血小板血型的檢測

1、復習,血小板血型抗原 血小板相關(guān)抗原：ABO、HLA 血小板特異性抗原HPA,血小板血型的臨床意義,血小板上HLA抗原的同種免疫血小板上ABO血型抗原的同種免疫血小板上HPA抗原的同種免疫血小板上ABH,HLA,HPA抗原均可引起免疫反應;免疫反應程度不一;免疫反應強弱程度的影響因素尚不清楚,血小板血型抗體,血小板抗體也可以分為兩類 一類主要是針對人類組織相容性抗原(HLA)I類抗原的抗體，即血小板相關(guān)抗體

2、（PAIgG） 一類是針對GP抗原(血小板膜糖蛋白，攜帶HPA分子）的血小板特異性抗體，稱為PBIgG,兩次或以上血小板輸注無效且無明顯非免疫因素導致↓檢測患者血清中是否存在HLA抗體血清中存在HLA抗體 血清中不存在HLA抗體↓ ↓HLA相符的血小板輸注

3、 進一步分析非免疫因素 ↓ ↓ ↓ ↓效果良好 效果不好 是 不是↓ ↓ ↓ ↓ 繼續(xù) 考慮1、HLA不合

4、 治療病因 HPA抗體檢測 2、非免疫因素 根據(jù)臨床實際情況 ↓ ↓ 3、HPA 選擇是否繼續(xù)進行 陽性 陰性 4、ABO 血小板輸注 ↓ ↓

5、 HPA相符 HLA相符,二者區(qū)別同種異體免疫 輸入的血小板很快破壞，輸注后1小時 和24小時均不見計數(shù)增高非免疫因素 輸注后1小時血小板計數(shù)增高，但24小時計數(shù)不增高或

6、受影響,臨床上由于血小板血型抗原引起的血小板減少癥主要有5種：血小板輸注無效（PTR）輸血后紫癜（PTP）新生兒同種免疫血小板減少癥（FMAIT/NAIT）被動免疫血小板減少癥（PAT）移植相關(guān)的同種免疫血小板減少癥（TAT),二、輸血后紫癜,輸血后血小板減少性紫癜(post-transfusion thrombocytopenic purpura，PTTP)，又稱“輸血后紫癜”, Post-transfusion purp

7、ura, PTP: 由于血小板輸注后發(fā)生同種免疫反應所致，一般發(fā)病率低?；颊弑惠斎氩幌嗳莸难“?全血或多次妊娠而產(chǎn)生血小板抗體，破壞輸入的和自身血小板而導致急性和暫時性血小板減少。患者多見于（95%)有多次妊娠或輸血史的老年女性。,PTP的病因尚未明確，有數(shù)種假說。 抗體致敏形成的血小板抗原抗體復合物與自身正常血小板結(jié)合導致血小板破壞 可溶性血小板吸附于正常血小板上，與血小板抗體反應后導致血小板的破壞 血小板抗體與自身

8、和外源性血小板交叉反應,HPA-1a是引起該病的主要抗原。我國絕大部分人為HPA-1a抗原陽性。實驗室檢查：血小板計數(shù)降低、骨髓巨核細胞增生活躍、血清學檢查血小板抗體存在但效價和病情無關(guān)。,臨床表現(xiàn),輸入含血小板的血液制品后7～10天發(fā)病。有明顯的免疫反應癥狀，如畏寒、寒戰(zhàn)、高熱、蕁麻疹，重者有頭痛、胸痛、呼吸困難甚至休克。繼而血小板明顯急性減少，有不同程度的出血表現(xiàn)，皮膚淤點、淤斑，口腔、鼻腔出血，舌黏膜出現(xiàn)血皰，重者可以有血尿、消

9、化道出血或陰道出血；患者體內(nèi)可檢出高效價的血小板特異性抗體并存著自身血小板的破壞，當血小板計數(shù)低于10X109/L時，會出現(xiàn)皮下或刀口出血，如不及時處理患者可能死亡，死亡率大約在 5%-10%。,本病輸血小板無效，甚至有加重病情的危險，腎上腺皮質(zhì)激素不能縮短病程，但是，有可能改善出血癥狀。主要治療措施為血漿置換或換血，換血漿優(yōu)于換全血。在輸血后血小板顯著減少和發(fā)生嚴重出血癥狀時，應立刻做血漿置換，一次交換65%～85%的血漿量，平均

