實驗二 從土壤中分離純培養(yǎng)微生物并作初步觀察鑒定

1、1實驗二實驗二從土壤中分離純培養(yǎng)微生物并作初步觀察鑒定從土壤中分離純培養(yǎng)微生物并作初步觀察鑒定土壤是微生物生活的大本營，微生物的種類和數(shù)量極其豐富，從土壤中可分離、純化得到許多有價值的菌株。從混雜的微生物群體中獲得只含某一種或某一株微生物的過程即微生物的分離純化，常用平板分離法，為獲得某種微生物的純培養(yǎng)，一般是根據(jù)該微生物對營養(yǎng)、酸堿度、T、氧氣等條件要求不同，而供給它適宜的培養(yǎng)條件，或加入某些抑制劑抑制其他菌生長，從而淘汰其他不需要的

2、微生物，如高氏一號，加酚液為抗菌藥物，抑制細菌，馬丁氏加孟加拉紅、氯霉素（類抗生素，還有紅霉素、磺胺，抑制細菌和放線菌，不抑真菌），再用平板劃線分離，純化該微生物，直至得到純菌株。第一部分第一部分培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基的配制一、一、實驗目的和內容實驗目的和內容目的：目的：學習和掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟。內容：內容：1、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制；2、高氏一號培養(yǎng)基的配制；3、馬丁氏培養(yǎng)基的配制。二、二、實驗材料和用具實驗材料和用具牛肉膏

3、、蛋白胨、瓊脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉紅、氯霉素、1molLNaOH、1molLHCl、KNO3、NaCl、K2HPO4.3H2O、MgSO4.7H2O、FeSO4.7H2O。試管、三角瓶、燒杯、量筒、玻璃棒、天平、牛角匙、pH試紙、棉花、牛皮紙、記號筆、線繩、紗布。三、三、操作步驟操作步驟（一）（一）牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應用最廣泛和最普通的細菌基礎培養(yǎng)基。配方：牛肉膏3g、蛋白胨

4、10g、NaCl5g、瓊脂15~20g、水1000ml、pH7.4~7.6。1、稱藥品、稱藥品按實際用量計算后，按配方稱取各種藥品放入大燒杯中。牛肉膏和蛋白胨可分別放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水溶解后倒入大燒杯。蛋白胨極易吸潮，故稱量時要迅速，并及時把試劑瓶蓋緊.2、加熱溶解、加熱溶解在燒杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉網上，小火加熱，并用玻璃棒攪拌，待藥品完全溶解后再補充水分至所需量。若配制固體培養(yǎng)基，則將稱好的瓊脂放入已溶解

5、的藥品中，再加熱融化，在此過程中，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底或溢出，最后補充所失水分。3、調、調pH用pH試紙或酸度計檢測培養(yǎng)基的pH值，若pH偏酸，可滴加1molLNaOH，邊加邊攪拌，并隨時檢測，直至達到所需pH范圍。若偏堿，則用1molLHCl進行調節(jié)。pH調節(jié)通常放在加瓊脂之前。注意pH值不要調過頭，以免回調而影響培養(yǎng)基內各離子的濃度。4、過濾、過濾液體培養(yǎng)基可用濾紙過濾，固體培養(yǎng)基可用4層紗布趁熱過濾，3水溶液，在1000mL培

6、養(yǎng)液中加入以上孟加拉紅溶液3.3ml混勻后再加入瓊脂加熱融化方法同(一).2、pH調節(jié)、分裝、包扎、滅菌及無菌檢查同（一）調節(jié)、分裝、包扎、滅菌及無菌檢查同（一）。3、氯霉素的加入、氯霉素的加入氯霉素受熱容易分解氯霉素受熱容易分解，所以臨用時，將培養(yǎng)基融化待溫度降至45oC左右時才能加入?？上葘⒙让顾嘏涑?%的溶液（配好的氯霉素溶液保存于20oC），在100ml培養(yǎng)基中加入1%氯霉素0.3ml，使每毫升培養(yǎng)基中含氯霉素30μg。四、注意

7、事項四、注意事項1、在配制培養(yǎng)基時，不可用銅或鐵鍋加熱溶化，以免金屬離子進入培養(yǎng)基中，影響細菌生長。2、稱藥品用的牛角匙不要混用。3、稱完藥品應及時蓋緊瓶蓋。五、實驗報告五、實驗報告寫出本實驗培養(yǎng)基的名稱、數(shù)量、配制過程，并指明要點。六、問題與思考六、問題與思考1、配制培養(yǎng)基有哪幾個步驟？在操作過程中應注意些什么問題？為什么？2、培養(yǎng)基配制完成后，為什么必須立即滅菌？若不能及時滅菌應如何處理？已滅菌的培養(yǎng)基如何進行無菌檢查？3、在馬丁氏

8、培養(yǎng)基中加入氯霉素的目的是什么？第二部分第二部分消毒和滅菌消毒和滅菌一、實驗目的和內容一、實驗目的和內容目的：目的：了解消毒和滅菌的原理，并掌握各種滅菌方法的操作步驟。內容：內容：1、高壓蒸汽滅菌；2、干熱滅菌法；3、過濾除菌法。二、實驗材料和用具二、實驗材料和用具待滅菌的培養(yǎng)基（實驗1）和鏈霉素溶液、自動立式壓力蒸汽滅菌器、移液管、手提式高壓蒸汽滅菌鍋、干熱消毒箱、培養(yǎng)皿、試管。三、操作步驟三、操作步驟（一）高壓蒸汽滅菌法（一）高壓蒸

9、汽滅菌法高壓蒸汽滅菌法適用于培養(yǎng)基、無菌水、工作服等物品的滅菌。I自動立式壓力蒸汽滅菌器的操作步驟自動立式壓力蒸汽滅菌器的操作步驟I1裝料裝料開蓋，把包扎好的滅菌物品放在滅菌桶內的篩板上，滅菌包體積一般不超過20cmX10cmX10cm為宜，各包之間留有間隙，以利于蒸汽穿透。在堆放滅菌包時應注意安全閥、放汽閥孔位置必須留出空位，保障其暢通放汽，否則因安全閥出氣孔堵塞不能工作造成事故。I2開機開機I21加水加水：接上本機標牌一致的電源，將