生化—肝功能檢驗(yàn)

1、第十三章 肝功能檢驗(yàn),第一節(jié) 概 述 第二節(jié) 某些肝疾病 的臨床生化第三節(jié) 肝功能試驗(yàn)第四節(jié) 肝功能試驗(yàn) 選擇原則,肝臟是人體最重要的器官之一，肝臟病變會(huì)引起多種功能的障礙，臨床上常通過(guò)一些試驗(yàn)來(lái)了解肝功能，幫助對(duì)肝膽疾病的診斷，預(yù)后判斷及療效觀察，這些試驗(yàn)統(tǒng)稱為肝功能試驗(yàn)。第一節(jié) 概 述 肝臟是人體最大的實(shí)質(zhì)性器官，成人肝臟占體重的2%，約1.2～1.

2、5kg。它幾乎參與了體內(nèi)各種化學(xué)反應(yīng)，如分泌、排泄、解毒以及各種物質(zhì)代謝過(guò)程，故肝臟有 “物質(zhì)代謝中樞”之稱。,一、肝結(jié)構(gòu)的特點(diǎn) （一）肝具有雙重的血流輸入系統(tǒng) 即門靜脈和肝動(dòng)脈。門靜脈是肝的功能性血管，它匯集了胃腸、脾及胰腺的靜脈血流入肝，給肝帶來(lái)腸道吸收的大量營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和腐敗物。門靜脈血占肝總血量的75%。肝動(dòng)脈是肝的營(yíng)養(yǎng)性血管，給肝帶來(lái)大量的氧氣，同時(shí)也帶來(lái)肝外組織代謝產(chǎn)生的大量廢物，其血流量占肝總

3、血流量的25%。,（二）肝具有雙重輸出系統(tǒng) 即血液輸出系統(tǒng)和膽道輸出系統(tǒng)。 血液輸出系統(tǒng)是指肝靜脈，出肝后經(jīng)下腔靜脈與體循環(huán)相通，使經(jīng)肝處理后的代謝物通過(guò)腎臟隨尿排出。 膽道輸出系統(tǒng)是指肝細(xì)胞分泌的膽汁通過(guò)膽道排入腸道，隨膽汁排出的有膽汁酸鹽和一些代謝產(chǎn)物。,（三）肝細(xì)胞的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)特點(diǎn) 肝細(xì)胞中亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)豐富。 含有豐富的線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和核糖體

4、。使肝臟能量供應(yīng)充分，并大量合成蛋白質(zhì)和脂類。 含有大量的溶酶體和高爾基復(fù)合體。促進(jìn)對(duì)吞噬產(chǎn)物的分解和一些蛋白質(zhì)的加工與成熟。 還有過(guò)氧化物酶體，能分解代謝中產(chǎn)生的過(guò)氧化氫，減輕活性氧的損傷。,（四）肝細(xì)胞的再生 肝細(xì)胞是體內(nèi)唯一具有再生能力的實(shí)質(zhì)細(xì)胞，而且再生能力很強(qiáng)。新生肝細(xì)胞的來(lái)源有兩種： 1.由已分化的肝細(xì)胞增殖而來(lái)。 2.由未分化的小葉內(nèi)膽管

5、上皮細(xì)胞分裂而來(lái)。 由于肝細(xì)胞有很強(qiáng)的再生能力，所以輕度的損傷，難以通過(guò)肝功能試驗(yàn)檢測(cè)出來(lái)。,二、肝臟的生物化學(xué)功能 （一）排泄功能 肝臟能分泌膽汁，很多代謝物可隨膽汁通過(guò)膽道排入腸道而排泄。如膽汁酸、膽紅素、氨等物質(zhì)。 1.膽汁酸代謝 （1）膽汁：由肝細(xì)胞分泌的液體，正常人每天分泌量500～1000ml，稱為肝膽汁。進(jìn)入膽囊后水分被重吸收而濃縮，稱為膽囊膽汁。膽汁中含有

