píng)為陰性,Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,HER2，人表皮生長因子受體2.,乳腺癌和胃癌的區(qū)別,乳腺癌圖像由Dako回贈(zèng)；胃癌圖像來自F.Hoffmann-L；；a Roche,GOJ，胃-食管結(jié)合部；IHC,免疫組織化學(xué),,IHC 0,IHC 1+,IHC 3+,IHC 2+,乳腺癌,胃癌,由于組織和生物學(xué)差異，乳腺

17、癌和胃及胃食管癌的評(píng)分不同,胃癌中異質(zhì)性染色常見1,2,存在于高達(dá)30%的HER2陽性胃癌病例中3更常見于IHC2+病例或混合組織學(xué)分型內(nèi)4影響檢測(cè)的各個(gè)階段，從采樣到評(píng)分問題盡管使用現(xiàn)行評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)分類為HER2陰性，陽性染色細(xì)胞<10%的腫瘤對(duì)HER2靶向治療有染色嗎？,1Hofman, et al.Histopathology 2008;52:797–805; 2.Jouret-Mourin, et al.Act

18、a Gastroenterol Belg 2012;75:9–13; 3.Ruschoff, et al.Mod Pathol 2012;25:637–50; 4.Cho, et al.Ann Surg Oncol 2013;20:477–84.,HER2，人表皮生長因子受體2；IHC，免疫組織化學(xué),解釋異質(zhì)性：IHC評(píng)分,,Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,HER2，人表皮生長因子受體2；I

19、HC，免疫組織化學(xué),在<10%的細(xì)胞中觀察到強(qiáng)、完全/基底側(cè)方或側(cè)方膜染色,在不同的蠟塊切片上重復(fù)ICH染色,仍不能確定?,使用ISH確定HER2基因擴(kuò)增和最終HER2狀態(tài),,,,原發(fā)和轉(zhuǎn)移性腫瘤的不一致性,原發(fā)和轉(zhuǎn)移性胃癌間的HER2狀態(tài)不一致并不罕見1,2IV期病變：應(yīng)在原發(fā)和遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移樣本中進(jìn)行HER2檢測(cè)（如可能）3應(yīng)在做出最終治療決定前將不一致的證據(jù)報(bào)告至腫瘤學(xué)家3,1Cho, et al.Mod Pathol 2

20、013;26:677-84; 2.Lee, et al.Eur J Cancer 2013;49:1448–57; 3.Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,HER2，人表皮生長因子受體2.,胃癌HER2檢測(cè)程序,IHC是胃癌的主要檢測(cè)方法1曲妥珠單抗可為高表達(dá)HER2蛋白的患者提供最大獲益(曲妥珠單抗胃癌[ToGA]試驗(yàn))2ISH用于IHC不確定病例的HER2狀態(tài)確認(rèn)1首選亮視野ISH法

21、以有效確定HER2擴(kuò)增區(qū)域澳大利亞胃癌HER2檢測(cè)研究(GaTHER)認(rèn)為IHC 3+強(qiáng)烈提示陽性ISH結(jié)果3,1Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014; 2.Bang, et al.Lancet 2012;376:687–97; 3.Fox, et al.Am J Surg Pathol 2012;36:577–82.,HER2，人表皮生長因子受體2；IHC，免疫組織化學(xué)；ISH，原位雜交,使用

22、IHC HER2染色評(píng)估侵襲性癌,1Bang, et al.Lancet 2012;376:687–97.,HER2，人表皮生長因子受體2；IHC，免疫組織化學(xué),? 對(duì)于活檢無百分比截?cái)嘀担粏涡枰辽?個(gè)陽性細(xì)胞成簇摘自Bang, et al.1,顯微鏡放大倍數(shù)法則1,關(guān)聯(lián)染色強(qiáng)度和顯微鏡放大倍數(shù)與IHC評(píng)分1可提高IHC和ISH結(jié)果的一致性2,1Ruschoff, et al.Mod Pathol 2012;25:637–50;

