微生物的實驗室培養(yǎng)ppt課件

1、一、微生物的實驗室培養(yǎng)1．培養(yǎng)基(1)培養(yǎng)基即人們按照 ，配制出供其生長繁殖的基質(zhì)。(2)按物理狀態(tài)，可將培養(yǎng)基劃分為 培養(yǎng)基和 培養(yǎng)基(如瓊脂培養(yǎng)基)。(3)培養(yǎng)基一般都含有的成分是： ，在此基

2、礎(chǔ)上還需滿足微生物生長對 的需求。,微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求,液體,固體,水、碳源、氮源和無機鹽,pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì),及氧氣,2．消毒和滅菌,較為溫和,強烈,一部分對人體有害的微生物(不包括芽孢和孢子),所有的微生物，包括芽孢和孢子,煮沸,巴氏,灼燒,干熱,高壓蒸汽,3．大腸桿菌純化及菌種保藏(1)制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的步驟為： →稱量→溶化→ →(2)

3、微生物純化的原理及方法：①原理：在 培養(yǎng)基上將細菌稀釋或分散成 ，使其長成單個的菌落，這個菌落就是一個純化的細菌菌落。②方法： ，要求無菌操作。,計算,滅菌,固體,單個細胞,倒平板,平板劃線法、稀釋涂布平板法,,(3)菌種保藏：①短期保存：

4、 上4℃保藏，缺點是菌種易被污染或產(chǎn)生變異。②長期保存：采用 －20℃冷凍箱中保藏。,固體斜面培養(yǎng)基,甘油管藏法,二、土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)(1)分離原理：①土壤中細菌之所以能分解尿素，是由于它們能合成 ，這種物質(zhì)在把尿素分解成無機物的過程中起 作用。②使用以 為唯一氮源的培養(yǎng)基能促進

5、 的細菌的生長和繁殖，并抑制或阻止其他微生物的生長，從而分離出目的菌。,脲酶,催化,尿素,分解尿素,(2)統(tǒng)計菌落數(shù)目：統(tǒng)計樣品中的活菌一般用 。(3)實驗流程：土壤取樣→ →微生物的培養(yǎng)與觀察→細菌的計數(shù)。,稀釋涂布,平板法,制備培養(yǎng)基,元貝駕考 http://www.ybjx.net 元貝駕考2016科目一 科目四駕考

6、寶典網(wǎng) http://www.jkbdw.net/ 駕考寶典2016科目一 科目四,三、分解纖維素的微生物的分離1．纖維素酶的組成及作用(1)組成：一種 酶，它至少包括三種組分，即 。(2)作用：,復(fù)合,C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶,纖維二糖 葡萄糖,2．篩選方法(1)方法：

7、 法，即通過是否產(chǎn)生 來篩選纖維素分解菌。(2)培養(yǎng)基：是以 為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基。3．篩選流程土壤取樣— → →將樣品涂布到 的培養(yǎng)基上→挑選

8、的菌落。,剛果紅染色,透明圈,纖維素粉,選擇培養(yǎng),梯度稀釋,鑒別纖維素分解菌,產(chǎn)生透明圈,[做一題][例1]　如下所示為培養(yǎng)某種微生物的培養(yǎng)基的配方，請回答：,(1)依物理狀態(tài)，該培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基；依用途劃分，則屬于________培養(yǎng)基。(2)根據(jù)培養(yǎng)基的配方可判斷出，該培養(yǎng)基所培養(yǎng)微生物的同化作用的類型是________，培養(yǎng)的微生物可能是________。(3)該培養(yǎng)基中的碳源是________。不論何

9、種培養(yǎng)基，在各成分都溶化后分裝前，要進行的是________和________；倒平板時，一般需冷卻至________左右，并且要在________附近操作。,(4)若用該培養(yǎng)液培養(yǎng)纖維素分解菌，應(yīng)除去的物質(zhì)是________，至少應(yīng)加入的物質(zhì)是________，為檢測纖維素分解菌的存在與否還應(yīng)加入________，形成________色復(fù)合物，若產(chǎn)生________，則證明有纖維素分解菌存在。,[解析]　 (1)從培養(yǎng)基成分看，沒

