小鼠胎盤雙核細胞的分離與培養(yǎng).pdf

1、分類號：R711.4；Q813.1學校代碼：10464UDC：研究生學號：201015495z密級：碩士專業(yè)學位論文碩士專業(yè)學位論文小鼠胎盤雙核細胞的分離與培養(yǎng)學位申請人：人：付祥龍指導(dǎo)教師：師：劉鳳軍合作教師：師：李治力專業(yè)學位類專業(yè)學位類別：別：獸醫(yī)專業(yè)學位領(lǐng)域?qū)I(yè)學位領(lǐng)域：2012年5月摘要論文題目：文題目：小鼠胎盤雙核細胞的分離與培養(yǎng)小鼠胎盤雙核細胞的分離與培養(yǎng)專業(yè)：業(yè)：獸醫(yī)碩士獸醫(yī)碩士研究生：生：付祥龍付祥龍指導(dǎo)教師：指導(dǎo)教師

2、：劉鳳軍劉鳳軍摘要胎盤具有供給、代謝、排泄、分泌和免疫等功能，胎盤異常則會引起胎兒缺氧、窘迫、營養(yǎng)不良、發(fā)育遲緩、智力受損、甚至胎死腹中等現(xiàn)象。滋養(yǎng)層細胞中的雙核細胞在胎盤形成與功能維持中的變化與胎盤異常的發(fā)生有密切聯(lián)系。本研究以建立小鼠雙核細胞的體外細胞培養(yǎng)模型為目的，為研究胎盤功能及妊娠相關(guān)疾病奠定基礎(chǔ)。1雙核細胞的分離：本實驗分別用序貫消化法、多次胰蛋白酶法、胰蛋白酶膠原蛋白酶法、單次胰蛋白酶法和單次膠原蛋白酶法對胎盤組織進行消化

3、，發(fā)現(xiàn)序貫消化法獲得的單細胞活性最高為73.3%1.8%，獲得的細胞數(shù)為（0.650.10）106個，胰蛋白酶＋膠原蛋白酶法獲得的細胞活性次之，為69.8%1.3%，二者間無顯著性差異（P＞0.05)，但二者細胞活性均顯著高于其他三組，分別為54.4%0.7%、49.4%1.4%、51.5%1.5%，三者之間無顯著性差異（P＞0.05)；將用序貫消化法獲得的細胞懸液通過Percoll密度梯度離心法離心，獲得的細胞用HE及臺盼藍染色法進行

4、評估，雙核細胞的純度為45.5%0.2%，細胞活性約94.3%0.3%。結(jié)果表明，本實驗所建立的方法可以用于小鼠胎盤雙核細胞的分離。2雙核細胞的培養(yǎng)與純化：本實驗將Percoll密度梯度離心法獲得的雙核細胞隨機分為2組，分別采用反復(fù)貼壁法和多次差別消化法進行純化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，傳至第3代時，反復(fù)貼壁法獲得的細胞純度(74.5%1.2%）略低于多次差別消化法（76.5%2.3%），且反復(fù)貼壁法純化雙核細胞的時間為10d，顯著少于多次差別消化法

5、，需要12d。將純化后的細胞分3組培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)添加谷胱甘肽組、50%成纖維細胞條件培養(yǎng)基β巰基乙醇組和用膠原處理培養(yǎng)瓶組的雙核細胞的活性分別為90.3%0.5%、95.1%0.2%和92.5%0.4%，三者之間無顯著性差異（P﹥0.05）。這些結(jié)果表明，原代培養(yǎng)物中的成纖維樣細胞可以通過2或3次的反復(fù)貼壁法和多次差別消化法除去，本研究的培養(yǎng)條件可以用于雙核細胞的體外培養(yǎng)。關(guān)鍵詞：詞：小鼠；胎盤；雙核細胞；分離；培養(yǎng)論文類型：論文類型：基礎(chǔ)