乳腺癌放射治療的臨床和實驗研究

1、乳腺癌放射治療的臨床和實驗研究,放射治療在乳腺癌治療中的作用,保乳手術(shù)后 根治術(shù)后 晚期及復(fù)發(fā)乳腺癌,存在的問題,療程長達5－6周化療與放療的銜接問題,劑量分割研究的意義,減少照射的次數(shù)，縮短療程，方便患者優(yōu)化資源利用優(yōu)化放療與化療安排,,,,乳腺癌放射治療的特點,術(shù)后亞臨床灶，腫瘤負荷低乳腺癌細胞的α/β值可能較低乳腺癌的Tpot較長，約14天,,,,論文第一部分,乳腺癌根治術(shù)后放射治療的劑量分割方案的臨床研究,198

2、7年1月至1993年1月,,,術(shù)后放療應(yīng)用3種劑量分割方案,,乳腺癌根治術(shù)或改良根治術(shù)后 367例,入組條件,術(shù)后放療三種劑量分割方案,3個劑量分割方案組的臨床特點(1),3個劑量分割方案組的臨床特點（2）,3個劑量分割方案組的放療部位,結(jié)果,局部區(qū)域復(fù)發(fā)率（照射野內(nèi)）,Cox多因素回歸分析照射野內(nèi)復(fù)發(fā)的相關(guān)因素 腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移個數(shù)有顯著意義 （P＝ 0.0008） 年齡、劑量分割方法、病理類型、 有無化療

3、均無顯著意義,,,5年無瘤生存率,正常組織放射反應(yīng),3個劑量分割方案的等效生物劑量(BED),討論,300 cGy/次組的特點,隔日照射總的治療時間未縮短每周治療次數(shù)減少對患者和設(shè)備資源來說都有利,,,,快速照射法的特點,快速照射組的總劑量較低。 縮短了療程時間，為高危患者盡早開始化療贏得了時間。 照射的次數(shù)比常規(guī)大大減少，減少了住院時間或門診放療的往返不便。,,,,結(jié) 論,300 cGy/次、隔日照射的方法

4、 與常規(guī)分割療效相似,,,快速照射法有待進一步研究,,支持乳腺癌α/β值較低的觀點,論文第二部分,亞臨床灶放射治療的　動物模型研究,研究目的,應(yīng)用動物模型比較亞臨床 灶放射治療的劑量分割方案,近交系BALB/C雌性小鼠小鼠乳腺癌EMT－6細胞株腫瘤體外的倍增時間12小時,動物模型,實驗設(shè)計,腫瘤細胞接種腫瘤亞臨床灶生長的病理觀察 實驗分組, 不同方案照射觀察腫瘤形成率 、腫瘤控制率,EMT－6細胞接種,照

5、射的固定示意圖,照射的劑量分割方案,結(jié)果,腫瘤形成外觀圖及解剖圖,1. 亞臨床灶病理觀察 （1）,接種后第一天,接種后第二天,1. 亞臨床灶病理觀察（2）,接種后第三天,接種后第四天,1. 亞臨床灶病理觀察（3）,接種后第五天,接種后第六天,3.不同劑量分割方案的腫瘤形成率,,,,,各組腫瘤形成率兩兩比較的P值,,,,3.不同劑量分割方案的腫瘤控制率,,,,,各組腫瘤控制率兩兩比較的P值,,,,討論,小鼠亞臨床腫瘤照射的特點,對照組可以

6、100%形成腫瘤幾乎不存在乏氧問題腫瘤形成率和控制率作為終點指標可靠、易于評價,,,,臨床和實驗動物快速照射的差距的原因分析,小鼠腫瘤細胞增殖明顯較快療程中休息一周，腫瘤加速再群體化,,,結(jié) 論,對于細胞倍增快的腫瘤而言加速超分割的療效最好,,,隔日照射和常規(guī)照射的療效相似,,快速照射療效最差,下一步的研究,多種腫瘤模型驗證正常組織損傷的驗證 　裸小鼠移植瘤 模型驗證,,,,論文第三部分,CDK抑制劑Flavopi

7、ridol增加放射效應(yīng)的實驗研究,探討放射增敏的必要性,現(xiàn)代放射治療技術(shù)提高療效有限腫瘤的分子靶向研究進展迅速,分子靶向藥物 Flavopiridol,新合成的黃酮類生物堿 cdk1 (cdc2)、cdk2、cdk4、cdk7的強力抑制物 誘導(dǎo)G1期的阻滯 誘導(dǎo)凋亡 下調(diào)c-erbB2的表達,,,,,,對上皮細胞系（前列腺、食管、肺、頭頸部癌有細胞毒作用。已進行 I-II 期臨床試驗,分子靶向藥物 Fla

8、vopiridol,,,實驗路線,藥物對于細胞生長的影響克隆形成實驗：觀察放射增敏效應(yīng)觀察對細胞周期的影響彗星法測定DNA的初始損傷及修復(fù)Western blot：相關(guān)蛋白的表達變化,實驗材料,腫瘤細胞：973肺腺癌細胞系Flavopiridol：用DMSO配成10mM原液 照射條件：6 MV X線,實驗1.　對細胞生長的影響,75cm2培養(yǎng)瓶 每瓶細胞接種細胞數(shù)3×105個 貼壁后加入不同濃度的Flavopi

9、ridol 每天取各濃度的培養(yǎng)瓶，細胞消化，計數(shù)共計數(shù)5天,Flavopiridol對于生長曲線的影響,實驗2.　放射增敏效應(yīng)的研究,在培養(yǎng)瓶中接種細胞 24小時后加入Flavopiridol照射劑量0、1、2、3、5、7和10Gy 實驗分組：對照組、單純藥物、單純照射、照射＋藥物，F(xiàn)lavopiridol濃度均為100 nM。14天后計數(shù)各組的克隆形成繪制細胞存活曲線,細胞存活曲線,1 單純照射,2 照射＋flavopi

10、ridol,1,2,Flavopiridol對放射敏感性的影響,實驗3. 對細胞周期的影響,實驗分組：　1. 單純照射　2. 單純藥物　3. 照射加藥物照射后12小時收集細胞 流式細胞儀檢測,,,對照組,4Gy 照射后12小時,Flavopiridol 200nM + 4Gy照射后12小時,Flavopiridol 400nM + 4Gy照射后12小時,Flavopiridol和照射對于G2期的影響,實驗4.　慧星法

11、檢測DNA損傷,實驗分組：　1. 對照　2. 單純照射 6 Gy　3. 單純藥物 200 nM　4. 照射加藥物照射后不同時間行彗星法檢測 慧星的尾力距（Tail Moment, TM）為DNA損傷指標,Flavopiridol和照射對于DNA初始損傷的影響,對照組,單純照射,Flavo加照射,圖示：慧星法檢測的結(jié)果,Flavo對于照射后DNA損傷修復(fù)的影響,實驗5.　相關(guān)蛋白測定,實驗分組：　1. 單純照射 4Gy　

12、2. 單純藥物 200nM　3. 照射加藥物 4. 對照,實驗5.　相關(guān)蛋白測定,照射后12小時提取總蛋白Western blot測定:　 Tyr 15 cdc2 c-erbB2βactin作為內(nèi)對照,照射 藥物　照射+藥物　對照,Tyr 15 cdc2,c-erbB2,βactin,結(jié) 論,Flavopiridol具有放射增敏作用,,去除照射引起的G2期阻滯，　降低照射后tyr15