湖南省長(zhǎng)沙市長(zhǎng)郡中學(xué)2015-2016高中生物選修1課件專題二-課題1《微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)》.

1、主講：胡昆,是一切肉眼看不見(jiàn)或看不清楚的微小生物的總稱。,一、微生物,微生物,病毒細(xì)菌放線菌真菌原生動(dòng)物,原核生物界,原生生物界,真菌界,病毒界,,,是一切肉眼看不見(jiàn)或看不清楚的微小生物的總稱。,一、微生物,?1.分類,特點(diǎn)：小 簡(jiǎn) 低,微生物,病毒細(xì)菌放線菌真菌原生動(dòng)物,原核生物界,原生生物界,真菌界,病毒界,,,是一切肉眼看不見(jiàn)或看不清楚的微小生物的總稱。,?1.分類,一、微生物,?2.病毒,病毒的結(jié)構(gòu),SA

2、RS冠狀病毒、 禽流感病毒,病毒的增殖,,細(xì)菌的外形與大小,?3.細(xì)菌,A. 球菌 B. 桿菌 C. 弧菌 常見(jiàn)的細(xì)菌三種典型形態(tài),,,A,B,C,細(xì)菌的結(jié)構(gòu),,芽孢：細(xì)菌形成的橢圓形的休眠體,芽孢的壁很厚，對(duì)干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗力。　　芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散?！　‘?dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時(shí)候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個(gè)細(xì)菌。,,異養(yǎng)菌：腐生菌寄生菌

3、 　大部分病原菌,,細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)類型,根據(jù)細(xì)菌所利用的能源和碳源的不同，將細(xì)菌分為兩大營(yíng)養(yǎng)類型?！　∽责B(yǎng)菌：,,異養(yǎng)菌：腐生菌寄生菌 　大部分病原菌,,光能自養(yǎng)型：光合細(xì)菌,細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)類型,根據(jù)細(xì)菌所利用的能源和碳源的不同，將細(xì)菌分為兩大營(yíng)養(yǎng)類型?！　∽责B(yǎng)菌：,,異養(yǎng)菌：腐生菌寄生菌 　大部分病原菌,,光能自養(yǎng)型：光合細(xì)菌化能自養(yǎng)型：硝化細(xì)菌，鐵細(xì)菌，硫細(xì)菌,細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)類型,根據(jù)細(xì)菌所

4、利用的能源和碳源的不同，將細(xì)菌分為兩大營(yíng)養(yǎng)類型。　　自養(yǎng)菌：,菌　落,單個(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，就會(huì)形成一個(gè)肉眼可見(jiàn)的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落?！　【涫氰b定菌種的重要依據(jù)。,細(xì)菌的菌落特征因種而異,菌落,?4.放線菌,⑴結(jié)構(gòu)：　單細(xì)胞原核生物　分支狀的菌絲（基內(nèi)菌絲、氣生菌絲）,（2）繁殖,孢子絲|孢子,鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、氯霉素、紅霉素、慶大霉素,微生物中發(fā)現(xiàn)了幾千種抗生素，其中2/

5、3是由放線菌產(chǎn)生的,⑶應(yīng)用:,?5.真菌,,酵母菌,酵母菌和霉菌,青霉,生 殖,腐生生活,孢子生殖,?6.營(yíng)養(yǎng)及功能,?微生物化學(xué)元素組成：,?6.營(yíng)養(yǎng)及功能,?微生物化學(xué)元素組成：,C、H、O、N、P、S,?6.營(yíng)養(yǎng)及功能,C、H、O、N、P、S,?五大營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),,碳源,氮源,生長(zhǎng)因子,水,無(wú)機(jī)鹽,?微生物化學(xué)元素組成：,二、培養(yǎng)基,培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成的，專供微生物生長(zhǎng)繁殖使用的混合營(yíng)養(yǎng)液。,（1）按物理狀態(tài)分：固體

6、培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基。 （2）按功能分：選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。 （3）按成分分：天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。,?1.培養(yǎng)基的類型,固體培養(yǎng)基：菌落,液體培養(yǎng)基：,表面生長(zhǎng),均勻混濁生長(zhǎng),沉淀生長(zhǎng),半固體培養(yǎng)基：,2.不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方,2.不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方,3.不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、碳源、和氮源、 無(wú)機(jī)鹽等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，另外還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)

7、養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。,1000mL牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成,?4.培養(yǎng)基的用途,?4.培養(yǎng)基的用途,液體培養(yǎng)基：增菌、工業(yè)生產(chǎn)固體培養(yǎng)基：純化（分離），　　　　　　鑒定、活菌計(jì)數(shù)、　　　　　　保藏菌種半固體培養(yǎng)基：動(dòng)力檢測(cè),,三、無(wú)菌技術(shù),三、無(wú)菌技術(shù),1.無(wú)菌技術(shù)的概念,無(wú)菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。,1.無(wú)菌技術(shù)的概念,無(wú)菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。,成功地培養(yǎng)微

8、生物的關(guān)鍵。,三、無(wú)菌技術(shù),（1）消毒定義：,2.消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別,（2）滅菌的定義：,微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的基本操作程序,1. 器具的滅菌2. 培養(yǎng)基的配制3. 培養(yǎng)基的滅菌4. 倒平板5. 微生物接種6. 恒溫箱中培養(yǎng)7. 菌種的保存,四、實(shí)驗(yàn)操作,(一)制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(用于培養(yǎng)細(xì)菌),倒平板操作,1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 ℃左右時(shí)，才能用來(lái)倒平板。你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？,,關(guān)于倒平板操

9、作的問(wèn)題討論：,1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 ℃左右時(shí)，才能用來(lái)倒平板。你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？,答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺(jué)錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。,,關(guān)于倒平板操作的問(wèn)題討論：,2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？,2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？,答：通過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。,3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？,3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？,答

10、：平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。,4.在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？為什么？,4.在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？為什么？,答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用

11、這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。,（二）純化大腸桿菌,接種方法有：平板劃線法和稀釋涂布平板法,微生物的接種技術(shù)：,平板劃線的操作方法,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,問(wèn)題討論,1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí),仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？,答：第一步灼燒是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒是

12、為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源上次劃線的末端，從而通過(guò)劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。,2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？,2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？,答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。,3.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上

13、一次劃線的末端開始劃線？,3.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？,答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。,,,一旦劃破，會(huì)造成劃線不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的； 　　二是存留在劃破處的單個(gè)細(xì)胞無(wú)法形成規(guī)矩的菌落，菌落會(huì)沿著劃破處生長(zhǎng)，會(huì)形成一個(gè)條狀的菌落。,,,稀釋涂布平板法,注

14、意： 移液管需要經(jīng)過(guò)滅菌。操作時(shí)，試管口和移液管離火焰1~2cm處.,涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無(wú)菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)如何進(jìn)行無(wú)菌操作？,,問(wèn)題討論,涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無(wú)菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)如何進(jìn)行無(wú)菌操作？,應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無(wú)菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。,

15、,問(wèn)題討論,微生物的恒溫培養(yǎng),微生物的恒溫培養(yǎng),微生物的恒溫培養(yǎng),菌種的保存,1.臨時(shí)保藏： 接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長(zhǎng)成后置于4℃冰箱保存。2.長(zhǎng)期保存： 甘油冷凍管藏法,,微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng).DAT,四、實(shí)驗(yàn)操作成果評(píng)價(jià),（一）培養(yǎng)基的制作是否合格 如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2 d后無(wú)菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。,（二）接種操作是否符合無(wú)菌要求 如果培