RNA干擾HIF-1α表達(dá)對(duì)乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231影響的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、研究背景：缺血缺氧的微環(huán)境是大多數(shù)腫瘤形成和演進(jìn)過(guò)程中普遍存在的現(xiàn)象，HIF-1是細(xì)胞應(yīng)激缺氧時(shí)所產(chǎn)生的轉(zhuǎn)錄激活因子，可直接或間接調(diào)節(jié)100余種靶基因的轉(zhuǎn)錄激活，結(jié)果使腫瘤細(xì)胞能夠適應(yīng)缺氧微環(huán)境，并保持不斷增殖、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的能力。蛋白質(zhì)組學(xué)可以規(guī)?；赝瑫r(shí)發(fā)現(xiàn)或找出多個(gè)與腫瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)的蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)組群，對(duì)其進(jìn)行定性、定量分析，從整體網(wǎng)絡(luò)水平了解細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，揭示腫瘤發(fā)病機(jī)制。 目的：分析人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-23

2、1細(xì)胞系和經(jīng)HIF-lαsiRNA干擾后的MDA-MB-231細(xì)胞株之間差異表達(dá)蛋白質(zhì)，探討在腫瘤生長(zhǎng)過(guò)程HIF-1的作用及參與的靶蛋白。 方法：聯(lián)合采用RNA干擾技術(shù)和蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法，建立MDA-MB-231細(xì)胞系和經(jīng)HIF-1αsiRNA干擾后的MDA-MB-231細(xì)胞株的差異表達(dá)蛋白質(zhì)圖譜，經(jīng)雙向凝膠電泳后切取差異倍數(shù)在兩倍以上的蛋白質(zhì)點(diǎn)，由北京華大蛋白質(zhì)組學(xué)研發(fā)中心協(xié)助質(zhì)譜分析。采用Western Blot驗(yàn)證其中部

3、分差異蛋白質(zhì)。 結(jié)果：經(jīng)質(zhì)譜分析得到21種蛋白質(zhì)，包括能量代謝相關(guān)酶，抗氧化劑，增殖侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白，細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白，涉及核酸生成、轉(zhuǎn)錄和翻譯相關(guān)蛋白質(zhì)等幾類。其中大部分蛋白質(zhì)為經(jīng)RNA干擾后表達(dá)下調(diào)，部分是HIF-1的已知靶蛋白，部分可能與HIF-1有間接關(guān)系。對(duì)差異蛋白質(zhì)的檢測(cè)結(jié)果與比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究的結(jié)果部分一致。 結(jié)論：本研究經(jīng)HIF-1αsiRNA干擾后鑒定出21個(gè)差異表達(dá)蛋白質(zhì)，功能涉及到腫瘤惡性生物學(xué)進(jìn)展