三倍體丹參生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)相關(guān)miRNAs的克隆及定量分析.pdf

1、丹參(Salvia miltiorrhiza Bunge)是唇形科(Labiatae)鼠尾草屬(Salvia)的多年生草本植物，因?yàn)槠涓嗡迫藚ⅲぜt如丹，故名丹參。中藥丹參則為其干燥的根，是我國(guó)傳統(tǒng)的中草藥，廣泛種植于我國(guó)多個(gè)省市。本實(shí)驗(yàn)室通過已有二倍體與四倍體的雜交獲得三倍體丹參，經(jīng)測(cè)量，培育出的三倍體丹參在性狀以及藥用成分含量等方面都展示出顯著的優(yōu)勢(shì)。microRNA(miRNA)屬于一類在轉(zhuǎn)錄后水平上調(diào)控基因表達(dá)的非編碼小分子

2、RNA，長(zhǎng)度多數(shù)為21-25 nt。miRNA不僅在植物的生長(zhǎng)發(fā)育，而且在環(huán)境條件的脅迫應(yīng)答及其它生理反應(yīng)中都起著重要的調(diào)節(jié)作用。目前miRNA的研究在生物學(xué)中逐漸地成為熱點(diǎn)，對(duì)于miRNA在多倍體優(yōu)勢(shì)中的研究非常少，而針對(duì)丹參生長(zhǎng)發(fā)育中的作用的研究更是少之又少。
　　鑒于上述原因，本文的研究主要集中于幾個(gè)控制不同信號(hào)通路的miRNAs，采用分子克隆及序列比對(duì)的方法驗(yàn)證其表達(dá)，然后在不同倍性丹參的幼葉、老葉、花苞及根的進(jìn)行表達(dá)差異

3、分析，主要的結(jié)果有:
　　1通過提取丹參RNA，針對(duì)性地設(shè)計(jì)特異的莖環(huán)引物進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，克隆測(cè)序之后確定了在丹參體內(nèi)表達(dá)的5個(gè)miRNA的序列，分別為miR156、miR160、miR164、miR167和miR399。
　　2通過在植物小RNA網(wǎng)站上進(jìn)行序列比對(duì)，和實(shí)時(shí)定量PCR分析鑒定了miR164和miR167與實(shí)驗(yàn)室已有的NAC1與ARF6序列相互配對(duì)，匹配度分別為8.701和18.85。
　　3在葉片的定量分析

4、中，發(fā)現(xiàn)三倍體的miR156、miR167的表達(dá)相對(duì)低于二、四倍體，而miR160和miR164的相對(duì)表達(dá)量高于二、四倍體，分析上述miRNAs對(duì)于葉片生長(zhǎng)大小有影響。
　　4在花苞的定量分析中，觀察到三倍體中miR156及miR164的相對(duì)表達(dá)低于二、四倍體，這兩個(gè)miRNAs的差異表達(dá)可能幫助三倍體花器官發(fā)育提前。5在根的定量分析中，三倍體中miR164表達(dá)低于二、四倍體，而miR167及miR399相對(duì)表達(dá)量高于其他兩個(gè)倍體