醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)一抗原抗體反應(yīng)

1、醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn),病原生物學(xué)與免疫學(xué)教研室Tel:姓名,第一講抗原抗體反應(yīng)antigen-antibody reaction,什么是抗原抗體反應(yīng)？,抗原與相應(yīng)抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)稱(chēng)為抗原抗體反應(yīng)?？乖贵w反應(yīng)既可在體內(nèi)作為體液免疫應(yīng)答的效應(yīng)機(jī)制自然發(fā)生，也可在體外作為免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果出現(xiàn)。在體內(nèi)，可表現(xiàn)為溶菌、殺菌、促進(jìn)吞噬或中和毒素等作用，有時(shí)亦可引起免疫病理?yè)p傷，在體外，依相應(yīng)抗原物理性狀 (顆粒狀或可溶性)以及反應(yīng)的條件 (

2、電解質(zhì)、補(bǔ)體等)不同，可出現(xiàn)凝集、沉淀、細(xì)胞溶解和補(bǔ)體結(jié)合等反應(yīng)。,抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn),1. 特異性,Ab 1Ab2Ab3,抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn),2.比例 性,抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn),3.可逆性,,,,體外抗原抗體反應(yīng)的影響因素,電 解 質(zhì),溫 度,酸 堿 度,作用時(shí)間,抗原抗體反應(yīng)類(lèi)型,可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合所產(chǎn)生的沉淀反應(yīng)顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合所發(fā)生的凝集反應(yīng)抗原抗體結(jié)合后激活補(bǔ)體所致的細(xì)胞溶解反應(yīng)細(xì)菌

3、外毒素或病毒與相應(yīng)抗體結(jié)合所致的中和反應(yīng)免疫標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)。,凝集反應(yīng),---ABO血型的鑒定,實(shí) 驗(yàn) 目 的,1. 熟悉凝集反應(yīng)的定義及血型鑒定實(shí)驗(yàn)的原理。2. 掌握血型鑒定實(shí)驗(yàn)的操作及結(jié)果的正確觀察與判斷。3.了解血型鑒定實(shí)驗(yàn)的用途。,凝集反應(yīng),定義：在一定濃度的電解質(zhì)環(huán)境中，顆粒性抗原（紅細(xì)胞、細(xì)菌、 乳膠顆粒等）和相應(yīng)抗體反應(yīng)能夠產(chǎn)生肉眼可見(jiàn)的凝集塊直接凝集間接凝集間接凝集抑制試驗(yàn) 抗球蛋白試驗(yàn),間接凝集反應(yīng)

4、,間接凝集抑制,抗球蛋白法檢測(cè)IgG抗體的原理,抗球蛋白可以和IgG反應(yīng),通過(guò)搭橋作用使紅細(xì)胞凝集,概 述,血型系統(tǒng) Blood group system,1901年發(fā)現(xiàn)的人類(lèi)第一個(gè)血型系統(tǒng)---- ABO血型系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)者----奧地利科學(xué)家 Karl Landsteiner,ABO血型系統(tǒng)的發(fā)現(xiàn),【實(shí)驗(yàn)原理】,血型是指紅細(xì)胞的血型，是根據(jù)紅細(xì)胞膜外表面存在的特異性抗原（鑲嵌于紅細(xì)胞膜上的糖蛋白和糖脂）

5、來(lái)確定的，這種抗原或凝集原是由遺傳決定的,Y,,+,,,實(shí)驗(yàn)器材,1：載玻片、采血針、牙簽等,2：A型和B型標(biāo)準(zhǔn)血清、酒精棉球,操作步驟,1.取載玻片，酒精消毒正面，在背面標(biāo)記A和B兩區(qū)2.酒精消毒指端皮膚和采血針后，用采血針刺破皮膚，擠出少量血液，涂在玻片A、B兩區(qū)，并立即用無(wú)菌干棉球壓迫止血3.在兩區(qū)分別滴加一滴抗A定型試劑和抗B定型試劑，立即用牙簽混勻4.靜置3分鐘，觀察凝聚現(xiàn)象，判定實(shí)驗(yàn)結(jié)果,實(shí)驗(yàn)結(jié)果,ABO血型檢查臨床意

6、義,1.輸血：輸血前必須檢查血型，選擇血型相同的供血者，進(jìn)行交叉配血完全相合才能輸血。 2.母嬰ABO血型不合引起的新生兒溶血病，主要是依靠血型血清學(xué)檢查來(lái)診斷。 3.器官移植時(shí)受者與供者也必須ABO血型相符合才能移植，血型不符極易引起急性排異反應(yīng)、導(dǎo)致移植失敗。 4.ABO血型與疾病之間的聯(lián)系也有一些報(bào)道，某些看來(lái)造血系統(tǒng)無(wú)關(guān)的疾病實(shí)際上可能與紅細(xì)胞血型抗原有關(guān)。,沉淀反應(yīng),----對(duì)流

7、免疫電泳,沉淀反應(yīng),可溶性抗原在有適量電解質(zhì)存在的條件下與相應(yīng)的抗體結(jié)合，形成肉眼可見(jiàn)的沉淀物，稱(chēng)為沉淀反應(yīng)類(lèi)型：,單向擴(kuò)散,單向擴(kuò)散,雙向擴(kuò)散,即將抗原和抗體分別加入瓊脂對(duì)應(yīng)的孔中，二者會(huì)向四周擴(kuò)散， 在形成白色沉淀線。,二者比例合適處,雙向擴(kuò)散,電 泳,定義：即帶電顆粒在電場(chǎng)的作用下向著相反的電極移動(dòng)，稱(chēng)為電泳。原理：蛋白質(zhì)分子在溶液中由于其末端氨基、末端羧基及側(cè)鏈的游離基團(tuán)而成為帶電顆粒，并可在電場(chǎng)內(nèi)移動(dòng)，其移動(dòng)方

8、向取決于蛋白質(zhì)分子所帶靜電荷。不同蛋白質(zhì)分子根據(jù)其氨基酸組成及所在溶液的pH值，攜帶的靜電荷不盡相同，致使它們?cè)陔妶?chǎng)中的遷移率各異，從而達(dá)到分理的目的。,火箭免疫電泳,火箭免疫電泳,對(duì)流免疫電泳,對(duì)流免疫電泳實(shí)質(zhì)上是由電泳定向加速的雙向擴(kuò)散抗原在電泳時(shí)從負(fù)極向正極移動(dòng)抗體由正極向負(fù)極移動(dòng),實(shí)驗(yàn)器材,1：載玻片、打孔器、三角燒瓶、移液管、洗耳球、10%的瓊脂、記號(hào)筆,2：酒精燈、火柴、電爐、電泳儀、電泳槽,3：微量加樣器、抗原及抗體樣

9、品,操作步驟,制板,打孔,封底,加樣,電泳,,,,3－4ml瓊脂,孔間距3mm,約7ul,切割火焰2－3次,總電流＝4mA/cm x 2.5cm(板寬) x N(板數(shù)）30分鐘,,對(duì)流免疫電泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果,,,對(duì)流免疫電泳,思 考 題,1、對(duì)流免疫電泳試驗(yàn)中如果抗原、抗體的正極和負(fù)極放反了是否會(huì)出現(xiàn)沉淀線？為什么？2、抗原抗體反應(yīng)檢測(cè)的臨床意義有哪些？,實(shí)驗(yàn)操作錄像,實(shí)驗(yàn)操作錄像,實(shí)驗(yàn)報(bào)告,實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析思考