23、2.Ruschoff, et al.Mod Pathol 2012;25:637–50.,HER2，人表皮生長因子受體2；IHC，免疫組織化學(xué),HER2基因擴(kuò)增評(píng)估,H&E 和IHC染色應(yīng)指導(dǎo)可能的HER2擴(kuò)增區(qū)域的選擇標(biāo)本的整個(gè)面積都應(yīng)該進(jìn)行雜交應(yīng)計(jì)數(shù)IHC2+區(qū)域大約20個(gè)相鄰或連續(xù)細(xì)胞計(jì)數(shù)重疊細(xì)胞核時(shí)應(yīng)謹(jǐn)慎應(yīng)將不完全、中央?yún)^(qū)域未染色和/或信號(hào)強(qiáng)度弱的核排除在評(píng)估之外,Kim, et al.Asia Pac

24、J Clin Oncol 2014.,H&E, 蘇木精和曙紅；HER2, 人表皮生長因子受體2；IHC，免疫組織化學(xué),亮視野或暗視野的選擇,首選亮視野、雙探針法ISH方法應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)如果使用暗視野法：非特異性和高背景染色區(qū)域內(nèi)的細(xì)胞不應(yīng)計(jì)數(shù)對(duì)于各探針，僅應(yīng)計(jì)數(shù)出現(xiàn)至少一個(gè)ISH信號(hào)的細(xì)胞（雙探針）FISH染色玻片隨時(shí)間褪色：采集代表性圖像，將玻片在-20℃下保存至少12個(gè)月,Kim, et al.Asia Pac

25、J Clin Oncol 2014.,FISH, 原位雜交熒光；ISH, 原位雜交,胃癌ISH評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),1Ruschoff, et al.Mod Pathol 2012;25:637–50; 2.Bartlett, et al.J Clin Pathol 2011;64:649–53.,CEP17, 染色體計(jì)數(shù)探針 17; HER2, 人表皮生長因子受體2; ISH，原位雜交,摘自Ruschoff, et al.1,排除標(biāo)準(zhǔn),出現(xiàn)下列情

26、況時(shí)應(yīng)拒絕檢驗(yàn)：未驗(yàn)證的檢測(cè)前處理流程，尤其是固定由于切片機(jī)偽影、雜交信號(hào)強(qiáng)度和/或雙探針檢查中同時(shí)存在兩種信號(hào)，不符合檢測(cè)要求對(duì)照結(jié)果不滿意組織切片中無腫瘤成分超期4-6周準(zhǔn)備切片的陰性結(jié)果（未石蠟包埋和/或在4℃下保存）,Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,,質(zhì)量控制,內(nèi)部質(zhì)控：驗(yàn)證,HER2檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)每天對(duì)所有抗原（包括HER2）至少進(jìn)行10次IHC檢測(cè)同時(shí)具有IHC和IS

27、H能力的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行首次胃HER2檢測(cè)需要： 同時(shí)使用IHC和ISH分析25至50個(gè)胃癌病例實(shí)現(xiàn)一致性 > 90%包括至少5個(gè)HER2陽性病例（10-20%驗(yàn)證病例）驗(yàn)證必須獨(dú)立于乳腺癌方案如果檢測(cè)條件、試劑、材料和方法變更必須重新驗(yàn)證病理學(xué)家應(yīng)每年至少評(píng)分50個(gè)胃癌病例,Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,HER2，人表皮生長因子受體2；IHC，免疫組織化學(xué)；ISH，原位

28、雜交,外部質(zhì)控程序,幫助實(shí)驗(yàn)室確保日常檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)一致允許實(shí)驗(yàn)室之間長期互相檢查HER2檢測(cè)質(zhì)量,Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,HER2，人表皮生長因子受體2.,總結(jié),關(guān)鍵點(diǎn)概述,Kim, et al.Asia Pac J Clin Oncol 2014.,,對(duì)亞太實(shí)驗(yàn)室有何意義？,亞太指南極大的擴(kuò)充和明確了現(xiàn)有的國際指導(dǎo)原則所有修訂都旨在使現(xiàn)有指南更貼近于亞太實(shí)驗(yàn)室環(huán)境和他們所面對(duì)的