10、在1～5天后出血癥狀減退，血小板數(shù)目上升。盡可能避免或減少輸注血小板及含血小板的血液制品。,大多數(shù)PTP為針對HPA—la的同種抗體所致2002年英國報道了第2例表現(xiàn)為抗HPA一5a相關(guān)PTP。6l歲女性診斷為急性心肌梗塞伴胃腸道出血，在接受6單位壓積紅細胞5天后，由于HPA一5a抗體發(fā)展成PTP，表現(xiàn)為嚴重的血小板減少癥(5000／UL)。采用靜脈內(nèi)注射免疫球蛋治療很成功，提示無論患者發(fā)病為何種抗體，這種治療方法對于PTP患者的治

11、療是高度有效,三、新生兒同種免疫血小板減少癥(FMAIT/NAIT),Neonatal alloimmune thrombocytopenia, NAIT foetal maternal alloimmune thrombocytopenia, FMAIT發(fā)病機制:,胎兒血小板↓懷孕或生產(chǎn)時進入母體循環(huán)↓胎兒血小板刺激母體產(chǎn)生抗體↓母親IgG抗體通過胎盤進入胎兒體內(nèi)使胎兒血小板致敏↓血小板破壞增加↓發(fā)生FAI

12、T,第一胎即可發(fā)病；病死率約13%；治療：輸入相合的血小板以提高患兒的血小板數(shù)，如找不到相合的血小板，可以輸注經(jīng)洗滌和輻射的母親血小板，也可給患兒做放血治療；治療前交叉配血：以母親血清與供者血小板進行交叉配合試驗；預防：母親在孕期可進行血漿置換。,病例介紹：,患兒，女性，1994年6月3日生 足月順產(chǎn)，出生體重3.1kg，身高49cm，一般情況尚好，無血管瘤，無肝脾腫大，軀體可見廣泛的紫癜。外周血血小板計數(shù)為4．0×1

13、09，紅細胞和白細胞計數(shù)正常；腹部超聲檢查未見血管瘤和其它異常，腦超聲檢查示出血可能。以輸注同型血小板(隨機供者)和高劑量免疫球蛋白治療(每24小時1g／kg)，病情得到控制 6月12日出院，出院時血小板計數(shù)為154×109／L。,患兒母親．28歲。第1胎第1產(chǎn)，身體健康，血小板計數(shù)為226×109／I ，無不良嗜好．乙型肝炎病毒(HBV)檢測陰性．從來接受過輸血或其它血制品治療．懷孕期間無毒物接觸史。,四、

14、被動免疫血小板減少癥,Passive alloimmune thrombocytopenia, PAT: 患者輸入含有血小板特異性抗體的血漿，在數(shù)個小時之內(nèi)出現(xiàn)血小板減少癥，約一周后緩解。一旦發(fā)現(xiàn)獻血員血漿、血清中含有血小板特異性抗體應立即停止獻血，這類獻血員多為有妊娠史。,一例因輸全血導致的被動免疫血小板減少癥,患兒男，6歲。因畏寒、發(fā)熱、食欲不振1周^院。體檢：T39℃ ，P82次／分，心肺正常，肝脾無腫大。輔助檢查：PLTl47

15、×109／L，Hb89g/L，RBC3．43×109／L，血肥達氏反應01：160，H1：320．傷寒LPS—PHA試驗陽性(1：640)：骨髓常規(guī)提示感染。診斷：傷寒。予先鋒霉素靜脈滴注及對癥處理。,因患兒有中度營養(yǎng)不良．在體溫正常后第6天輸同型鮮血100ml，輸血10分鐘后出現(xiàn)畏寒、寒故，肌注非那更15mg緩解。次晨患兒全身皮膚廣泛出血點，臂部、前胸、腋下大片瘀斑，查PLT為32×109／L，8小時后降

