南方紅豆杉中內(nèi)共生真菌的分離、鑒定及耦合培養(yǎng)初探.pdf

1、為研究內(nèi)共生真菌(endofungus)和其宿主的關(guān)系，自南方紅豆杉(Taxuschinensisvar.mairei）中分離了1000余株內(nèi)共生真菌，并做了初步分類鑒定。主要內(nèi)共生真菌分布于以下屬：圍小叢殼菌屬Glomerellasp.、葡萄痕孢屬Botryodermasp.、葡萄孢屬Botrytissp.、頭孢霉屬Cephalosporiumsp.、青霉屬Penicilliumsp.、曲霉屬Aspergillussp.、輪生菌屬Ve

2、rticilliumsp.、桶孢屬Amblyosporiumsp.、木霉屬Trichodermasp.、厚壁孔孢屬Gilmastixsp.、無色芽枝霉屬Hyalodendronsp.、擬莖點(diǎn)霉屬Phomopsissp.、粘鞭霉屬Gliomastixsp.、鐮刀菌屬Fusariumsp.、線殼囊孢屬Cytosporirasp.、小白殼囊孢屬Cytosporellasp.、皰霉屬Phomasp.、刺盤孢屬Colletotrichumsp.、

3、散囊菌屬Eurotiumsp.、黑曲霉屬Aspergillussp.、鏈毛孢屬Stroptothrixsp.、黑團(tuán)孢屬Periconiasp.、支鏈孢屬Alternariasp.、圓磚孢屬Vlocladiumsp.、樹粉孢屬Oidiodendronsp.、向基孢屬Baspetosriumsp.等。優(yōu)勢屬為鐮刀菌屬。 得到了9株能產(chǎn)紫杉醇的內(nèi)共生真菌，以菌株Y1117的產(chǎn)量性狀最高，針對Y1117進(jìn)行了菌種的系統(tǒng)鑒定，包括產(chǎn)物產(chǎn)量

4、鑒定、形態(tài)學(xué)鑒定和分子生物學(xué)(18SrDNA、Internaltranscribedspacer、β-tubulingene)鑒定，確定其為從南方紅豆杉中分離得到的一株能產(chǎn)紫杉醇的Fusarium屬新種，暫定名為美麗鐮刀茵(FusariummaireiChengL.etTaoWY.)。本菌株已申請專利，申請?zhí)枺?00510038424.8，本專利已公開，公開號：CN1670180A。 針對菌種篩選和菌種改良，進(jìn)行了高通量篩選的研

5、究，得到較優(yōu)的篩選條件為：玻璃紙平板培養(yǎng)5天，菌絲體50。C真空干燥5h，乙醇-氯仿(1：1)混合溶劑浸提2h，重復(fù)3次，HPLC/MS檢測?？紤]到實(shí)驗(yàn)安全等因素，采用上述條件，以甲醇-二氯甲烷(1：1)混合溶劑代替乙醇-氯仿混合溶劑為高通量篩選的方案。針對內(nèi)共生真菌培養(yǎng)過程中紫杉醇的檢測方法進(jìn)行了驗(yàn)證和改良，認(rèn)為，快速準(zhǔn)確地分析菌絲體或發(fā)酵液中的紫杉醇，同時(shí)又能消除其它結(jié)構(gòu)類似物的影響，HPLC/MS是一個(gè)較好的選擇。 利用取