6、膽汁酸鹽、膽色素、膽固醇、卵磷脂、粘蛋白、酶、尿素和無(wú)機(jī)鹽等物質(zhì)。其中膽汁酸鹽占固體成分50%以上。 膽汁既是一種消化液，也是排泄液。,膽固醇 7α-羥膽固醇,膽酸鵝脫氧膽酸,甘氨膽酸?；悄懰岣拾冰Z脫氧膽酸?；蛆Z脫氧膽酸,腸道,,,,,復(fù)雜反應(yīng),甘氨酸,牛磺酸,膽汁,膽道,初級(jí)游離膽汁酸,初級(jí)結(jié)合膽汁酸,初級(jí)膽汁酸的生成,膽 酸,鵝脫氧膽酸,?；蛆Z脫氧膽酸,甘氨膽酸,

7、初級(jí)膽汁酸,脫氧膽酸石膽酸,次級(jí)膽汁酸,大部分通過(guò)主動(dòng)重吸收經(jīng)門靜脈入肝,腸肝循環(huán),次級(jí)膽汁酸的生成與膽汁酸的腸肝循環(huán),甘氨膽酸 腸?；悄懰?道甘氨鵝脫氧膽酸?；蛆Z脫氧膽酸,膽酸 鵝脫氧膽酸,,,腸菌水解,腸菌還原,,,,一部分通過(guò)被動(dòng)重吸收經(jīng)門靜脈入肝,隨糞便排出,,,,脫氧膽酸,石膽酸,膽 酸,鵝脫氧膽酸,,,次級(jí)膽汁酸,7－脫氧,7－脫氧,① 促進(jìn)脂類的消化吸收,(4) 膽

8、汁酸的生理功能,② 防止膽石形成,膽汁酸有親水基團(tuán): 羥基、羧基、磺酰基,膽汁酸有疏水基團(tuán): 烴核、甲基,因此可降低脂和水相之間的表面張力,有助于脂類的消化, 吸收和維持膽汁中膽固醇的溶解,膽汁中膽汁酸鹽和磷脂酰膽堿, 可防止膽固醇結(jié)晶沉淀形成結(jié)石,2. 膽紅素代謝 膽色素是鐵卟啉化合物分解代謝的產(chǎn)物，主要包括膽紅素、膽綠素、膽素原和膽素，主要隨膽汁排泄。 （1）膽紅素（bilirubin）的生成,衰老RBC,,單核

9、吞噬細(xì)胞系統(tǒng),（肝、脾、骨髓）,珠蛋白,血紅素加氧酶,膽綠素還原酶,脂溶性，可進(jìn)入細(xì)胞產(chǎn)生毒害,血紅素,血紅蛋白,膽紅素,CO Fe,膽綠素,,（2）膽紅素在血中的運(yùn)輸,膽紅素,血液,水溶性，不能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，也不透過(guò)腎小球,未結(jié)合膽紅素間接膽紅素,膽紅素-清蛋白復(fù)合物,清蛋白,①限制了膽紅素自由通過(guò)細(xì)胞膜，免除了對(duì)細(xì)胞的毒害作用。 ②增加了水溶性，有利于在血液中的運(yùn)輸。,（3）肝臟在膽紅素代謝中的作用,未結(jié)合膽紅素

10、,Y-蛋白-膽紅素Z-蛋白-膽紅素,Y-蛋白Z-蛋白,葡萄糖醛酸-膽紅素,UDPGA,水溶性，不通過(guò) 細(xì)胞膜，可通過(guò)腎小球,肝細(xì)胞,結(jié)合膽紅素直接膽紅素,,隨膽汁排入腸道,攝取,轉(zhuǎn)化,排泄,（4）膽紅素在腸道的變化及腸肝循環(huán),結(jié)合膽紅素,膽素原,腸道,細(xì)菌 還原,大部分隨糞便排出80%～90%,少部分被重吸收10%～20%,,,,,大部分又隨膽汁排入腸道形成腸肝循環(huán),少部分進(jìn)入體循環(huán)通過(guò)腎隨尿排出,,經(jīng)門靜脈入肝,0.6～