16、至12×109／1 ，血Hbl03g／L．RBC4.0×109／L，PT、KPTT正常，尿潛血、尿三膽、尿FDP均陰性。予地塞米松4rng／d及vit C靜脈滴注1O天，紫癜隱退，plt回升至135×109／L(血小板動態(tài)變化見圖)。,移植相關(guān)的同種免疫血小板減少癥,Transplantation-associated alloimmune thrombocytopenia, TAT: 移植后因血小

17、板抗原引起的血小板減少癥；該病較罕見。 官接受者的淋巴細胞產(chǎn)生抗外來移植物（血小板）的特異性抗體；或供體器官中殘留的淋巴細胞產(chǎn)生抗宿主血小板的抗體 免疫球蛋白療法和脾切除法能使血小板計數(shù)正常化。,血小板自身免疫作用,血小板自身免疫作用可產(chǎn)生特發(fā)性血小板減少性紫癜（Idiopathic thrombocytopenic purpura, ITP).自身免疫性疾病，患者體內(nèi)存在抗自己血小板的特異性抗體導致血液中血小板減少，為臨床最

18、常見的免疫性血小板減少癥?？贵w多為IgG、IgA，少數(shù)病人為IgM抗體。抗體的Fab片段和血小板膜糖蛋白結(jié)合后使得血小板抗體復合物經(jīng)單核吞噬系統(tǒng)（由Fc段和其受體結(jié)合）被吞噬破壞。,本病以皮膚粘膜下及其他部位出血為主要表現(xiàn)。      1.急性型。多見于兒童，發(fā)病前l(fā)－3周常有上呼吸道及其他病毒感染史。起病急，出血嚴重。突發(fā)廣泛的皮膚粘膜血點或成片瘀斑。甚至皮下血腫。常伴

19、有鼻衄、牙齦出血等。胃腸和泌尿道出血可見便血及尿血。偶見結(jié)膜下、視網(wǎng)膜出血。少數(shù)患者同時伴有內(nèi)臟或顱內(nèi)出血而出現(xiàn)嚴重的不良后果。    2.慢性型。多見于成人，病程為６個月以上。起病緩。出血癥狀輕，一般僅見皮膚瘀點或瘀斑反復發(fā)作性出現(xiàn)，或常見鼻衄、齒齦出血、結(jié)膜出血等其他出血傾向。女性患者可以月經(jīng)過多或子宮出血為主要表現(xiàn)。長期反復大量出血而引起貧血者，可出現(xiàn)低熱、乏力、頭昏、失眠及脾腫大等,至

20、今未能證明ITP相關(guān)自身抗體的特異性。有研究表明，ITP相關(guān)抗體有些是自身隱蔽抗原的抗體。速發(fā)型ITP多見于感染后兒童，癥狀多樣，超過90%的病例預后良好，死亡率＜1%。慢性ITP多由于淋巴組織增生、占位性腫瘤及其他自身免疫疾病。其預后基于出血程度。,藥物所致血小板抗體及疾病,1929年證明了奎寧引起血小板減少癥；1953年證明了奎寧引起的血小板減少癥患者血清中存在該藥引起的抗體,抗體、藥品、血小板反應的機制：機制未完全清楚藥

21、品作為一種半抗原和血小板膜形成復合物，產(chǎn)生的抗體識別該復合物進而使血小板破壞；血小板膜上的奎寧引起血小板膜隱蔽的抗原暴露，形成新的血小板抗原，刺激機體產(chǎn)生抗體導致血小板破壞,血小板血型的檢測,血小板血型檢測,抗體的篩選和鑒定交叉配血血型鑒定,血小板抗體檢查,正確檢測出血清中血小板抗體及其特異性對獲得有效的血小板輸注是至管重要的。目前的檢測方法多種： 免疫熒光、ELISA、SPISA、Micro-column gel、SEPSA等

