核分離技術(shù)

1、染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)（染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)（ChIP）實(shí)驗(yàn)方法）實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)（ChIP）通過與染色質(zhì)片段共沉淀和PCR技術(shù)，在體內(nèi)檢測與特異蛋白質(zhì)結(jié)合的DNA片段。ChIP技術(shù)最大的優(yōu)點(diǎn)就是在活體細(xì)胞狀態(tài)下研究了蛋白質(zhì)和目的基因結(jié)合狀況，減少了體外實(shí)驗(yàn)的誤差。在活體細(xì)胞中，先對與調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合的染色質(zhì)進(jìn)行分離，然后通過一定的方法（例如：超聲波）隨機(jī)剪切染色質(zhì)，用調(diào)節(jié)蛋白的抗體沉淀目的染色質(zhì)，再通過一定手段把目的染

2、色質(zhì)上的蛋白質(zhì)去除掉，最后用PCR等方法檢測鑒定共沉淀的DNA片段的特性。儀器和試劑儀器和試劑真空設(shè)備、渦旋器、液氮、冷凍離心管、離心機(jī)、超聲波粉碎儀、miracloth提取緩沖液1（EB1）:0.4M蔗糖；10mMTrisHCl，pH8.0；5mMβME；0.1mMPMSF；蛋白酶抑制劑混合物（aprotinin、pepstainA、Leupeptin、Antipain、TPCK、Benzaine）提取緩沖液2（EB2）:0.25M蔗

3、糖；10mMTrisHCl，pH8.0；10mMMgCl2；1%TritonX100；5mMβME；0.1mMPMSF；蛋白酶抑制劑混合物（同上）提取緩沖液3（EB3）：1.7M蔗糖；10mMTrisHCl，pH8.0；0.15%TritonX100；2mMMgCl2；5mMβME；0.1mMPMSF；蛋白酶抑制劑混合物（同上）核裂解緩沖液（NLB）：50mMTrisHCl，pH8.0；10mMEDTA；1%SDS；1mMPMSF和蛋白

4、酶抑制劑混合物（同上）實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)方法植物材料的準(zhǔn)備植物材料的準(zhǔn)備（以擬南芥為例）1液氮預(yù)冷研缽和杵子，液氮研磨幼苗成粉末狀。2在50ml管中加入30mlEB1懸浮組織。(此時(shí)，EB1中不含甲醛)34層miracloth過濾組織到一個(gè)新的50ml管中。44℃，2880g離心20min。5小心去上清，1mlEB2重懸沉淀。6轉(zhuǎn)移至一個(gè)新的1.5ml離心管。74℃，12000g離心10min。8300ulEB3重懸沉淀。9轉(zhuǎn)入另一已加入30