11、4mg,40～280mg,腎,小部分 大部分 膽素原,,膽紅素－清蛋白復(fù)合物,單核－吞噬細(xì)胞,肝細(xì)胞,血 液,,清蛋白,,3.血氨代謝 （1）血氨的來(lái)源：①氨基酸的脫氨基作用及含氮化合物的分解，稱為內(nèi)源性氨。②腸道吸收，由未消化的蛋白質(zhì)和未吸收的氨基酸腐敗產(chǎn)生。 （2）血氨的去路：①合成尿素；②合成谷氨酰胺；③合成其他含氮化合物。 （3）尿素的合成與排泄：血氨進(jìn)入肝臟經(jīng)鳥氨酸循

12、環(huán)合成尿素，經(jīng)腎臟隨尿排去。,（1）在蛋白質(zhì)代謝中的作用：是機(jī)體合成蛋白質(zhì)的重要器官。除合成肝臟本身所需蛋白質(zhì)外，還合成近100種血漿蛋白。,（2）在氨基酸代謝中的作用：是體內(nèi)氨基酸分解代謝的主要場(chǎng)所。如脫氨基作用，調(diào)節(jié)血液中氨基酸的比例，合成尿素和一些含氮化合物。,（二）物質(zhì)代謝功能 1.營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝,維持血糖濃度恒定,,,合成肝糖原,肝糖異生,血糖高,（3）在糖代謝中的作用：維持血糖濃度的恒定。,血糖低,肝糖原分解,,,分泌膽

13、汁酸鹽，促進(jìn)脂類的消化吸收 。合成各種脂類，如TG，Ch，PL等。 進(jìn)行脂肪酸的β-氧化，產(chǎn)生酮體 。參與脂蛋白代謝，合成HDL、VLDL；,（4）在脂類代謝中的作用：對(duì)脂類的消化、吸收、分解、合成及運(yùn)輸?shù)冗^(guò)程均起有重要作用,肝功能受損,,脂肪肝,2.激素及維生素代謝 （1）在激素代謝中的作用：對(duì)多種激素進(jìn)行滅活和排泄，如類固醇激素、胰島素、腎上腺素、甲狀腺激素等。滅活后的產(chǎn)物大部分隨尿排出。,（2）在維生素代謝中的作用膽

14、汁酸鹽有助于脂溶性Vit的吸收。儲(chǔ)存維生素(A,K,D,B12) 。參與維生素的轉(zhuǎn)化。,一、黃疸的分類與生化診斷 （一）黃疸的分類 當(dāng)血清膽紅素濃度超過(guò)34.2μmol/L時(shí)，會(huì)導(dǎo)致皮膚、鞏膜黃染的現(xiàn)象，這稱為黃疸。根據(jù)黃疸的發(fā)病機(jī)制可分為三類：,第二節(jié) 某些肝疾病的臨床生化,1. 溶血性黃疸（肝前性黃疸） 由于各種原因使紅細(xì)胞大量破壞，以致未結(jié)合膽紅素明顯增加，超過(guò)肝臟的轉(zhuǎn)化能力，但結(jié)合膽紅素正常。新生兒

15、血腦屏障發(fā)育不全，游離膽紅素易進(jìn)入腦組織，與腦部基底核的脂類結(jié)合，將神經(jīng)核染成黃色，稱為核黃疸（膽紅素腦?。?2. 阻塞性黃疸（肝后性黃疸） 由于膽道阻塞，膽汁不能排出而淤積在膽管內(nèi)，使上端膽管內(nèi)壓力不斷升高，最后使小膽管和毛細(xì)膽管擴(kuò)張，通透性增加，甚至破裂，使膽汁返流入血，血中結(jié)合膽紅素增加。,3. 肝細(xì)胞性黃疸（肝源性黃疸） 由于肝細(xì)胞病變，肝功能減退，使肝臟對(duì)膽紅素的攝取、轉(zhuǎn)化和排泄作用發(fā)生障礙。一方面肝臟不能將未結(jié)合膽紅素轉(zhuǎn)化