10、有瓊脂等凝固劑，屬于液體培養(yǎng)基；從用途上分析，加入青霉素可以殺死細菌、放線菌，選擇出霉菌、酵母菌等屬于選擇培養(yǎng)基。(2)該生物以培養(yǎng)基中的(CH2O)作碳源，為異養(yǎng)型微生物。(3)考查微生物培養(yǎng)的基本操作。(4)培養(yǎng)纖維素分解菌，是以纖維素作碳源，故應(yīng)去除(CH2O)；培養(yǎng)細菌應(yīng)去除能殺滅細菌的青霉素?？捎脛偣t與纖維素形成紅色復(fù)合物，檢測纖維素分解菌的存在。若存在，菌落周圍會形成透明圈。,[答案]　(1)液體　選擇(2)異養(yǎng)型　酵母

11、菌或霉菌(3)(CH2O)　調(diào)整pH　滅菌　50℃　酒精燈火焰(4)青霉素和(CH2O)　瓊脂和纖維素粉　剛果紅　紅　透明圈,[鏈一串]1．微生物的營養(yǎng),[關(guān)鍵一點]　微生物之所以需要補充生長因子，是由于其體內(nèi)缺乏合成這些物質(zhì)所需要的酶或合成能力有限，而對那些合成能力足以滿足自身需求的微生物，其培養(yǎng)基中則不需額外補充生長因子。,2．培養(yǎng)基的類型,3．平板劃線法的注意事項(1)第一次劃線及每次劃線之前都需灼燒接種環(huán)進行滅菌，劃線

12、操作結(jié)束仍需灼燒接種環(huán)，每次灼燒目的如下表：,(2)灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后才能伸入菌液，以免因溫度太高殺死菌種。(3)劃線時最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連。(4)劃線用力要大小適當，防止用力過大將培養(yǎng)基劃破。,[通一類]1．右圖是微生物平板劃線示意圖。 劃線的順序為12345。下列操作 方法正確的是(　　)A．只需操作前將接種環(huán)放在火焰旁灼燒滅菌即可B．劃線操作需在火焰上進行C．在5區(qū)域中才

13、可以得到所需菌落D．在12345區(qū)域中畫線前后都要對接種環(huán)滅菌,解析：操作的前后都要對接種環(huán)進行滅菌。劃線操作需在火焰旁進行，而不是在火焰上；所有的劃線區(qū)都有可能得到所需菌落，只是5區(qū)得到的菌落相對較純。答案： D,[做一題][例2]　從自然菌樣篩選較理想生產(chǎn)菌種的一般步驟是：采集菌樣→富集培養(yǎng)→純種分離→性能測定。(1)不同微生物的生存環(huán)境不同，獲得理想微生物的第一步是 從合適的環(huán)境中采集菌樣，然后再按一定的方法分離、

14、純 化。培養(yǎng)嗜鹽菌的菌樣應(yīng)從 ________ 環(huán)境中采集。(2)富集培養(yǎng)指創(chuàng)設(shè)僅適合待分離微生物旺盛生長的特定環(huán)境 條件，使其數(shù)量大大增加，從而分離出所需微生物的培養(yǎng) 方法。對產(chǎn)耐高溫淀粉酶微生物的富集培養(yǎng)應(yīng)選擇 ______________ 的培養(yǎng)基，并在 ________ 條件下培養(yǎng)。,(3)下面兩圖是采用純化微生物培養(yǎng)的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖解，請分析接種的具體方法。獲得圖

15、A效果的接種方法是 ________ ，獲得圖B效果的接種方法是 ________ 。(4)配制培養(yǎng)基時各種成分在溶化后分裝前必須進行 ______，接種前要進行________ ，在整個微生物的分離和培養(yǎng)中，一定要注意在 ________ 條件下進行。,[解析]　 (1)嗜鹽菌就生活在高鹽環(huán)境中，如海灘等環(huán)境。(2)耐高溫淀粉酶應(yīng)存在于以淀粉為唯一碳源且在高溫環(huán)境中生存的微生物體內(nèi)。(3)從菌落分布的特點可以看出，A純化微生物的接

