消毒劑使用及效力驗證

1、消毒劑使用及效力驗證,,2,能消除以細胞繁殖形態(tài)出現(xiàn)的微生 物污染的化學物質(zhì)。,消毒劑的習慣定義：,3,消毒劑的分類定義（USP29 ）,抗菌劑（Antiseptic)化學殺菌劑(Chemical Disinfectant)清潔劑(Cleaning Agent)消毒劑(Disinfectant)衛(wèi)生洗滌劑(Sanitizing Agent)殺孢子劑(Sporicidal Agent)滅菌劑(Sterilant

2、Agent),4,5,消毒劑配制,按供應商的使用說明進行配制和儲存純化水、注射用水潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境使用，應進行除菌過濾。溫度提高，殺菌效力增大。效力驗證時，在常溫下配制。,6,影響消毒劑效力的因素：,pH溫度，濃度材質(zhì)和附著物質(zhì)溶劑（水）接觸時間微生物的類型和數(shù)量,7,消毒劑作用機理,鈍化胞內(nèi)酶活性，影響細胞的正常代謝酚類阻斷物質(zhì)運輸通道季銨鹽類（＋電荷），附著于細胞膜特定部分（－電荷）破壞微生物細胞（膜）的

3、結(jié)構(gòu)和功能醛類、含氯、過氧化物,8,微生物對消毒劑的耐受性,形成生物膜粘性多糖物質(zhì)消毒劑的相互作用中和反應固有耐受性和概率殘存致死劑量,9,微生物抗力,由小到大排列一般為：細菌繁殖體真菌繁殖體真菌孢子病毒分枝桿菌細菌芽孢,10,消毒劑的選擇,需控制的微生物的類型和數(shù)量市售消毒劑的抗菌譜消毒劑的品牌濃度、使用方法和接觸時間待消毒物體的材質(zhì)和對消毒劑的兼容性可能影響殺菌效力的表面有機物數(shù)量反復使用，對設備

4、表面的腐蝕程度對操作者的安全性和清潔劑/其它消毒劑的相容性交替使用方案和對產(chǎn)品的影響,11,消毒劑驗證的目的： 通過特定的微生物與某消毒劑在規(guī)定的使用濃度下，接觸規(guī)定的時間后，對微生物進行培養(yǎng)、計數(shù)，考察消毒劑的消毒/殺菌效果。,12,消毒劑驗證的內(nèi)容：,使用中稀釋檢測（use-dilution tests)對不同濃度下，對消毒劑的效力進行篩選針對不同標準菌株和環(huán)境微生物，確認接觸時間表面挑戰(zhàn)試驗（surface c

5、hallenge tests)使用標準菌株和典型環(huán)境分離微生物選擇合適的濃度和接觸時間，進行試驗獲得挑戰(zhàn)微生物數(shù)量下降的對數(shù)值對使用新消毒劑前后環(huán)境微生物的檢出頻率和數(shù)量進行統(tǒng)計學評估（無菌生產(chǎn)區(qū)域、GMP要求）,13,消毒劑驗證步驟：第一步：在實驗室對代表細菌在規(guī)定的使用濃 度和規(guī)定的作用時間進行確認。第二步：應用不同材質(zhì)的載體，進行模擬試驗第三步：完成驗證報告，形成SOP。,,14,驗證

6、用菌種：金黃色葡萄球菌、銅綠色假單胞菌、沙門氏菌、大腸埃希菌、枯草桿菌、白色念珠菌、黑曲霉、環(huán)境分離菌。菌種選擇的原則:代表性,普遍性,標準菌種。(環(huán)境中常見的污染菌)。菌種的要求：不得超過5代。采用適宜的方法保存。,驗證菌種：,15,挑戰(zhàn)微生物(USP 29),16,準備性試驗（一）,選擇適合的中和劑Letheen肉湯、D/E中和肉湯（酚類，季銨鹽類）、TAT肉湯基礎＋吐溫20＋卵磷脂＋胰蛋白胨,17,D/E中和肉湯（每升）,配

7、方胰蛋白胨 5 g酵母膏 2.5 g葡萄糖 10 g硫乙醇酸鈉 1 g硫代硫酸鈉 6 g亞硫酸氫鈉2.5 g吐溫 80 5 g卵磷脂 7 g溴甲酚紫 0.02 g最終 pH 7.6?0.2 于 25℃,18,準備性試驗（二）,中和劑毒性將10～100 CFU的微生物加入到中和劑中薄膜過濾，沖洗，培養(yǎng)，計數(shù)與菌液對照組比較，回收率應>70％,19,準備性試驗（三）,中和效力將消毒劑和中和劑混合（記錄時間）

8、加入10～100 CFU微生物薄膜過濾，沖洗，培養(yǎng)，計數(shù)與菌液對照組比較，回收率應>70％,20,驗證方法 - 薄膜過濾法,菌懸液和消毒劑直接混合，在不同的時間間隔條件下過濾，培養(yǎng)后評價。,21,驗證準備：,- 測試菌液準備 增菌過夜，并調(diào)整至106～108 CFU/ml - 消毒劑稀釋至規(guī)定濃度。 分裝10ml于若干無菌試管中；試管上標注消毒時間：如“1分鐘組” ，“5分鐘組” ，“10分鐘組”或其他要求

9、的時間段。- 配制中和劑（分裝100ml，300ml）,22,驗證步驟（1）：,- 接種 接種各驗證菌種至盛有待驗證消毒劑的試管（使接后濃度>104 CFU/ml)，混合均勻，并立即開始計時。- 中和、過濾將消毒劑傾入100ml中和劑中，混合，稀釋（如需要），過濾，然后用100ml中和劑清洗濾膜，濾過3次。- 陽性對照 用無菌水代替消毒劑，步驟同上。,23,驗證步驟（2）：,培養(yǎng)和計數(shù) 取下濾膜放入規(guī)定的培

10、養(yǎng)基平板，在規(guī)定的溫度、時間培養(yǎng)后，記數(shù)。和陽性對照相比，微生物數(shù)量下降應至少3個對數(shù)值（細菌芽孢至少2個對數(shù)值）。,24,驗證步驟（3）：表面挑戰(zhàn)試驗,,根據(jù)設施的實際情況，選擇不同材質(zhì)的載體。玻璃，不銹鋼，塑料薄膜，乳膠，墻面涂料，地面材質(zhì)接種，并確認實際數(shù)量接觸殺菌、中和、過濾……,25,正確使用消毒劑（1）,稀釋消毒劑時應用純化水、注射用水設備使用后作徹底清潔將環(huán)境常見菌列入驗證范疇輪換使用不同的消毒劑，消毒劑間要