16、成結(jié)合膽紅素，使血中未結(jié)合膽紅素增加；另一方面，病變區(qū)壓迫毛細(xì)膽管，使結(jié)合膽紅素返流入血，血中結(jié)合膽紅素也增加。,（二）黃疸的生化診斷 1. 血清總膽紅素和結(jié)合膽紅素的測(cè)定 用于黃疸類型的鑒別，肝細(xì)胞損害程度和預(yù)后判斷。 2. 尿三膽的測(cè)定 尿膽紅素、尿膽素原、尿膽素合稱為尿三膽。由于尿膽素是由尿膽素原遇空氣氧化而來(lái)，故臨床上一般只測(cè)定尿膽紅素和尿膽素原。,3. 膽紅素葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶的誘導(dǎo)試驗(yàn)

17、 （1）糖皮質(zhì)激素的誘導(dǎo)試驗(yàn)：糖皮質(zhì)激素能誘導(dǎo)肝細(xì)胞內(nèi)尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶的合成，促進(jìn)未結(jié)合膽紅素的轉(zhuǎn)化與排泄，使血清膽紅素迅速下降。 （2）苯巴比妥試驗(yàn)：苯巴比妥類藥物能誘導(dǎo)肝細(xì)胞內(nèi)Y蛋白和尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶的合成，苯巴比妥類藥物可用于核黃疸的治療。,二、肝硬化的生化 是由于多種損傷因素長(zhǎng)期或反復(fù)作用于肝，使肝細(xì)胞彌漫性變性、壞死，以及肝結(jié)締組織彌漫性增生，導(dǎo)致肝廣泛的纖維化和結(jié)節(jié)的形成稱為肝硬

18、化。,（一）肝硬化病因的分類 1. 確定的病因：①乙型、丙型病毒性肝炎；②乙醇中毒；③代謝性疾病：血色病、Wilson病、半乳糖血癥等；④肝內(nèi)、外長(zhǎng)期膽汁淤積；⑤門靜脈回流受阻；⑥免疫功能紊亂：狼瘡性肝炎；毒素及治療性藥物：氨甲蝶呤、異煙肼等。,乙醇的飲用量與肝硬化的發(fā)病率有密切關(guān)系，飲酒量越高的國(guó)家其肝硬化死亡率也越高。如飲酒量年人均量在10升以下的瑞典、英國(guó)、丹麥等國(guó)家，肝硬化死亡率在10/10萬(wàn)以下；而飲酒量年人

19、均在27升左右的法國(guó)，肝硬化死亡率為30/10萬(wàn)以上。由于長(zhǎng)期飲酒易形成乙醇性脂肪肝、乙醇性肝炎、乙醇性肝硬化。,乙醇在胃和小腸上部迅速被吸收（胃30%、小腸上部70%），被吸收的乙醇90%～98%在肝內(nèi)被代謝，其余的隨尿和呼出氣排出。 乙醇的代謝途徑有乙醇脫氫酶（alcohol dehydrogenase，ADH）乙醇氧化體系、微粒體乙醇氧化體系（microsomal ethanol oxidizing system，

20、MEOS）、NADPH氧化酶-過(guò)氧化氫酶體系、黃嘌呤氧化酶-過(guò)氧化氫酶體系。前二者最重要。,ADH乙醇氧化體系：CH3CH2OH ＋ NAD+ CH3CHO ＋ NADH ＋ H+CH3CHO CH3COOH 乙酰輔酶A 三羧酸循環(huán) 微粒

21、體乙醇氧化體系（MEOS）：CH3CH2OH ＋NADPH ＋H+＋ O2 CH3CHO＋ NADP+ ＋2H2O NADPH氧化酶-過(guò)氧化氫酶體系：NADPH ＋H+＋ O2 NADP+ ＋H2O2H2O2＋CH3CH2OH 2H2

22、O ＋ CH3CHO,ADH,乙醛脫氫酶,MEOS,NADPH氧化酶,過(guò)氧化氫酶,,,,,,,,黃嘌呤氧化酶-過(guò)氧化氫酶體系： 次黃嘌呤 ＋ H2O ＋ O2 黃嘌呤 ＋ H2O2 H2O2 ＋ CH3CH2OH 2H2O＋ CH3CHO 2.可能的原因：①營(yíng)養(yǎng)不良；②感染：新生兒梅毒

