沒有幻燈片標(biāo)題-海南醫(yī)學(xué)院精品課程

1、免疫學(xué)的臨床應(yīng)用,免疫診斷免疫治療免疫預(yù)防,免疫學(xué)診斷,一、抗原或抗體的檢測,二、淋巴細(xì)胞的測定,三、免疫學(xué)檢測方法的應(yīng)用,免疫學(xué)診斷,（一）抗原抗體反應(yīng)的原理,免疫學(xué)診斷,一、抗原或抗體的檢測,1、抗原抗體反應(yīng)的 特異性（1）特異性：基于兩 種分子間 的結(jié)構(gòu)互補(bǔ)性和親和性。（2）可逆性（3）適宜的條件：電解質(zhì)、pH、溫度等,2、抗原抗體反應(yīng)的可見性 抗原抗體按適當(dāng)比例結(jié)合，形成肉眼可見的現(xiàn)

2、象。,應(yīng) 用,1、利用已知抗原檢測未知抗體,（1）檢測病原微生物的相應(yīng)抗體以輔助診斷疾?。?傷寒病、流行性乙型腦炎、AIDS病等。（2）檢測自身抗體——診斷自身免疫?。篠LE、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等,2、利用已知抗體檢測未知抗原,（1）鑒定病原菌：診斷疾?。?）檢測腫瘤相關(guān)抗原：檢測甲胎蛋白以診斷肝癌（3）檢測血型抗原、HLA抗原：鑒定血型，親子鑒定（4）檢測藥物半抗原： 確認(rèn)運(yùn)動員是否服用興奮劑,（二） 抗原或抗體的檢測方法,

3、凝集反應(yīng)沉淀反應(yīng)補(bǔ)體參與的抗原抗體反應(yīng)免疫標(biāo)記技術(shù),（一）凝集反應(yīng)（agglutination）,顆粒性抗原（紅細(xì)胞、細(xì)菌、 乳膠顆粒等）與抗體特異性結(jié)合，形成肉眼可見的凝集塊。,1 、直接凝集(direct agglutination) 玻片凝集、試管凝集2、間接凝集（indirect agglutination） 可溶性抗原包被在乳膠顆?；蚣t細(xì)胞表面，與相應(yīng) 抗 體混合出現(xiàn)的凝集

4、現(xiàn)象。3、抗球蛋白試驗（Coombs試驗） 抗原與單價抗體（不完全抗體）結(jié)合不出現(xiàn)凝集塊，再加入抗球蛋白后即形成凝集塊。 用于檢測抗Rh抗體以診斷新生兒溶血性貧血。,乳膠顆粒,,紅細(xì)胞,,,類風(fēng)濕因子檢測妊娠試驗,間接凝集,直接凝集,,（二）沉淀反應(yīng)（precipitation）,可溶性抗原（免疫球蛋白、細(xì)胞裂解物、組織浸液等）與相應(yīng)抗體結(jié)合， 形成不溶性免疫復(fù)合物，出現(xiàn)不透明的沉淀物。多在半固體瓊脂凝膠上進(jìn)行，形成白色的沉淀。

5、可分為單向免疫擴(kuò)散試驗、雙向免疫擴(kuò)散試驗、免疫電泳、免疫比濁法等。,免疫比濁法：快速簡便。用于血清IgG、IgA、IgM、 補(bǔ)體C3、C4含量測定,（三）補(bǔ)體參與的抗原抗體反應(yīng),1、50 %補(bǔ)體溶血試驗（CH50測定） ——血清總補(bǔ)體量測定,2、補(bǔ)體結(jié)合試驗(complement fixation test)：檢測抗原或抗體。原理：用已知的指示系統(tǒng)檢測試驗系統(tǒng)是否結(jié)合補(bǔ)體進(jìn)行診斷,試驗原理？,檢測系統(tǒng)：待測樣品和已知

6、抗原（或抗體）,指示系統(tǒng)：SRBC和溶血素,溶血—陰性；不溶血—陽性,用標(biāo)記物標(biāo)記抗體或抗原進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)借以提高免疫學(xué)診斷的敏感性,熒光素 ：異硫氰酸熒光素（黃綠色熒光）、藻紅蛋白、 羅丹明（紅色熒光）,放射性同位素： 125I、131I,酶：辣根過氧化物酶、鹼性磷酸酶,免疫熒光檢測法（IFA）,放射免疫檢測法（RIA）,酶免疫檢測法（EIA）,（四）免疫標(biāo)記技術(shù),液相（ELISA）、固相（免疫組化技術(shù)）,直接熒光法,間接熒光法,免

