小鼠胎盤雙核細(xì)胞的分離與培養(yǎng).pdf

1、分類號(hào)：R711.4；Q813.1學(xué)校代碼：10464UDC：研究生學(xué)號(hào)：201015495z密級(jí)：碩士專業(yè)學(xué)位論文碩士專業(yè)學(xué)位論文小鼠胎盤雙核細(xì)胞的分離與培養(yǎng)學(xué)位申請(qǐng)人：人：付祥龍指導(dǎo)教師：師：劉鳳軍合作教師：師：李治力專業(yè)學(xué)位類專業(yè)學(xué)位類別：別：獸醫(yī)專業(yè)學(xué)位領(lǐng)域?qū)I(yè)學(xué)位領(lǐng)域：2012年5月摘要論文題目：文題目：小鼠胎盤雙核細(xì)胞的分離與培養(yǎng)小鼠胎盤雙核細(xì)胞的分離與培養(yǎng)專業(yè)：業(yè)：獸醫(yī)碩士獸醫(yī)碩士研究生：生：付祥龍付祥龍指導(dǎo)教師：指導(dǎo)教師

2、：劉鳳軍劉鳳軍摘要胎盤具有供給、代謝、排泄、分泌和免疫等功能，胎盤異常則會(huì)引起胎兒缺氧、窘迫、營(yíng)養(yǎng)不良、發(fā)育遲緩、智力受損、甚至胎死腹中等現(xiàn)象。滋養(yǎng)層細(xì)胞中的雙核細(xì)胞在胎盤形成與功能維持中的變化與胎盤異常的發(fā)生有密切聯(lián)系。本研究以建立小鼠雙核細(xì)胞的體外細(xì)胞培養(yǎng)模型為目的，為研究胎盤功能及妊娠相關(guān)疾病奠定基礎(chǔ)。1雙核細(xì)胞的分離：本實(shí)驗(yàn)分別用序貫消化法、多次胰蛋白酶法、胰蛋白酶膠原蛋白酶法、單次胰蛋白酶法和單次膠原蛋白酶法對(duì)胎盤組織進(jìn)行消化

3、，發(fā)現(xiàn)序貫消化法獲得的單細(xì)胞活性最高為73.3%1.8%，獲得的細(xì)胞數(shù)為（0.650.10）106個(gè)，胰蛋白酶＋膠原蛋白酶法獲得的細(xì)胞活性次之，為69.8%1.3%，二者間無顯著性差異（P＞0.05)，但二者細(xì)胞活性均顯著高于其他三組，分別為54.4%0.7%、49.4%1.4%、51.5%1.5%，三者之間無顯著性差異（P＞0.05)；將用序貫消化法獲得的細(xì)胞懸液通過Percoll密度梯度離心法離心，獲得的細(xì)胞用HE及臺(tái)盼藍(lán)染色法進(jìn)行

4、評(píng)估，雙核細(xì)胞的純度為45.5%0.2%，細(xì)胞活性約94.3%0.3%。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)所建立的方法可以用于小鼠胎盤雙核細(xì)胞的分離。2雙核細(xì)胞的培養(yǎng)與純化：本實(shí)驗(yàn)將Percoll密度梯度離心法獲得的雙核細(xì)胞隨機(jī)分為2組，分別采用反復(fù)貼壁法和多次差別消化法進(jìn)行純化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，傳至第3代時(shí)，反復(fù)貼壁法獲得的細(xì)胞純度(74.5%1.2%）略低于多次差別消化法（76.5%2.3%），且反復(fù)貼壁法純化雙核細(xì)胞的時(shí)間為10d，顯著少于多次差別消化法

5、，需要12d。將純化后的細(xì)胞分3組培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)添加谷胱甘肽組、50%成纖維細(xì)胞條件培養(yǎng)基β巰基乙醇組和用膠原處理培養(yǎng)瓶組的雙核細(xì)胞的活性分別為90.3%0.5%、95.1%0.2%和92.5%0.4%，三者之間無顯著性差異（P﹥0.05）。這些結(jié)果表明，原代培養(yǎng)物中的成纖維樣細(xì)胞可以通過2或3次的反復(fù)貼壁法和多次差別消化法除去，本研究的培養(yǎng)條件可以用于雙核細(xì)胞的體外培養(yǎng)。關(guān)鍵詞：詞：小鼠；胎盤；雙核細(xì)胞；分離；培養(yǎng)論文類型：論文類型：基礎(chǔ)