23、、血吸蟲病蟲卵所致門管區(qū)纖維組織增生；③隱原性肝硬化；④肉芽腫性肝硬化。,黃嘌呤氧化酶,過(guò)氧化氫酶,,,（二）肝硬化的生物化學(xué)檢查 肝硬化的早期診斷非常困難。近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的幾項(xiàng)生化檢查為肝硬化的早期診斷提供了重要信息。 1.單胺氧化酶（MAO）測(cè)定 血清MAO與肝纖維化程度成正比。 肝纖維化僅限于門脈區(qū)或中央靜脈周圍時(shí)，血清MAO幾乎全部正常。,門靜脈纖維增生侵入肝小葉實(shí)質(zhì)內(nèi)時(shí)，半數(shù)患者血清M

24、AO活性增高。 門靜脈區(qū)間或門靜脈區(qū)間與中央靜脈之間結(jié)締組織相連時(shí)，80%患者血清MAO活性增高。 當(dāng)有假小葉形成時(shí)，則100%患者血清MAO活性增高。,2.β-脯氨酸羥化酶（β-PH）測(cè)定 β-PH在膠原合成中起關(guān)鍵作用。當(dāng)肝纖維化時(shí)其含量和活性明顯增高。正常人為29.2±5.9ng/ml，肝硬化患者為654.9±90.2ng/ml。 3.血清透明質(zhì)酸（HA）測(cè)定

25、 肝纖維化時(shí)，門-腔靜脈分流增大，進(jìn)入肝內(nèi)清除的HA減少，使血清HA明顯增高。,4.血清Ⅲ型前膠原肽（PⅢP） 是由Ⅲ型前膠原經(jīng)內(nèi)切酶作用而產(chǎn)生的多肽。正常人為7.91±0.86μg/L，肝硬化患者明顯增高，診斷肝硬化的敏感性為95%，特異性為93%。,三、肝性腦病的生化機(jī)制 肝性腦病又稱肝昏迷，是由嚴(yán)重的肝病所致的中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂，是嚴(yán)重肝病的重危合并癥。目前認(rèn)為氨基酸的代謝障礙可能是肝性腦病發(fā)生的生

26、化基礎(chǔ)。,（一）氨中毒學(xué)說(shuō) 由于肝功能不全，肝臟合成尿素的功能障礙，血氨升高，血氨易通過(guò)血腦屏障，進(jìn)入腦組織，氨對(duì)腦組織有嚴(yán)重的毒害作用。如抑制丙氨酸脫氫酶的活性，影響乙酰輔酶A的生成；與三羧酸循環(huán)中α-酮戊二酸結(jié)合生成谷氨酸，耗竭三羧酸循環(huán)中α-酮戊二酸，減少ATP的生成；與谷氨酸結(jié)合生成谷氨酰胺，增加ATP的消耗。影響腦組織的能量代謝。,（二）假神經(jīng)遞質(zhì)學(xué)說(shuō) 在腸道，芳香族氨基酸，如酪氨酸和苯丙氨酸經(jīng)腸菌的氨基酸脫羧酶作用，生成

27、苯乙胺和酪胺，在正常情況下可被肝內(nèi)單胺氧化酶分解而清除，肝功能不全時(shí)，單胺氧化酶活性低下，苯乙胺和酪胺進(jìn)入腦組織，經(jīng)腦組織的非特異性羥化酶作用，生成苯乙醇胺和β-羥酪胺，它們與兒茶酚胺遞質(zhì)結(jié)構(gòu)相似，但不能傳遞神經(jīng)沖動(dòng)，故稱為假神經(jīng)遞質(zhì)。,假神經(jīng)遞質(zhì)釋放后引起神經(jīng)系統(tǒng)某些部位（如腦干網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)上行激動(dòng)系統(tǒng)）功能發(fā)生障礙，使大腦發(fā)生深度抑制而昏迷。 （三）氨基酸不平衡學(xué)說(shuō) 嚴(yán)重肝功能損傷和門腔靜脈短路時(shí)，血漿支/芳比明顯降低（