22、。,1、血小板黏附免疫熒光試驗Platelet adherence immunofluorescence test PAIFT,原理為用已知血小板黏附于一種特殊的玻璃孔中，和被檢血清反應后洗凈，使用熒光素標記的兔抗人IgG免疫球蛋白避光靜置后在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。該方法為早期的檢測血小板抗體的敏感方法，1986年國際血小板血清學會將其作為標準的參考方法，并規(guī)定任何新方法應和其進行比較。,2、簡易致敏紅細胞血小板血清學試驗SEPSA

23、,原理：在微孔板上進行，血小板固定在孔壁上，與被檢血清反應后以抗IgG指示細胞反應得到結(jié)果如果血小板上無抗體 ，則指示細胞聚集在孔底 ，形成細胞扣 ，為陰性結(jié)果，反之則為陽性。,該方法檢測的是所有血小板相關(guān)抗體,包括特異性血小板抗體和HLA 抗體, 適用于廣泛的血小板抗體篩查血小板附著在固相中，造成部分特異性抗原決定簇丟失現(xiàn)象。利用磷酸氯喹溶液處理血小板, 除去血小板表面的HLA 抗原, 對該方法進行了優(yōu)化。耗時較長, 靈敏性差,

24、 目前已很少采用。,3、修飾的抗原捕獲酶聯(lián)免疫吸附試試驗（Modified antige capture ELISA,MACE）,1 洗滌PLT,制備50%PLT懸液.2 PLT與患者血清或血漿在管內(nèi)發(fā)生反應,若有相應抗體,則結(jié)合到PLT上形成復合分子.3 洗滌去掉其中未結(jié)合的Ig.4 裂解PLT,游離出抗原-抗體復合分子.5 加裂解液到相應的微孔內(nèi),孔壁上包被的抗體可結(jié)合(抓獲)其中的抗原或抗原-抗體復合分子.6

25、 洗滌,去掉未結(jié)合的Ig.7 加酶標二抗(anti-Ig),結(jié)合到抗原-抗體復合分子上,形成一條反應鏈;病人血液中無相應的抗體,則反應鏈不成立.8 洗滌去掉未結(jié)合的二抗.9 加底物顯色.10 終止反應,測OD值,判斷結(jié)果.,ELISA for Platelet Antibody Detection,單克隆抗體固著血小板抗原分析McAb immobilization of platelet antigen,MAIPA原理類

26、似于MACE，但更復雜。 同MACE一樣,由于血清中抗體是與完整的血小板細胞反應,而不是附著在固相中, 避免了部分特異性抗原決定簇丟失現(xiàn)象發(fā)生,因此,MACE和MAIPA較固相吸附實驗更有優(yōu)勢.,實驗過程,血小板與血清孵育、離心、洗滌再與鼠抗血小板單克隆抗體孵育，離心洗滌后，加入裂解液使血小板裂解將裂解的血小板加入已包被了羊抗鼠IgG的多孔板包被羊抗鼠IgG的多孔板俘獲單抗加入酶標的羊抗人IgG,MAIPA原理：洗滌過的完整

27、的血小板與人血清孵育(以HPA-1a抗體為例)，單克隆抗體與與相應糖蛋白結(jié)合（以GPIIb/IIIa為例）。裂解血小板，將上清加入先前包被抗鼠的IgG，用過氧化物酶標記的抗人IgG檢測結(jié)合在糖蛋白上的人抗體，用合適的顯色劑顯色。,優(yōu)點：避免血小板附著在固相中造成的部分特異性抗原決定簇丟失現(xiàn)象?？蓹z測血小板抗原。缺點：如果被檢血清中抗血小板抗體與鼠單克隆抗體識別同一抗原決定簇，它們將競爭結(jié)合位點，即可出現(xiàn)假陰性反應,MAIPA 法由于檢

