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文檔簡介
1、一、基本原理,第一節(jié) 抗原抗體反應原理,,,Ag決定簇和Ab分子超變區(qū)相互 作用(相互吻合,具有互補性)分子表面特異的可逆的弱結(jié)合力在極短距離內(nèi)才能發(fā)生,基本條件:結(jié)合力親和性親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體,,抗原和抗體的結(jié)合是互補性的特異性結(jié)合不形成牢固的共價鍵,通過非共價鍵結(jié)合這種弱的結(jié)合力涉及幾種分子間的作用力,一、抗原抗體結(jié)合力,一、抗原抗體結(jié)合力,*1.靜電引力 *2.范德華引力 *3.氫鍵結(jié)合力 *
2、4.疏水作用力,,,,,,,,,,,,,,,,抗原抗體結(jié)合力示意圖,抗原,抗體,氫鍵結(jié)合力,,,,ON,,ON,,HH,靜電引力,,,,,,--,,,,,++,范得華力,,,,,-+,+-,,,+-,-+,,,疏水作用力,,,,,排斥的水,,二、抗原抗體親和性(affinity),* 親和性 是抗體分子上一個抗原結(jié)合點與對 應的抗原決定簇之間的相適應性而存在著的 引力,這是抗原與抗體之間固有的結(jié)合力。
3、,* 親和力(avidity) 是指反應系統(tǒng)中復雜抗 原與相應抗體之間的結(jié)合能力。 親和力與親和性、抗體的結(jié)合價和抗原的有 效決定簇數(shù)目相關。 親和力越大,抗原抗體結(jié)合越牢固。,親和常數(shù),親和常數(shù)K= K值大的抗體與抗原牢固結(jié)合,不易 解離,說明該抗體有高親和力。,抗體與抗原結(jié)合是可逆的反應,在平衡時其,血清學反應條件下,抗原抗體均帶負電荷, 使極化的水分子在其周圍形成水化層,成為 親水膠體。,三、親水膠體
4、轉(zhuǎn)化為疏水膠體,當抗原與抗體結(jié)合后,表面電荷減少,水化 層變薄;而且由于抗原抗體復合物形成后, 與水接觸的表面積減少,由親水膠體轉(zhuǎn)化為 疏水膠體。,在電解質(zhì)作用下,各疏水膠體之間靠攏,形 成可見的抗原抗體復合物。,親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體示意圖,,,,親水膠體,疏水膠體,,轉(zhuǎn)化,,NaCl,可見反應,,第二節(jié) 抗原抗體反應的特點,*1.特異性 *2.比例性 *3.可逆性,,一、 特異性(specificity
5、),*概念:抗原分子,只能與由它刺激所產(chǎn)生的抗 體結(jié)合而起反應的專一性能。,一、 特異性,*決定因素:由抗原決定簇和抗體分子超變區(qū)之 間空間結(jié)構(gòu)的互補性決定的。 抗體分子N端可變區(qū)形成3nm×1.5nm×0.7nm的槽溝,只有與其空間結(jié)構(gòu)互補的抗原決定簇才能如楔狀嵌入。,*交叉反應(cross reaction) 兩種不同的抗原 物質(zhì)具有部分相同或類似結(jié)構(gòu)的抗原決定簇, 則
6、可與彼此相應的抗體反應。,特異性示意圖,,,,,,,*最適比(optimal ratio)或等價點(equivzlence point) 最迅速出現(xiàn)沉淀時的抗原抗體的濃度 比或量比。,二、比例性(proportionality),等價帶(equivalencezone)抗原與抗體分子比 例合適的范圍。,帶現(xiàn)象:Ag與Ab比例不適而不出現(xiàn)可見反應。* 前帶(prozone ) 抗體過量時。* 后帶(postzone
7、) 抗原過量時。,比例性示意圖,抗體過量,比例合適,抗原的量,抗原過量,抗體沉淀的量,,,前帶,等價帶,后帶,三、可逆性(reversibility),概念:是指抗原與抗體結(jié)合成復合物后,在 一定條件下可解離為游離抗原與抗體的特性。,解離后抗原抗體仍保持原有特性。 一定條件:低pH、高濃度鹽等。 常用于解離抗原抗體復合物的物質(zhì)有: 3mol/L硫氰化鉀、pH2.4 0.1mol/L甘氨酸、 7mol/L尿素等。,抗體,混有
8、SPAg,抗體-SPAg,抗體-SPAg,分離劑,一、抗原抗體結(jié)合,二、分離抗體,可逆性示意圖,抗體,,第三節(jié) 抗原抗體反應影響因素,一、反應物自身因素 *抗原:1.理化特性 2.Ag決定簇數(shù)量 3.Ag決定簇種類 *抗體:1.來源 2.特異性與親和力 3.濃度,二、環(huán)境條件:*電解質(zhì):0.85%NaCl*酸堿度:pH6~9*溫度:15~40℃,*酸凝集:當pH為3左
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