28、正常健康人為4.0，慢性肝功能不全為0.9，急性肝功能不全0.8）。,由于芳香族氨基酸主要在肝內(nèi)分解，肝功能不全，芳香族氨基酸在肝內(nèi)代謝發(fā)生障礙，在血中濃度增高；支鏈氨基酸主要在肌肉組織中代謝，肝功能不全時(shí)對(duì)胰島素的滅活障礙，高水平的胰島素促進(jìn)支鏈氨基酸大量進(jìn)入肌肉組織被分解，血中濃度降低。 芳香族氨基酸進(jìn)入腦組織，引起假神經(jīng)遞質(zhì)生成增多，5-羥色胺（抑制性神經(jīng)遞質(zhì)）增多，使中樞進(jìn)入抑制狀態(tài)。,一、血清膽紅素測(cè)定

29、 未結(jié)合膽紅素 間接膽紅素血清膽紅素 結(jié)合膽紅素 直接膽紅素 加速劑常用的有甲醇、乙醇、苯甲酸鈉、尿素。最近在血清中還發(fā)現(xiàn)了第三種膽紅素，稱為δ-膽紅素，性質(zhì)與結(jié)合膽紅素相似，含量很低。,,第三節(jié) 肝功能試驗(yàn),（一）重氮法

30、 對(duì)氨基苯磺酸 ＋ 亞硝酸鈉 氯化重氮苯磺酸 ＋ NaCl ＋ 2H2O 膽紅素 ＋氯化重氮苯磺酸 紫紅色的偶氮化合物

31、 λ=560nm 加速劑為甲醇。靈敏度較低，溶血標(biāo)本干擾大。重氮試劑在室溫中不穩(wěn)定，易分解，故一般在臨用前新鮮配制。,HCl,pH 1-2,,,（二）改良J-G法 1938年由Jendrossik和Grof建立，幾經(jīng)改進(jìn)成為今天廣泛應(yīng)用的J-G法。 加速劑為苯甲

32、酸鈉-咖啡因。 紫紅色的偶氮膽紅素在強(qiáng)堿性酒石酸鈉和咖啡因存在下，生成藍(lán)色的偶氮膽紅素。pH13，λ=660nm 靈敏度高，ε7.4×104；線性范圍寬，0～2736 μmol/L；顯色穩(wěn)定；精確度較好；干擾少。是我國(guó)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)會(huì)推薦的方法。,（三）膽紅素氧化酶法總膽紅素 ＋ 1/2O2 膽綠素 ＋ H2O膽綠素 ＋ O2

33、 淡紫色化合物 膽紅素在460nm波長(zhǎng)處，吸光度的下降與濃度成正比。在pH8.2時(shí)，膽紅素氧化酶可催化結(jié)合膽紅素和未結(jié)合膽紅素氧化；在pH4.5時(shí)，膽紅素氧化酶僅催化結(jié)合膽紅素氧化。因此，調(diào)節(jié)溶液pH可分別測(cè)定總膽紅素和結(jié)合膽紅素。 靈敏度高，干擾少，精確度好，線性范圍寬。,膽紅素氧化酶,,,【參考范圍】 血清總膽紅素 5

34、.1～17.1μmol/L 血清結(jié)合膽紅素 0～6μmol/L 結(jié)合膽紅素/總膽紅素 20%～35%,【臨床意義】 診斷黃疸和鑒別黃疸類型，血清總膽紅素17.1～34.2μmol/L為隱性黃疸，＞34.2μmol/L為臨床黃疸，根據(jù)結(jié)合膽紅素占總膽紅素的百分比可鑒別黃疸類型。 溶血性黃疸 結(jié)合膽紅素占總膽紅素的20%以下。 肝細(xì)胞性黃疸 結(jié)合膽紅素占總

35、膽紅素的35%以上。 阻塞性黃疸 結(jié)合膽紅素占總膽紅素的50%以上。,二、血氨測(cè)定 血氨主要來(lái)自腸道的吸收及組織中氨基酸的脫氨基作用。主要的去路是在肝臟經(jīng)鳥氨酸循環(huán)合成尿素。 血液中的游離氨以兩種形式存在，NH4+和NH3，在生理pH條件下，NH4+占98%以上。 血氨測(cè)定的方法主要有三類：化學(xué)法（堿性酚次氯酸鹽直接顯色法）；酶法（谷氨酸脫氫酶速率法）；離子選擇電極