28、測血小板相關(guān)抗體特異性強, 尤其可以區(qū)分多種抗體, 被認為是檢測血小板抗體的金標準； 但其操作步驟繁瑣, 耗時長, 技術(shù)要求高, 只在少數(shù)參比實驗室應用,Flow cytometry流式細胞儀檢測,應用流式細胞儀免疫熒光技術(shù)檢測血小板抗原抗體反應結(jié)果更為準確，可以定量檢測。完整的血小板與患者血清孵育，洗滌，加入熒光標記的抗人球蛋白試劑，以檢測血小板是否結(jié)合了特異性血小板抗體。缺點：流式細胞儀(FCM)檢測相對費用仍較昂貴，不能在臨

29、床廣泛推廣。在血小板嚴重減少時，測定區(qū)中非血小板成分有所增加，針對淋巴細胞的IgG可被誤認為PAIgG，血液中的細胞碎片對試驗有干擾。,微柱凝膠間接免疫分析技術(shù)Microcolumn gel immunoassay,MGIA,MGIA原理：微柱凝膠中依次加入受檢者血清、血小板和指示紅細胞．指示紅細胞上包被有動物抗人血小板抗體，該抗體 Fc段結(jié)合在人紅細胞膜上，F(xiàn)ab段與血小板結(jié)合，如果受檢者血清中存在抗血小板抗體，該抗體 Fab段亦與

30、血小板結(jié)合 ，相鄰 的抗體 Fc段通過抗人球蛋白搭橋連接成網(wǎng)絡(luò)狀凝集復合物，通過離心，該復合物浮于凝膠表面或位于膠中為陽性，如果受檢者血清中無血小板抗體，則不能形成網(wǎng)絡(luò)狀血凝復合物 ，指示紅細胞沉于微柱凝膠管尖底部為陰性；,結(jié)果判讀模式,血小板血型檢測血清學方法評價,血清學方法從實驗原理分析，多采用從富血小板血漿中提取血小板來包被反應板，進一步用直接法或間接法檢測相應抗體，特異性和 (或)敏感度不高文獻報道，MAIPA法的特異度為85

31、％ ，但敏感度僅為47％ ，且耗時耗力。SEPSA方法的敏感度僅為39．4％ ，至少需要血小板1 X 107。,血小板在制備過程中部分活化產(chǎn)生脫顆粒作用，抗原結(jié)構(gòu)的主要成分發(fā)生相應構(gòu)象改變，造成抗體檢出率降低;血小板本身的聚集而產(chǎn)生不均勻包被的情況，抗體在微板反應孔的表面上有非特異性吸附，使背景信號加強，導致結(jié)果判讀陰性本底增高，假陰性增多單克隆抗體的覆蓋面窄，抗原的檢出受到限制血清Ig非特異性吸附于血小板靶抗原是該類試驗的共同問

32、題。,血小板交叉配血：,檢測受者血清中是否存在針對供者血小板的抗體，或供者血清中是否存在受者血小板抗原相應的抗體，同紅細胞交叉配血一樣，前者為主側(cè)交叉，后者為次側(cè)交叉。,血小板交叉配血：一般可以采用SEPSA、和MGIA法進行血小板交叉配血試驗，以避免由于血小板抗體或HLA相關(guān)抗體所致的血小板輸血反應或輸注無效。,血小板抗體檢測和血小板交叉配型試劑盒（固相凝集法）,檢驗原理：反應板中包被有血小板鼠單克隆抗體（針對血小板表面糖蛋白II

33、b/IIIa,Ib/V/IX），血小板經(jīng)離心洗滌后可在反應板中形成血小板單層。加入待檢血清，在板中經(jīng)過孵育后，若該血清中不含有血小板抗體則經(jīng)過洗滌被去除；若含有血小板抗體，則該抗體與反應板中的血小板結(jié)合，加入抗人IgG及人IgG致敏紅細胞（指示細胞）經(jīng)離心后指示細胞結(jié)合到血小板單層上。因此陽性反應為指示細胞均勻鋪在反應孔底部，而陰性反應為指示細胞在反應孔底部中間形成紅細胞聚集。,主要組成成份1、反應板………………………8孔×

34、12        2、低離子介質(zhì)………………10ml×13、指示細胞……………………6ml×1          4、抗人IgG ……………………6ml×15、陰性對照……………………1ml×1  &#

