實(shí)驗(yàn)五真菌的分離培養(yǎng)及形態(tài)觀察

1、實(shí)驗(yàn)五實(shí)驗(yàn)五真菌的分離培養(yǎng)及形態(tài)觀察真菌的分離培養(yǎng)及形態(tài)觀察真菌分離培養(yǎng)應(yīng)考慮所分離真菌的特性，配制合適的培養(yǎng)基，選擇所需的氣體環(huán)境。同時(shí)由于真菌分離材料常污染有大量細(xì)菌，所以可在培養(yǎng)基中加入抗菌素并在分離培養(yǎng)過(guò)程中嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌操作。目的要求目的要求1掌握真菌分離培養(yǎng)方法。2認(rèn)識(shí)真菌菌落的特征，比較與細(xì)菌菌落有何不同。3了解真菌載片培養(yǎng)法。4掌握觀察真菌的基本方法，并觀察其形態(tài)特征。操作步驟操作步驟—、真菌的分離培養(yǎng)方法、真菌的分離培養(yǎng)

2、方法（－）平板劃線分離法1取適合真菌的瓊脂培養(yǎng)基融化，冷至45℃，注入無(wú)菌平皿中，每皿15～20ml，制成平板待用。2取要分離的材料（如田土、混雜的或污染的真菌培養(yǎng)物、真菌）少許，投入盛無(wú)菌水的試管內(nèi)，振搖，使分離菌懸浮于水中。3將接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌并冷卻后，蘸取上述菌懸浮液，進(jìn)行平板劃線(同細(xì)菌的劃線法)。4劃線完畢，置溫箱中培養(yǎng)2～5d，待長(zhǎng)出菌落后，釣取可疑單個(gè)菌落先作制片檢查，若只有一種所需要的真菌生長(zhǎng)，即可進(jìn)行釣菌純培養(yǎng)。如有雜

3、菌可從單個(gè)菌落中釣少許菌制成懸液，再作劃線分離培養(yǎng)，有時(shí)需反復(fù)多次，才得純種。另外，也可在放大鏡的觀察下，用無(wú)菌鑷子夾取一段待分離的真菌菌絲，直接放在平板上作分離培養(yǎng)，可獲得該種真菌的純培養(yǎng)。（二）稀釋分離法（二）稀釋分離法1取盛有無(wú)菌水的試管5支（每管9ml），分別標(biāo)記1、2、3、4、5號(hào)。取樣品（如田土等）1g，投入1號(hào)管內(nèi)，振搖，使懸浮均勻。2用1ml滅菌吸管，按無(wú)菌操作法，從1號(hào)管中吸取1ml懸浮液注入2號(hào)管中，并搖勻；同樣由2

4、號(hào)管取1ml至3號(hào)管，依此類推，直至5號(hào)管。注意每稀釋一管應(yīng)更換一支滅菌吸管。3用2支無(wú)菌吸管分別由4號(hào)、5號(hào)試管中各取1ml懸液，并分別注入2個(gè)滅菌培養(yǎng)皿中，再加入融化后冷至45℃的瓊脂培養(yǎng)基約15ml，輕輕在桌面上搖轉(zhuǎn)，靜置，使冷凝成平板。然后倒置溫箱中培養(yǎng)，2～5d后，從中挑選單個(gè)菌落，并移植于斜面上。二真菌培養(yǎng)性狀觀察二真菌培養(yǎng)性狀觀察（一）真菌在固體培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)表現(xiàn)1.酵母菌菌落：酵母菌在固體培養(yǎng)基上多呈油脂狀或蠟脂狀，表面

5、光滑、濕潤(rùn)、黏稠，有的表面呈粉粒狀、粗糙或皺褶。菌落邊緣有整齊、缺損或帶絲狀。菌落顏色有乳白色、黃色或紅色等。2.霉菌菌落：將不同霉菌在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)2～5d，可見霉菌菌落呈絨毛狀、絮狀、蜘蛛網(wǎng)狀等。菌落大小依種而異，有的能擴(kuò)展到整個(gè)固體培養(yǎng)基，有的有一定的局限性（直徑1～2mm或更?。?。很多霉菌的孢子能產(chǎn)生色素，致使菌落表面、背面甚至培養(yǎng)基呈現(xiàn)不同的顏色，如黃色、綠色、青色、黑色、橙色等。（二）真菌在液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)表現(xiàn)室載片培養(yǎng)