7、疫熒光技術(shù),間接法雙抗夾心法競爭法E: 辣根過氧化酶 HRPS: 底物 二氨基聯(lián)苯胺 DAB/鄰苯胺,酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA法）,間接法,,,,,,,,,,,DAB,,雙抗夾心法,,,,,,,,DAB,,BAS-ELISA法（ biotin-avidin-system，生物素-抗生物素系統(tǒng)-ELISA法）：敏感性更高。用于抗原抗體以及DNA、R

8、NA的檢測。,卵白及某些微生物中的蛋白質(zhì),,,靈敏度達(dá)pg水平。常用于微量物質(zhì)測定，如胰島素、生長激素、甲狀腺素、孕酮等激素、嗎啡、地高辛等藥物以及IgE等。,放射免疫檢測法（RIA）,競爭法,,,能分離分子大小不同的蛋白質(zhì)并確定其分子量，常用于檢測多種病毒的抗體或抗原，如抗HIV抗體的檢測。,免疫印跡法,二、淋巴細(xì)胞的測定,（一）淋巴細(xì)胞的分離與類型鑒定,1、淋巴細(xì)胞的分離：外周血葡聚糖-泛影葡胺密度梯度離心法,白膜層,單核細(xì)胞,淋巴

9、細(xì)胞,B,T,,,,吸附分離,過尼龍毛柱分離,,（1）間接免疫熒光法：鑒定細(xì)胞的群、亞群。,用CD3、CD4、CD8單克隆抗體檢測患者外周血T細(xì)胞表面相應(yīng)抗原CD3+ ——T細(xì)胞，計算T細(xì)胞總數(shù)。 CD4+ —— CD4+T細(xì)胞，計算CD4+T細(xì)胞數(shù)。 CD8+——CD8+ T細(xì)胞，計算 CD8+亞群T細(xì)胞數(shù) 計算CD4+ / CD8+比例,正常人PMB中T細(xì)胞占65~75% CD4+ / CD8+約為1.5~2,2、淋巴細(xì)

10、胞的類型鑒定：淋巴細(xì)胞表面標(biāo)記檢測、 記數(shù),用mIgM、mIgD單克隆抗體檢測患者外周血B細(xì)胞表面相應(yīng)的抗原已檢測B細(xì)胞的數(shù)量,正常人外周血中SmIg+ 細(xì)胞占8~12%,,（2）流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometry）,,,（二）淋巴細(xì)胞功能測定,1、T細(xì)胞功能測定,（1）T細(xì)胞增殖試驗（淋轉(zhuǎn)）：絲裂原、抗CD3單克隆抗體 等能非特異地激活T細(xì)胞，使之發(fā)生轉(zhuǎn)化增殖，計算淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化率（正常值65~80%）

11、 。 ①形態(tài)學(xué)觀察法 ②3H-TdR滲入法：用液體閃爍儀測定樣品的β射線放射活性 ③MTT法,（2）淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗（LMC） ——檢測CTL、NK、 LAK、TIL細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞的功能,（2）抗體形成細(xì)胞測定—— 溶血空斑試驗 （hemolytic forming cell assay，HFC）計算HFU/ml,2、B細(xì)胞功能測定,（1）B細(xì)胞增殖試驗：LPS、SPA刺激，檢查抗體形成

12、細(xì)胞 的數(shù)目,可用于鑒定分離的淋巴細(xì)胞亞群，監(jiān)測某些疾病狀態(tài)的細(xì)胞免疫功能。IL-2、IL-2R、rIFN 、TNF等檢測。①免疫學(xué)方法：ELISA、RIA等。 ②細(xì)胞生物學(xué)方法 ③分子生物學(xué)方法，如聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）法等,3、細(xì)胞因子檢測,4、體內(nèi)免疫細(xì)胞功能測定：皮膚試驗,（1）遲發(fā)型超敏反應(yīng)：舊結(jié)核菌素試驗（ OT試驗 ） 皮試（+）——有一定的細(xì)胞免疫能力

13、 皮試（—）——細(xì)胞免疫功能缺損,（2）速發(fā)型超敏反應(yīng)：青霉素皮試、 異種血清皮試,免疫治療(immunotherapy),針對機(jī)體低下或亢進(jìn)的免疫狀態(tài)，人為地增強(qiáng)或抑制機(jī)體的免疫功能 以達(dá)到治療疾病的治療方法稱之。,免疫調(diào)節(jié)（immunomodulation） 利用物理、化學(xué)和生物學(xué)的手段來調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能，使原有的免疫功能增強(qiáng)或減弱。免疫重建(immunoreconstitution)