35、160;       6、陽性對照…………………  1ml×17、30×濃縮洗滌液……………10ml×1,產(chǎn)品特點1、操作簡便、穩(wěn)定性好，時間短，結(jié)果可靠，易于判讀；2、抗人IgG為多克隆抗體，敏感性強，準確性高；3、可用于大量樣本的檢測，重復性好；4、對儀器要求簡單，適用于血站、醫(yī)院、實驗室,與HLA配合試驗相比，交叉配血

36、方法更經(jīng)濟和方便；能夠避免HLA血型不配合，但是相容的血小板；但當患者血清對超過70%的獻血者血小板反應時，也只能用HLA配合試驗；首先檢測這些反應是否血小板抗體所致，如果是，則應學則已知血小板血型的供者或在親屬中選擇合適的血小板供者。為避免輸血相關(guān)的移植物抗宿主病，可先將親屬血小板輻射后使用。,血小板抗原檢測,血清學方法分子生物學方法,血清學HPA分型價值有限因為從血小板減少癥的患者中僅能獲得極為少量的血小板而且除HPA-

37、1a和HPA-5b之外，可靠的HPA血清學分型試劑很少；HPA抗血清中常常含有HLA-I類抗體，將它們用于GP特異性試驗，如血小板抗原的單克隆抗體固定試驗（MAIPA）具有局限性。單克隆抗體雖現(xiàn)已常規(guī)用于紅細胞表型分型試驗，但除了HPA-1a之外，還沒有一種單克隆抗體用于HPA分型。然而，最近發(fā)表了關(guān)于使用多克隆抗體或重組抗HPA-1a進行快速篩選試驗的幾種方法。這些表型分型試驗可互補基因分型試驗以備HPA配選供者之用。,相反，HP

38、A基因分型能夠從任何合適的細胞中獲取基因組DNA而實現(xiàn)，而且可以使用商業(yè)試劑盒。22個血小板特異性抗原的分子基礎(chǔ)已確定，并且其中的21個被證實是SNP。已有許多技術(shù)用于SNP分型，其中幾種已用于HPA基因分型，盡管僅有幾項得到廣泛應用。PCR序列特異性引物分析（PCR－SSP），由于其簡單易行而被許多實驗室所采用，在同樣的PCR條件下能夠檢測多種HPA基因型的操作程序已有報道。,血小板抗原基因檢測,血小板抗原多態(tài)性源于編碼基因的單個核苷

39、酸置換，為血小板抗原基因檢測創(chuàng)造了良好的條件。正好也補充了血小板檢測免疫血清學手段不足的缺陷。除HPA14bw外，其他HPA基因都表現(xiàn)出單核苷酸多態(tài)性，因此，檢測SNP的方法適用于HPA檢測基因分型檢測不要特異性的血清抗體。,PCR-SSP：PCR序列特異性引物技術(shù)(PCR．SSP)，此技術(shù)采用序列特異性引物(SSP)，SSP的3端具有獨一無二的序列，在退火時只能與某特定等位基因結(jié)合，因此能夠特異性地擴增HPA基因，然后通過凝膠電泳

40、檢測PCR產(chǎn)物，根據(jù)是否得到PCR產(chǎn)物，以及產(chǎn)物的片段大小來判斷HPA基因型。方法簡便、快速、錯誤率低，是目前采用的HPA基因分型方法中的首選方法 ，對HPA 1．5系統(tǒng)均可以進行基因分型，特別是針對GpⅡb／II1a抗體與血小板同源表位分析的研究。,PCR-特異性寡核苷酸探針雜交分析(PCR-SSOP)：此方法的第一步是使用PCR擴增某一段HPA基因，然后通過與順序特異性寡核苷酸探針的雜交來鑒定HPA型，如檢測HPA1-4。由于檢測結(jié)