16、種方法是稀釋涂布平板法，B純化微生物的接種方法是平板劃線法。(4)培養(yǎng)基配制時應(yīng)先溶化，再調(diào)整pH值，然后滅菌。[答案]　 (1)海灘等高鹽　(2)以淀粉為唯一碳源　高溫　(3)稀釋涂布平板法 平板劃線法(4)pH調(diào)整　高壓蒸汽滅菌　無菌,[鏈一串]1．幾種典型微生物的篩選方法(1)培養(yǎng)基中加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌。(2)培養(yǎng)基中加入高濃度的食鹽可得到金黃色葡萄球菌。(3)培養(yǎng)基中缺乏氮源時，可以分離固氮微生物，因

17、為非固氮微生物不能在此培養(yǎng)基上生存。,(4)當培養(yǎng)基的某種營養(yǎng)成分為特定化學成分時，也具有分離效果。如當石油是唯一碳源時，可以抑制不能利用石油的微生物的生長，使能夠利用石油的微生物生存，達到分離能消除石油污染的微生物的目的。(5)改變微生物的培養(yǎng)條件，也可以達到分離微生物的目的，如將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)只能得到耐高溫的微生物。,2．微生物篩選過程中必要的兩種對照培養(yǎng)基及其作用,[關(guān)鍵一點]　即使使用了選擇培養(yǎng)基，所得到的微生

18、物也未必全為“目標微生物”，因此，常需對選擇培養(yǎng)基中菌落作進一步鑒定。,[通一類]2．下表為培養(yǎng)某種微生物的培養(yǎng)基配方，下列相關(guān)敘述錯誤的是 (　　),A．依物理性質(zhì)劃分，該培養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基B．依用途劃分，該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基C．培養(yǎng)基中的唯一碳源是(CH2O)，唯 一氮源是NaNO3D．若用該培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌，則應(yīng)除去(CH2O)，再添加纖維素,解析：由于配方中沒有瓊脂，所以從物理性質(zhì)上劃分為液體培

19、養(yǎng)基；由于配方中含有青霉素，對微生物有一定的篩選作用，所以從用途上劃分為選擇培養(yǎng)基；由于培養(yǎng)基中含有青霉素，纖維素分解菌不能生存，除去(CH2O)外，還應(yīng)除去青霉素，同時添加纖維素和瓊脂。答案： D,3．苯酚是工業(yè)生產(chǎn)排放的有毒污染物質(zhì)，自然界中存在著能降解苯酚的微生物。某工廠產(chǎn)生的廢水中含有苯酚，為了降解廢水中的苯酚，研究人員從土壤中篩選獲得了只能降解利用苯酚的細菌菌株，篩選的主要步驟如下圖所示，①為土壤樣品。下列相關(guān)敘述錯誤的是

20、 (　　),A．圖中②培養(yǎng)目的菌株的選擇培養(yǎng)基中應(yīng)加入苯酚作為碳源B．如果要測定②中活細菌數(shù)量，常采用稀釋涂布平板法C．若圖中④為對照實驗，則其中應(yīng)以苯酚作為唯一的碳源D．使用平板劃線法可以在⑥上獲得單菌落,解析：用苯酚作為選擇培養(yǎng)基的特殊碳源，目的菌能夠存活，而其他菌因沒有可利用的碳源而不能生長。測定培養(yǎng)液中細菌數(shù)目多使用稀釋涂布平板法。若④為對照實驗，則④應(yīng)含除苯酚外的其他碳源，⑤以苯酚作為唯一碳源。使用稀

21、釋涂布平板法或平板劃線法都可以在⑥上獲得單菌落。答案： C,[做一題] [例3]　急性腸胃炎、手足口病分別是由細菌和病毒通過消化道進入人體導(dǎo)致的。因此檢驗飲用水的細菌含量和病毒含量是有效監(jiān)控疾病發(fā)生的必要措施，請回答下列與檢驗飲用水有關(guān)的問題：(1)檢驗大腸桿菌的含量時，通常將水樣進行一系列的梯度稀 釋，然后將不同稀釋度的水樣用涂布器分別涂布到瓊脂固 體培養(yǎng)基的表面進行培養(yǎng)，記錄菌落數(shù)量，這種方法稱為 __

22、____________________________。在下面所示的四種菌 落分布圖中，不可能是用該方法得到的是________。,(2)用該方法統(tǒng)計樣本菌落數(shù)時是否需要設(shè)置對照組？ ________。為什么？_____________________________。(3)如分別取0.1 mL已稀釋103倍的水樣分別涂布到三個瓊脂 固體培養(yǎng)基的表面進行培養(yǎng)，培養(yǎng)基記錄到大腸桿菌的菌 落數(shù)分別

