hpv檢測目的及最佳檢測方法

1、HPV病毒檢測的目的及最佳檢測方法,,1、HPV檢測的目的是什么？2、HPV檢查的最佳方法？3、德同產(chǎn)品介紹,2,主要內(nèi)容,■ 只是為了查有沒有HPV病毒感染？ ■ 是為了查HPV感染型別，檢測型別越多越好？ ■ 是為了發(fā)現(xiàn)已經(jīng)存在的CIN2+病變和預CIN2+ 的 風險人群？,3,HPV檢測的目的是什么？,專家對HPV檢測是否要臨床驗證如何看待？,HPV檢測的目的是什么？,1個HIV/HBV = AIDS/

2、HBV1個HPV ≠ CIN或?qū)m頸癌 （80-90%的女性HPV感染是一過性的，可在6-24個月通過自體免疫清除）高危型HPV持續(xù)感會導致宮頸癌從HPV感染到宮頸癌，一般需要10－20年,高分析敏感度,檢測與臨床無關(guān)的病毒水平（假陽性）,一過性的感染會自身清除,恢復階段：免疫響應,早期感染會自身清除,Snijders et al. Journal of Pathology 2003; 201:1-6,HPV檢測的目的是什么？,H

3、PV病毒含量與臨床病變的關(guān)系,WHO指南對于HPVCutoff有明確推薦檢測陽性判斷值,6,WHO guidelines for screening and treatment of precancerous lesions for cervical cancer prevention. © World Health Organization 2013,陽性判斷值（Cutoff）的設定，在2013年的WHO宮頸癌篩查和管理指南

4、中是有具體建議的，其推薦高危型HPV 檢測cut-off 值≥1.0 pg/ml,HPV檢測的目的是什么？,HPV檢測的目的是什么？,HPV檢測的目的是什么？,7,不再是單純的病毒檢測，而是強調(diào)“臨床”，不再是制造商說了算，而是臨床說了算陽性判斷標準是要獲得理想臨床敏感度和特異度的臨界值，制造商不能僅憑簡單的病毒檢測數(shù)據(jù)來制定，建議使用ROC曲線的方式進行評估，這需要大量臨床檢測數(shù)據(jù)才能最終找到理想的臨界值,2015年CFDA針對HP

5、V檢測試劑陽性判斷值的規(guī)定：臨床靈敏度特異度的Cutoff值,HPV檢測的目的是什么？,8,2015年歐洲IPV大會：宮頸癌篩查HPV檢測目的HPV檢測不是為了檢測病毒，不是一過性感染，而是檢測感染病毒后的進展風險HPV檢測需要關(guān)注臨床敏感度，最大化的保護低風險人群，最大化的辨別高風險人群,2015 IPV Conference，Mark. Stoler,2016年CSCCP會議,Greater China Commerical S

6、ummit,9,HPV檢測不是僅僅為了檢出HPV感染，而是為了發(fā)現(xiàn)已經(jīng)存在的CIN2+病變和預測CIN2+的風險；對于HPV檢測來說，最重要的是臨床靈敏度和陰性預測值,HPV檢測的目的是什么？,WHO / IRAC 明確檢測13種HPV,Title, Location, Date,10,從流行病學和致癌機制證據(jù)方面，WHO/IRAC 明確檢測13種HPV型別：HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59

7、、68,最強的致癌型別，幾個致癌位點已經(jīng)明確,充足流行病學證據(jù)證實會導致宮頸癌,缺乏宮頸癌流行病學證據(jù)，但從致癌機制上有強的證據(jù)支持,2009 WHO IARC Special Report Policy A review of human carcinogens Part B,2015年中國CFDA明確HPV檢測型范圍,11,HPV檢測型別太少的產(chǎn)品如只檢測5種型別、2種型別（如HPV16/18）等，將不能再注冊,HPV檢測的目的是什

8、么？,HPV檢測的目的是什么？,Title, Location, Date,12,不能盲目的追求過多的HPV檢測型別不建議將低危型HPV檢測用于宮頸癌篩查,中國CFDA明確限制低危型HPV檢測,2015最新CFDA指導原則以服務臨床為最終目的,13,一項檢測技術(shù)，要想滿足以上要求，必須基于長時間大量的臨床驗證才能實現(xiàn),2015年CFDA新的指導原則，從臨床目的出發(fā)，精確注冊標準要求,答案： ■只是為了查有沒有HPV病毒感染？NO