41、果與探針的序列以及試驗條件密切相關(guān)，需要嚴格控制雜交溫度和時間,PCR-限制性片段長度多態(tài)性分析(PCR．RFLP):使用PCR擴增HPA基因片段后，用特定的限制性內(nèi)切酶水解，然后凝膠電泳分離被酶解的DNA片段，根據(jù)這些片段的分布格局指定相應的基因型．因為雙等位基因中的一條就包含一個特異性限制性位點，所以對HPA．1、2、3和7系統(tǒng)就可以使用PCR．RFLP方法。此方法較PCR．SSP增加了內(nèi)切酶水解步驟，如果酶解不完全將得錯誤結(jié)果。此

42、外，并非每個HPA等位基因都有適當?shù)拿盖悬c。,血小板抗體的檢測技術(shù)無論是檢測血小板自身抗體，還是檢測血小板同種抗體，都比檢測其他血液成分抗體困難得多。雖然現(xiàn)存的檢測技術(shù)很多，但至今還沒有一種真正具有臨床實用價值的血清學檢測方法;現(xiàn)有的技術(shù)和方法所得的結(jié)果差異較大;分子生物學的方法可以預測血小板血型的表現(xiàn)型，但實際的血型抗原卻無法用該技術(shù)檢測，而且DNA技術(shù)不能用于抗體的篩選，至少目前還沒有合適的分子生物學方法可用 技術(shù)上要求很高

43、，不適合臨床實驗室常規(guī)應用。,血小板血型檢測方法評價,血小板血清學檢測落后的原因,試劑的原因 至今仍是人免疫血清試劑,沒有研制成功抗HPA的單克隆抗體，已經(jīng)研制成功的單抗都是抗血小板糖蛋白的血型抗原載體的單克隆抗體。因此，抗人血小板血型抗體在世界范圍內(nèi)都比較短缺和珍貴。目前尚無特異性高、純度高的試劑。,血小板血清學檢測落后的原因方法學問題。目前尚無有效方法高速、準確測定血小板抗體。目前世界范圍內(nèi)推薦兩種方法：抗體固著血

44、小板抗原分析；使用流式細胞儀進行熒光分析。缺點：操作復雜、耗時、試劑依賴進口價格昂貴，難以在臨床上常規(guī)使用。,1. 1病例和血液標本 7名患者( 編號A-G )分別在四川大學華西附二院、四川省人民醫(yī)院和成都市兒童醫(yī)院等住院治療?；颊呔休斞泛脱“遢斪⑹??；颊咭蜓“鍞?shù)低,或因有出血征兆, 申請血小板配型輸注。我們采集患者血液標本檢查有關(guān)抗體, 并進行血小板配型輸注治療(除患者G為特發(fā)性血小板減少性紫癜( ITP), 未接受輸注

45、治療外)。,1. 2核酸提取 用美國Gentra試劑提取患者和血小板供者血液標本中DNA。1. 3 HLA、HPA 抗原基因分型檢測 采用美國G&T 公司的HLA-A、B、DR 基因分型試劑和HPA1-16基因分型試劑對患者和血小板供者進行HLA、HPA 抗原基因分型。1. 4血小板相關(guān)抗體( PA IgG)檢測 用上海血液中心提供的SEPSA試劑檢測患者血清中PAIgG,1. 5 抗HLA抗體、部分HPA同種抗體檢測 用P

46、AK12試劑對患者血清中可能存在的HLA抗體和部分HPA 特異抗體(H PA􀀂1a、􀀂1b、􀀂3a、􀀂3b、􀀂5a、􀀂5b抗體)進行檢測。1. 6血小板供者篩選和配型輸注 從100 名已定型的血小板供者庫中挑選與患者ABO血型相同, HLA和H PA基因位點最大相合的血小板供者, 采集血小板, 進行血小板配型輸注治療。,多次輸血

47、的患者會產(chǎn)生血小板抗體, 是同種免疫引起血小板減少的主要原因。臨床表現(xiàn)為患者血小板輸注無效以及血小板減少等。本研究中除患者F未做血小板相關(guān)抗體檢測外, 其余6位患者( 包括1名IPT患者)都檢測出至少有1種血小板相關(guān)抗體, 抗體陽性率100%。在血小板輸注治療時, 存在不同程度的同種免疫性血小板減少。孫曉明等也報道血小板相關(guān)抗體與患者血小板輸注無效有關(guān)。所以,進行血小板配型輸注治療十分必要, 一則可提高血小板輸注療效; 二則可減少和預防