23、為55、56、57，則每升原水樣中大腸桿菌數(shù)為 ________。,(4)已知大腸桿菌能發(fā)酵乳糖并產(chǎn)酸產(chǎn)氣，現(xiàn)提供足量的已滅菌的乳糖蛋白胨培養(yǎng)液和具塞試管，應(yīng)如何判斷待檢水樣中是否含有大腸桿菌？_______________________________________________________________________________________。,[解析]　純化大腸桿菌的方法——稀釋涂布平板法和平板劃

24、線法。刪除偏差太大的數(shù)據(jù)，對剩下的多個培養(yǎng)數(shù)據(jù)進行平均處理就可以得到水樣中的大腸桿菌數(shù)。大腸桿菌能發(fā)酵乳糖并產(chǎn)酸產(chǎn)氣，通過密封培養(yǎng)，大腸桿菌可以進行無氧呼吸產(chǎn)生氣體，以氣泡的形式釋放出來。,[答案]　 (1)稀釋涂布平板法　D　(2)需要　因為需要判斷培養(yǎng)基是否被雜菌污染(培養(yǎng)基滅菌是否合格)　(3)5.6×108　(4)通過無菌操作向試管內(nèi)注入一定量待檢水樣，再注入已滅菌的乳糖蛋白胨培養(yǎng)液將試管充滿，塞上塞子，混勻后置于3

25、7℃恒溫箱培養(yǎng)24 h。若試管內(nèi)有氣泡生成，則說明水樣中有大腸桿菌,[鏈一串]微生物的數(shù)量測定1．實驗流程,2．統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法(1)顯微鏡直接計數(shù)法： ①原理：利用特定細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物數(shù)量。 ②方法：用計數(shù)板計數(shù)。 ③缺點：不能區(qū)分死菌與活菌。,(2) 間接計數(shù)法(活菌計數(shù)法)： ①原理：當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。 通過

26、統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。 ②操作：為了保證結(jié)果準確，一般選擇菌落數(shù)在30～300 的平板進行計數(shù)。 ③計算公式：每克樣品中的菌株數(shù)＝(C÷V)×M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)。,3．操作提示(1)將待測樣品經(jīng)一系列10倍梯度稀釋，然后選擇3個稀釋度的菌液，分別取0.1 mL接種到已制備好的平板上，然后用

27、無菌涂布器將菌液涂布在整個平板表面，放在適宜的溫度下培養(yǎng)計數(shù)菌落數(shù)。(2)為使結(jié)果接近真實值，可將同一稀釋度菌液加到3個或3個以上的平板上，經(jīng)涂布、培養(yǎng)，計算出菌落平均數(shù)。,[關(guān)鍵一點]　統(tǒng)計的菌落往往比活菌的實際數(shù)目低。這是因為當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。因此，統(tǒng)計結(jié)果用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)來表示。,[通一類]4．通過實驗測定土壤中的細菌數(shù)量，下列與此操作有關(guān)的敘述中，不正確的是(　　)A．用

28、蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板B．取稀釋倍數(shù)分別為104、105和106倍的土壤稀釋液各0.1 mL，分別涂布于各組平板上C．將培養(yǎng)皿倒置，37℃恒溫培養(yǎng)12～24小時D．選擇菌落數(shù)在300個以上的培養(yǎng)皿進行計數(shù),.,解析：檢測土壤中細菌總數(shù)，用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板，取104、105、106倍的土壤稀釋液各0.1 mL，分別涂布于各組平板上，將平板倒置，37℃恒溫培養(yǎng)2

29、4～48小時，選擇菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)。答案： D,5．在做分離分解尿素的細菌實驗時，某同學從對應(yīng)106倍稀釋的培養(yǎng)基中篩選出大約150個菌落，而其他同學只選擇出大約50個菌落。某同學的結(jié)果產(chǎn)生原因可能有 (　　)①土樣不同　②培養(yǎng)基污染?、鄄僮魇д`?、軟]有設(shè)置對照A．①②③　　　　　　　B．②③④C．①③④ D．①②④,解析：某同學比其他同學的實驗結(jié)果數(shù)據(jù)大許多，可能