HIF-1α-Notch信號通路在人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化中的作用.pdf

1、背景：乳腺癌是嚴(yán)重危害女性身心健康最常見的惡性腫瘤之一。缺氧誘導(dǎo)因子HIF-1α（Hypoxia inducible factor1α，HIF-1α）是缺氧條件下的轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控因子，介導(dǎo)存在于哺乳動物或人體內(nèi)的細(xì)胞適應(yīng)于缺氧微環(huán)境。它通過結(jié)合以及調(diào)控一些靶基因（缺氧反應(yīng)元件，HRE）的合成，參與腫瘤細(xì)胞增殖和凋亡、腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移、血管發(fā)生等多個方面。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（Epithelial-mesenchymal transition，EMT）

2、是細(xì)胞失去上皮表型而獲得間質(zhì)特性。EMT在腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用，使腫瘤獲得向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的能力。有研究表明 HIF-1α參與細(xì)胞增殖、凋亡、分化，還可以影響乳腺癌的發(fā)展。Notch信號通路可促進腫瘤發(fā)生EMT。低氧是腫瘤微環(huán)境標(biāo)志性特征，但是 HIF-1α及Notch信號通路在低氧誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞發(fā)生 EMT和侵襲轉(zhuǎn)移的過程中是否發(fā)揮作用以及發(fā)揮什么樣的作用，目前尚未清楚。
　　目的：⑴探討HIF-1α在人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB

3、-231發(fā)生EMT現(xiàn)象中的作用。⑵闡明HIF-1α與Notch信號通路對乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231生物學(xué)行為的影響，從而為臨床提高乳腺癌患者的生存率提供新思路。
　　方法：①構(gòu)建MDA-MB-231細(xì)胞Ri hHIF-1α載體（由上海百茂生物醫(yī)藥有限科技公司完成），Western blot檢測轉(zhuǎn)染前后缺氧環(huán)境下HIF-1α、Notch1、E-Cadherin、Beta-Catenin、Vimentin基因的表達(dá)。②Cell C

4、ounting Kit-8(CCK-8)增殖實驗檢測HIF-1α對乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231生長情況的影響。③Transwell小室基質(zhì)侵襲實驗檢測HIF-1α對乳腺癌細(xì)胞 MDA-MB-231侵襲能力的影響。④劃痕損傷實驗觀察 HIF-1α對乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231遷移能力的影響。統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS22.0統(tǒng)計軟件，P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：⑴Western blot檢測低氧培養(yǎng)條件下 MDA-

5、MB-231細(xì)胞、MDA-MB-231-Ri hHIF-1α細(xì)胞及MDA-MB-231-Control細(xì)胞EMT標(biāo)志物的蛋白表達(dá)水平變化：以β-actin作為內(nèi)參，分別在低氧培養(yǎng)24h、48h，MDA-MB-231-Ri hHIF-1α細(xì)胞與MDA-MB-231細(xì)胞相比，上皮標(biāo)志物E-Cadherin的表達(dá)均升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；上皮標(biāo)志物β-Catenin24h差異無統(tǒng)計學(xué)意義,48h表達(dá)升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜

6、0.05);間質(zhì)標(biāo)志物 Vimentin表達(dá)均降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；Notch-1表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（ P＞0.05）。⑵在低氧條件下培養(yǎng) MDA-MB-231細(xì)胞、MDA-MB-231-Ri hHIF-1α細(xì)胞、MDA-MB-231-Control細(xì)胞，CCK-8檢測其增殖能力，增殖速度為MDA-MB-231細(xì)胞>MDA-MB-231-Control細(xì)胞>MDA-MB-231-Ri hHIF-1α細(xì)胞，差異有統(tǒng)計學(xué)

7、意義（ P＜0.05）。⑶在低氧條件下培養(yǎng) MDA-MB-231細(xì)胞、MDA-MB-231-Ri hHIF-1α細(xì)胞、MDA-MB-231-Control細(xì)胞，24h穿膜細(xì)胞數(shù)分別為：325.75±38.664，194.75±20.337，158.50±46.702個；MDA-MB-231細(xì)胞與MDA-MB-231-Ri hHIF-1α細(xì)胞的穿膜細(xì)胞數(shù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。⑷24h MDA-MB-231細(xì)胞、MDA-MB-2

8、31-Ri hHIF-1α細(xì)胞、MDA-MB-231-Control細(xì)胞的遷移寬度分別為433.4±199.040，136.7±106.160，207.5±164.011，各組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；48h的遷移寬度分別是1190.8±141.554、290.2±153.167、395.7±143.807，MDA-MB-231細(xì)胞與MDA-MB-231-Ri hHIF-1α細(xì)胞遷移寬度差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。