9、 ■是為了查HPV感染型別，檢測型別越多越好？NO ■是為了發(fā)現(xiàn)已經(jīng)存在的CIN2+病變和預CIN2+ 的風險 人群？yes,14,HPV檢測的目的是什么？,1、HPV檢測的目的是什么？2、HPV檢查的最佳方法？3、德同產(chǎn)品介紹,15,主要內(nèi)容,HPV檢查的最佳方法,直接核酸檢測（無需PCR實驗室）雜交捕獲技術(shù) （HC2、DH1、DH2、DH3）酶切信號放大法 （Cervista）核酸擴增后檢測——PCR類技

10、術(shù)（需PCR實驗室） 膜雜交法 基因芯片法 反向點雜交法 流式熒光雜交法 熒光探針法,HPV DNA檢測技術(shù)分類,HPV檢查的最佳方法雜交捕獲技術(shù) （HPV檢測的金標準）產(chǎn)品德國凱杰的：HC2杭州德同的：DH2、DH3,17,HPV檢查的最佳方法,雜交捕獲技術(shù) 的三大優(yōu)勢：1、獨特的探針技術(shù)：14 種全長 8000RNA 探針，避免因 區(qū)域片段（如 L1 區(qū)）丟失造成的假陰性2、無需DNA提取，無需

11、核酸擴增，有效避免因環(huán)境因素造 成的假陽性3、統(tǒng)一的臨 床 判 定 標 準≥1.0pg/ml，避 免 因方法 學靈敏度過高產(chǎn)生的假陽性，結(jié)果重復性好，準確可靠。,18,HPV檢查的最佳方法,雜交捕獲法獨特的探針技術(shù),HPV病毒基因組為環(huán)狀雙鏈DNA，含有~8000個堿基對,德同DH系列 HPV 檢測“全長雞尾酒”探針技術(shù),HPV18,8000bp，基于全長，涵蓋HPV DNA所有區(qū)域2＋12種不同型別探針混合準確，不漏

12、診,Cobas HPV& Abbott HPV(12+2 Real-time PCR)“寡核苷酸探針”技術(shù),HPV16,,HPV18,,12種HR通用探針,約200bp，僅基于L1片斷， 非全長僅3種探針混合病毒基因缺失、突變會造成漏診,,,其他國產(chǎn)PCR方法“ 寡核苷酸探針”技術(shù),13種HR通用探針,,約100-150bp，僅基于L1片斷， 非全長僅1種通用探針病毒基因缺失、突變會造成漏診,H

13、PV16,,12種HR通用探針,,,德同DH系列HPV 檢測“全長雞尾酒”探針技術(shù),Title, Location, Date,,Cobas HPV& Abbott HPV(12+2 Real-time PCR)“寡核苷酸探針”技術(shù),其他國產(chǎn)PCR方法 “寡核苷酸探針”技術(shù),PCR和HC2的臨床敏感性比較：綜合1999-2005年間的主要研究 基于CIN2/3/癌癥的病例數(shù)〉1,500,%,,,,“L1片段的缺失并不普遍

14、，但是任何變異或缺失都會造成PCR的檢測結(jié)果為陰性…” Unger et al JHC 1998, 46(4): 535-540,“L1片段是病毒衣殼蛋白，在HPV病毒引發(fā)的腫瘤進展過程中是不必要的，因此很可能在HPV整合過程會導致L1片段的缺失” Capone et al, Clin Cancer Research 2000, 6:4171-4175,“~5%的癌癥和CIN3會因為HPV L1片段的缺失而無法被檢測出來” Lo

15、rincz (Methods for HPV Detection) ; Emerging Issues on HPV Infections: From Science to Practice, Monsonego 2006,HPV 病毒基因L1片段缺失,PCR中β-球蛋白的競爭,反應過程中的競爭會導致假陰性結(jié)果,“β-球蛋白和HPV以共同引物L1片段進行擴增，這樣會降低HPV檢測的敏感度”Coutlee et al. JCM 200

16、2; 40(3): 902-907,PCR導致假陰性的原因,不同HPV型別擴增效率不同如果L1片段缺失，檢測失敗 (整合型HPV)通用引物會和低危型HPV結(jié)合，抑制了目標高危型別的擴增內(nèi)指控（Beta-globin）會抑制HPV擴增樣本抑制 (有5％的樣品丟失因出現(xiàn)抑制而無法擴増),PCR檢測可能導致假陽性結(jié)果,檢測與臨床不相關(guān)的感染樣本間的污染,缺乏統(tǒng)一的判定標準結(jié)果受主觀因素影響,雜交捕獲,PCR,經(jīng)臨床驗證的同一判定