36、法。,（一）堿性酚次氯酸鹽直接顯色法 血清經(jīng)鎢酸沉淀蛋白質(zhì)后，濾液中的與堿性酚次氯酸鹽試劑反應(yīng)生成藍(lán)色化合物（靛藍(lán)），λ=625nm，此反應(yīng)又稱Berthlot反應(yīng)。 顯色穩(wěn)定，但血液離體后，血液中的含氮化合物可分解產(chǎn)生氨，時(shí)血氨緩慢升高，此時(shí)應(yīng)迅速將血液標(biāo)本制成無(wú)蛋白濾液。,（二）谷氨酸脫氫酶速率法 血漿中的在NH4+足量的α-酮戊二酸和NADPH存在下，經(jīng)GLDH催化生成谷氨酸NADP

37、+，對(duì)340nm紫外光吸光度下降。NH4+ ＋α-酮戊二酸 ＋NADPH 谷氨酸 ＋ NADP+ ＋ H2O 【參考范圍】13～57μmol/L（酶法）,GLDH,,【方法評(píng)價(jià)】特異性強(qiáng)、分析時(shí)間短，在200μmol/L范圍內(nèi)線性良好，精密度好，批內(nèi)CV＝3.9%；批間CV＝4.5%?；厥章蕿?7.9%～102.7%。是較為理想的氨分析方法。 【臨床意義】肝性

38、腦病，重癥肝炎，尿毒癥血氨增高。,三、血清膽汁酸測(cè)定 膽酸 肝臟 游離型 鵝脫氧膽酸

39、 初級(jí)膽汁酸 結(jié)合型膽汁酸  腸道 脫氧膽酸 次級(jí)膽汁酸 石膽酸,,,,,

40、,甘氨膽酸甘氨鵝脫氧膽酸?；悄懰崤；蛆Z脫氧膽酸,肝臟在膽汁酸的生成、分泌、排泄和攝取等代謝過(guò)程中有極其重要的作用。血液流經(jīng)肝臟一次約90%的膽汁酸被攝取，故正常人血清TBA含量很低，一般在10μmol/L以下。任何引起肝細(xì)胞病理性損傷的過(guò)程都可使肝臟攝取膽汁酸能力降低，而導(dǎo)致血清TBA↑，故血清TBA測(cè)定是目前認(rèn)為最敏感的肝功能試驗(yàn)項(xiàng)目之一。 膽汁酸測(cè)定的方法有，氣相色譜法、氣相質(zhì)譜法、HPLC、放免法、酶法。,酶

41、法測(cè)定血清TBA  3α-羥類固醇 NAD+ 甲臢 3-酮類固醇 NADH NBT  3′-酮-Δ4-類固醇 甲臢

42、3α-羥類固醇脫氫酶（3α-HSD）3α-氧-5-β-類固醇Δ4-脫氫酶（Δ4-DH）氯化硝基四氮唑藍(lán)（NBT）,λ=540nm,λ=540nm,膽汁酸,黃遞酶,3α-HSD,,,Δ4-DH,本法的特點(diǎn)是效應(yīng)酶（3α-HSD）和偶聯(lián)酶（黃遞酶，Δ4-DH）雙途徑通向同一指示物（NBT），對(duì)指示物的顯色反應(yīng)產(chǎn)生放大效應(yīng)，大大提高了顯色產(chǎn)物的吸光度，使反應(yīng)靈敏度達(dá)到μmol/L水平。 【參考范圍】 0～7

43、μmol/L 【臨床意義】 急性肝炎；肝硬化；原發(fā)性肝癌；急性肝內(nèi)膽汁郁積。血清TBA100%出現(xiàn)異常增高，且較其他試驗(yàn)更靈敏。,四、血清麝香草酚濁度試驗(yàn) 血清麝香草酚濁度試驗(yàn)（thymol turbidity test，TTT）反映肝臟對(duì)蛋白質(zhì)代謝的功能狀態(tài)，當(dāng)肝臟發(fā)生實(shí)質(zhì)性病變時(shí)，可導(dǎo)致血清蛋白質(zhì)的質(zhì)和量的改變，在加入麝香草酚——巴比妥緩沖液后，麝香草酚可降低血清脂質(zhì)的分散力；低離子

