南方紅豆杉中內(nèi)共生真菌的分離、鑒定及耦合培養(yǎng)初探.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、為研究內(nèi)共生真菌(endofungus)和其宿主的關(guān)系,自南方紅豆杉(Taxuschinensisvar.mairei)中分離了1000余株內(nèi)共生真菌,并做了初步分類鑒定。主要內(nèi)共生真菌分布于以下屬:圍小叢殼菌屬Glomerellasp.、葡萄痕孢屬Botryodermasp.、葡萄孢屬Botrytissp.、頭孢霉屬Cephalosporiumsp.、青霉屬Penicilliumsp.、曲霉屬Aspergillussp.、輪生菌屬Ve

2、rticilliumsp.、桶孢屬Amblyosporiumsp.、木霉屬Trichodermasp.、厚壁孔孢屬Gilmastixsp.、無色芽枝霉屬Hyalodendronsp.、擬莖點(diǎn)霉屬Phomopsissp.、粘鞭霉屬Gliomastixsp.、鐮刀菌屬Fusariumsp.、線殼囊孢屬Cytosporirasp.、小白殼囊孢屬Cytosporellasp.、皰霉屬Phomasp.、刺盤孢屬Colletotrichumsp.、

3、散囊菌屬Eurotiumsp.、黑曲霉屬Aspergillussp.、鏈毛孢屬Stroptothrixsp.、黑團(tuán)孢屬Periconiasp.、支鏈孢屬Alternariasp.、圓磚孢屬Vlocladiumsp.、樹粉孢屬Oidiodendronsp.、向基孢屬Baspetosriumsp.等。優(yōu)勢屬為鐮刀菌屬。 得到了9株能產(chǎn)紫杉醇的內(nèi)共生真菌,以菌株Y1117的產(chǎn)量性狀最高,針對Y1117進(jìn)行了菌種的系統(tǒng)鑒定,包括產(chǎn)物產(chǎn)量

4、鑒定、形態(tài)學(xué)鑒定和分子生物學(xué)(18SrDNA、Internaltranscribedspacer、β-tubulingene)鑒定,確定其為從南方紅豆杉中分離得到的一株能產(chǎn)紫杉醇的Fusarium屬新種,暫定名為美麗鐮刀茵(FusariummaireiChengL.etTaoWY.)。本菌株已申請專利,申請?zhí)枺?00510038424.8,本專利已公開,公開號:CN1670180A。 針對菌種篩選和菌種改良,進(jìn)行了高通量篩選的研

5、究,得到較優(yōu)的篩選條件為:玻璃紙平板培養(yǎng)5天,菌絲體50。C真空干燥5h,乙醇-氯仿(1:1)混合溶劑浸提2h,重復(fù)3次,HPLC/MS檢測??紤]到實(shí)驗(yàn)安全等因素,采用上述條件,以甲醇-二氯甲烷(1:1)混合溶劑代替乙醇-氯仿混合溶劑為高通量篩選的方案。針對內(nèi)共生真菌培養(yǎng)過程中紫杉醇的檢測方法進(jìn)行了驗(yàn)證和改良,認(rèn)為,快速準(zhǔn)確地分析菌絲體或發(fā)酵液中的紫杉醇,同時(shí)又能消除其它結(jié)構(gòu)類似物的影響,HPLC/MS是一個(gè)較好的選擇。 利用取

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