14、將免疫功能正常個體的造血干細(xì)胞或淋巴細(xì)胞移植給患有免疫功能缺陷的個體，使后者的免疫功能全部或部分得到恢復(fù)。,,分類,一、免疫增強(qiáng)療法和免疫抑制療法,三、主動免疫治療（active immunotherapy）和被動免疫治療（passive immunotherapy）,二、特異性免疫治療和非特異性免疫治療,（一）免疫增強(qiáng)劑,化學(xué)制劑：1、左旋咪唑 2、西咪替丁,微生物制劑：1、卡介苗（BCG）

15、 2、短小棒狀桿菌 3、微生物提取物,中藥制劑： 黃芪、人參、 枸杞子等,免疫增強(qiáng)劑與免疫抑制劑,免疫因子：1、轉(zhuǎn)移因子 2、免疫核糖核酸 3、胸腺肽,適應(yīng)癥：免疫功能低下的患者 （

16、1）惡性腫瘤 （2）免疫缺陷病 （3）傳染病,副作用：較輕,二、 免疫抑制劑,化學(xué)制劑1、烷化劑：環(huán)磷酰胺2、抗代謝藥：激素：糖皮質(zhì)激素真菌代謝產(chǎn)物1、 環(huán)孢素A：對T，尤其是TH有較好的選擇性抑制作用2、FK-506：其作用強(qiáng)于環(huán)孢素A10-100倍，且與環(huán)孢素A有明顯的協(xié)同作用。 中藥及其有效成分雷公藤多甙,免疫抑制

17、藥物的適應(yīng)癥和副作用,適應(yīng)癥：免疫功能過高引起機(jī)體損害的患者 1、抗移植排斥 2、超敏反應(yīng)性疾病：激素 3、自身免疫病：激素、雷公藤多甙 4、感染性炎癥：激素,副作用：明顯 ，主要是骨髓抑制、肝腎毒性等 其抑制作用是非特異性的，長期應(yīng)用

18、可導(dǎo)致：繼 發(fā)性免疫缺陷 、 嚴(yán)重感染、 腫瘤,抗體為基礎(chǔ)的免疫治療,一、免疫血清抗毒素血清、胎盤（丙種）球蛋白、抗菌免疫血清、抗病毒免疫血清、抗淋巴細(xì)胞丙種球蛋白等,二、單克隆抗體（mAb）：用于靶向治療等。,三、基因工程抗體：降低抗體的免疫原性嵌合抗體、、人源化抗體、單鏈抗體、雙價抗體、雙特異性抗體等,抗原為基礎(chǔ)的免疫治療,細(xì)胞因子及其拮抗劑為基礎(chǔ)的免疫治療,LAK（lymphokine

19、activated killer cells）細(xì)胞——淋巴因子活化的殺傷細(xì)胞。是將外周血淋巴細(xì)胞在體外經(jīng)過IL-2培養(yǎng)后誘導(dǎo)產(chǎn)生的一種新型的殺傷細(xì)胞，具有更強(qiáng)的殺瘤特性。其殺傷腫瘤細(xì)胞不需抗原致敏且無MHC限制性。主要為NK細(xì)胞,TIL(tumorinfiltrating lymphocytes)細(xì)胞——腫瘤侵潤淋巴細(xì)胞。是從實(shí)體瘤組織中分離得到的，經(jīng)體外IL-2培養(yǎng)后獲得比LAK細(xì)胞更強(qiáng)的殺傷活性。,細(xì)胞為基礎(chǔ)的免疫治療,疫苗 ——應(yīng)

20、用微生物制備的具有免疫原性的物質(zhì)。包括滅活疫苗（死疫苗）和減毒活疫苗。如 麻疹疫苗，脊髓灰質(zhì)炎疫苗，乙肝疫苗等。類毒素——將細(xì)菌毒素用甲醛減毒后制備的具有免疫 原性的物質(zhì)。如喉類毒素，破傷風(fēng)類毒素。,（二）人工被動免疫（ artificial passive immunization ）——是給人體注射含特異性抗體的免疫血清或細(xì)胞因子等制劑，以治療或緊急預(yù)防感染的措施。如抗毒素、人免疫球蛋白制劑、細(xì)胞因子制劑、單抗制劑等

21、。,（一）人工主動免疫（artificial active immunization）——用疫苗、類毒素接種機(jī)體，使之產(chǎn)生特異性的免疫，從而預(yù)防感染的措施。,一、人工免疫,（三）計劃免疫,免疫預(yù)防,二、新型疫苗的發(fā)展,三、疫苗的應(yīng)用,1、抗感染2、抗腫瘤3、計劃生育4、防止免疫病理損傷,復(fù) 習(xí) 題,一、名詞解釋 凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)、ELISA、人工主動免疫、 人工被動免疫、類毒素、LAK細(xì)胞、TIL細(xì)胞