17、標準1.0pg/ml儀器判讀、結(jié)果客觀可靠,統(tǒng)一的判定標準,HPV檢查的最佳方法,為何要明確“臨床靈敏度和臨床特異度的Cutoff值”？,26,2015 IPV Conference，Mark. Stoler,參考2015年世界IPV大會：理想的臨床靈敏度和特異度的臨界值（Cutoff），即及能夠保證對≥CIN2的病人具有非常高的檢出率的同時，又可以避免因分析敏感度過高而造成的假陽性臨床敏感度與疾病進展風險掛鉤分析敏感度與是否存

18、在病毒感染掛鉤：PCR過于敏感的分析敏感度，會將病毒含量的人判斷為陽性,,,HPV檢查的最佳方法,Adapted from Snijders et al. Journal of Pathology 2003; 201:1-6,分HPV檢查的最佳方法析敏感度與臨床敏感度,雜交捕獲 HPV DNA檢測為陰性時并不代表體內(nèi)沒有HPV，表明樣品中HPV含量不足5000拷貝.雜交捕獲 HPV DNA檢測為陽性時（高于以上標準）可以預測未來8

19、-10內(nèi)患CIN2/3或者進展為更高級別病變的風險短暫及一過性的感染會通過自身免疫力清除PCR 方法檢測HPV的分析敏感度可能 <10 拷貝,區(qū)別：分析敏感度與臨床敏感度,分析敏感度,,,PCR 方法的分析敏感度達到10個拷貝/ml,陽性結(jié)果：可能沒有臨床相關(guān)性,,臨床敏感度,,,雜交捕獲的分析閾值經(jīng)臨床驗證為 5,000 個拷貝/ml,經(jīng)臨床證實：高度的陰性預測值,,樣本中能檢測出的病毒最低水平 也被稱作檢測極限

20、(LOD) 統(tǒng)計學意義：檢測結(jié)果與零的區(qū)分,以臨床病變?yōu)榻K點指征，檢測出高度病變的敏感度 (CIN3+ / SCC) 初篩時，能夠檢測出CIN2＋或?qū)m頸癌的比例 分析閾值必須得到嚴格的驗證,HPV檢查的最佳方法雜交捕獲技術(shù) （HPV檢測的金標準）產(chǎn)品德國凱杰的：HC2杭州德同的：DH2、DH3,29,HPV檢查的最佳方法,1、HPV檢測的目的是什么？2、HPV檢查的最佳方法？3、德同產(chǎn)品介紹,30,主要內(nèi)容,杭

21、州德同DH系列產(chǎn)品,利用基因雜交、化學發(fā)光、信號放大的原理在分子水平檢測WHO認可的14種高危型-HPV 病毒DNA 最新“2+12型”檢測設計(HPV16/ 18 與其他12種型別檢測),德同產(chǎn)品原理-新一代雜交捕獲技術(shù),杭州德同DH系列產(chǎn)品,具有48T、96T兩種規(guī)格,半自動檢測儀器,全自動檢測儀器,杭州德同DH系列產(chǎn)品檢測儀器,DH產(chǎn)品與HC2的臨床比對,,,孫小偉等，《中華腫瘤防治雜志》 2016年2月 第23卷 第

22、3期 137-140,,,,河南新密“兩癌”篩查項目,DH2對CIN2+的檢出率顯著高于巴氏涂片和VIA/VILI,臨床試驗顯示：DH3具有與Cobas相同預測高級別病變的效能,浙江龍游10669名健康婦女接受Cobas和DH3篩查結(jié)果比對,臨床試驗顯示：DH3與Cobas預測高級別的效能相似,浙江龍游10669名健康婦女HPV16/18分型檢測用于宮頸癌初篩Cobas/DH3效能的比較,保留了HPV檢測“金標準”雜交捕獲技術(shù)的特點

23、 全長探針－減少“漏診” 閾值（cutoff值）1pg/ml－確保檢測“病變”，而不是檢測“病毒” 無核酸擴增－無需實驗室特殊要求及人員資質(zhì) 儲運條件：2-8℃新添加最新的設計 系列產(chǎn)品：DH2:14種高危HPV DH3:2+12分型檢測 －滿足不同篩查需求 －符合宮頸癌篩查最新理念 全自動檢測 — 減輕人員負擔