44、強(qiáng)度巴比妥緩沖液使球蛋白溶解度降低，形成球蛋白-脂質(zhì)-麝香草酚復(fù)合物使溶液混濁。 【參考范圍】1～6單位（Shank單位） 【臨床意義】 急、慢性肝炎↑；阻塞性黃疸呈陰性反應(yīng)，血清脂質(zhì)增多↑,一、肝功能試驗(yàn)的意義 1. 幫助了解肝細(xì)胞有無(wú)實(shí)質(zhì)性損害及損害的程度、轉(zhuǎn)歸和預(yù)后。 2. 幫助了解肝功能有無(wú)異?；蛘系K及嚴(yán)重程度、轉(zhuǎn)歸和預(yù)后。 3. 幫助觀

45、察有無(wú)黃疸和黃疸的程度，并鑒別黃疸的類型。 4. 幫助了解病人對(duì)某些藥物的耐受性，以決定藥物的繼續(xù)使用與否。,第四節(jié) 肝功能試驗(yàn)的用途及評(píng)價(jià),二、臨床對(duì)肝功能試驗(yàn)的評(píng)價(jià) 1. 肝臟代償能力和再生能力很強(qiáng)。損害只有達(dá)到一定的程度才能通過(guò)肝功能試驗(yàn)反映出來(lái)。故肝功能試驗(yàn)結(jié)果正常時(shí)，不能完全排除肝細(xì)胞的損害。 2. 肝功能試驗(yàn)方法的特異性不高。很多肝外疾病，也可導(dǎo)致肝功能試驗(yàn)結(jié)果的異常，因此，

46、肝功能試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)異常時(shí)，也不一定表示肝細(xì)胞有損害。,3. 肝功能試驗(yàn)的局限性。肝功能試驗(yàn)方法都是以肝臟的某一種功能為依據(jù)而設(shè)計(jì)的，所以一種肝功能試驗(yàn)，只能反映肝功能的某一個(gè)側(cè)面，目前尚無(wú)一種理想的肝功能試驗(yàn)?zāi)茌^全面地反映肝臟的功能 。 三、肝功能試驗(yàn)的分類 根據(jù)代謝功能分類： 1. 與膽紅素代謝有關(guān)的試驗(yàn)：總膽紅素測(cè)定（TBIL），結(jié)合膽紅素測(cè)定（DBIL）。,2. 與蛋白質(zhì)代謝有關(guān)的試驗(yàn)：

47、總蛋白測(cè)定（TP），清蛋白測(cè)定（Alb），A/G比值，麝香草酚濁度試驗(yàn)（TTT）。 3. 與膽汁酸代謝有關(guān)的試驗(yàn)：總膽汁酸測(cè)定，各種膽汁酸測(cè)定。 4. 血清酶學(xué)試驗(yàn)：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT），天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST），γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT），堿性磷酸酶（ALP）。 5. 染料的排泄試驗(yàn)：靛氰綠（ICG）排泄試驗(yàn)，磺溴酚酞鈉（BSP）排泄試驗(yàn)。,本章小結(jié),1. 肝臟結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：

48、雙重輸入和輸出系統(tǒng)，再生能力強(qiáng)。 2. 肝臟在膽汁酸、膽紅素代謝中的作用（將膽固醇轉(zhuǎn)化成膽汁酸，對(duì)膽紅素的攝取、轉(zhuǎn)化、排泄）。 3. 膽紅素、膽汁酸代謝障礙和血清酶異常與肝臟疾病。 4. 血清膽紅素、膽汁酸測(cè)定的方法、原理、注意事項(xiàng)和臨床意義。 5. 肝功能試驗(yàn)的意義及評(píng)價(jià)。,復(fù)習(xí)思考題 1. 用簡(jiǎn)圖表示膽紅素代謝的過(guò)程。 2. 試述三種