48、輸血引起的同種免疫反應, 對患者今后輸血治療有益。,討論,我們歸納了6名患者10次血小板輸注的療效, 其輸注后24h Plt增加和CC I值變化較大。除1 次血小板輸注外,輸注后患者的Plt都有不同程度的提高( 平均為10 x 109 /L)。按24h CC I值> 4.5 x 109 /L的標準, 有5次血小板輸注有效。,同種免疫只是影響血小板輸注療效的眾多因素之一。每次血小板輸注療效都要具體分析。例如, 患者D 與供者HLA完

49、全不合、HPA不合, 又有PA IgG、HLA-I、HPA抗體, 導致血小板輸注無效( CC I為0.72 )?；颊逨在骨髓移植后的1個月內(nèi), 一直伴有低燒, 血小板數(shù)很低, 隔天輸注機采血小板1袋, 其血小板數(shù)緩慢升高, 但沒有出血癥狀發(fā)生, 可以認為其血小板輸注對防止出血是有效的。,Schlossberg的調(diào)查也證明, 2 /3的骨髓移植患者在輸注血小板24h 后CC I值遠< 4.5 x 109 /L。觀察血小板數(shù)增加只是評

50、價血小板輸注療效的一個指標, 應該結(jié)合臨床情況進行綜合評價。目前, 國內(nèi)外都有機構(gòu)建立了一定規(guī)模的已定型血小板供者庫, 用于血小板配型輸注治療。我們的100人供者庫, 在配型挑選上無法滿足實際需要。尤其是H LA 配型, 最多也只有3個位點相合, 多數(shù)情況只有1-2 個位點相合, 結(jié)合H PA配型和血小板抗體交叉配型, 難以達到血小板配型輸注的要求, 在一定程度上削弱了輸注療效。因此擺在我們面前的一個問題是要擴大供者庫, 以盡量滿足患

51、者的需要。,總結(jié)（1）,對于不相合的紅細胞輸注，人們肯定不能容忍，而對于不相合的血小板輸注，人們卻認為是常規(guī)。 事實上，血小板輸注無效，往往也伴隨著死亡――出血而亡。,總結(jié)（2）,臨床上血小板輸注無效通常是非免疫性因素引起的。同種免疫性血小板輸注無效多由HLA抗體引起 。輸血和妊娠是引起HLA同種免疫兩種主要的危險因素。,總結(jié)（3）,對血小板抗體進行篩選和鑒定，而后選擇相應抗原陰性的血小板進行交叉配型，陰性者進行輸注，這種類似于目

52、前紅細胞配血的方法，是最有效的PTR應對策略。,我國目前血小板檢測中存在的問題,三個不知道患者和獻血者都不知道血小板血型血小板與疾病的關(guān)系并無詳細的研究報道臨床很多時候?qū)颊卟恢罊z測哪個血小板血型,我國血小板輸注存在的問題,血小板血型與疾病之間相關(guān)性沒有詳細的報道和宣傳；臨床上很多情況下不知道檢測患者血小板血型；大多數(shù)血站和醫(yī)院輸血科在患者和獻血者的血小板血型都不清楚的情況下，就進行血小板輸注，其遵循的原則就是ABO同型即

53、可就進行血小板輸注，很少進行HLA、HPA交叉配型以尋找相匹配的血小板，所以臨床上出現(xiàn)了許多血小板輸注無效癥以及血小板免疫性疾病難以診斷的問題；在我國，很少的城市和地區(qū)設(shè)立血小板供者庫。,隨著單采血小板臨床輸血量的逐年上升，血小板輸血反應和輸注無效問題日益突出。臨床上為盡量減少血小板輸血反應或輸注無效，必須做好血小板輸注前的標本檢查和交叉配血試驗。,建議解決方式：,提高臨床醫(yī)生、中心血站工作人員對血小板不配型輸注可能引發(fā)嚴重后果的充分