豬繁殖與呼吸綜合征病毒受體唾液酸粘附素V-set結(jié)構(gòu)域的真核細(xì)胞表達(dá)及結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè).pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是一種由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）引起的高度接觸性傳染性疾病，其主要特征是妊娠母豬的繁殖障礙和各年齡階段豬的呼吸系統(tǒng)疾病，給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。
　　PRRSV的入侵機(jī)制一直是研究熱點(diǎn)，包括

2、許多對(duì)其宿主和受體的研究。豬是PRRSV唯一的天然宿主。分化的單核細(xì)胞、尤其是肺泡巨噬細(xì)胞，是其主要的宿主細(xì)胞。大量研究已證實(shí)，PRRSV是通過(guò)宿主細(xì)胞表面的受體分子介導(dǎo)入侵的。目前國(guó)內(nèi)外已鑒定多種與PRRSV入侵相關(guān)受體，如唾液酸粘附素（Sialoadhesin,Sn）、CD163（Cluster of differentiation163）和硫酸乙酰肝素（Heparin sulphate,HS）等，它們共同協(xié)助完成PRRSV的入侵和

3、復(fù)制增殖過(guò)程。其中，唾液酸粘附素（Sn），也被稱作CD169或Siglec-1（sialic acid binding immunoglobulin-type lectin-1），是在巨噬細(xì)胞表面特異表達(dá)的凝集素并在PRRSV感染靶細(xì)胞的吸附和內(nèi)吞過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，Sn的V-set Ig-like結(jié)構(gòu)域在PRRSV入侵過(guò)程中起主要作用，但目前其結(jié)構(gòu)生物學(xué)機(jī)制尚不清楚。為了探究PRRSV受體Sn的結(jié)構(gòu)信息及其在病毒入侵

4、過(guò)程中所發(fā)揮的作用，本試驗(yàn)首先采用畢氏酵母表達(dá)系統(tǒng)，成功克隆及表達(dá)了豬源Sn V-set Ig-like結(jié)構(gòu)域重組蛋白。但因其表達(dá)量過(guò)低，不利于其結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究，因此繼續(xù)采用昆蟲(chóng)表達(dá)系統(tǒng)（果蠅胚胎Drosophila Schneider-2,S2細(xì)胞）克隆表達(dá)了豬源Sn V-set Ig-like結(jié)構(gòu)域重組蛋白，并對(duì)其進(jìn)行了western blotting檢測(cè)、質(zhì)譜檢測(cè)及鎳柱純化等試驗(yàn)，結(jié)晶并預(yù)測(cè)了其空間結(jié)構(gòu)。最終得到的重組蛋白序列與S