氟鈴脲降解菌的分離鑒定、降解特性及降解氟鈴脲的酰胺酶基因(amiH)的克隆和表達.pdf

1、氟鈴脲是美國陶氏益農(nóng)公司1987年開發(fā)生產(chǎn)的一種高效、廣譜、低毒的苯甲酰脲類殺蟲劑，幾丁質合成抑制劑，通過抑制幾丁質的合成殺死害蟲。它是國家石化局和農(nóng)業(yè)部制定的中國農(nóng)藥工業(yè)“十五”發(fā)展規(guī)劃要求中的高毒有機磷農(nóng)藥的替代品種之一。被廣泛用于蔬菜、棉花和果樹的害蟲防治，及真菌引起的植物病害。但是氟鈴脲在作物上的不正確使用也會引起藥害、對魚類和家蠶毒性大。
　　 目前的研究主要集中在氟鈴脲的藥效、殺蟲效果、農(nóng)藥殘留與毒性，以及在土壤中的

2、降解動態(tài)。對于分離到的純種微生物對氟鈴脲的降解鮮有報道，沒有對其代謝途徑與酶進行研究。
　　 從農(nóng)藥廠廢水處理池的活性污泥中分離到1株能降解氟鈴脲的菌株，命名為FLN-7，GenBank序列號為(EU725799)。根據(jù)表型特征、生理生化特性及16S rRNA序列同源性分析，將FLN-7歸類為副球菌屬(Paracoccus sp.)，研究結果表明該菌能在含氟鈴脲(50 mg·L-1)的基礎鹽液體培養(yǎng)基中降解氟鈴脲，7d降解率達8

3、9％。研究了它的生長特性、對氟鈴脲的降解特性。通過高效液相色譜與質譜推斷出氟鈴脲在Paracoccus sp.FLN-7體內(nèi)代謝過程的起始反應是斷裂其結構核心的一個酰胺鍵。
　　 通過構建基因組DNA文庫，成功地從氟鈴脲降解菌株Paracoccus sp.FLN-7中克隆到一個酰胺酶基因，命名為amiH。該基因含1395個堿基，編碼465個氨基酸，G+Cmol％含量為67.81％，通過Omiga分析AmiH是分子量為49.6kD