生物電鏡在肝病研究中的應用

1、生物電鏡在肝病研究中的應用(白求恩醫(yī)學院臨床七年四班孟慶東70100447)摘要電子顯徽術已成為研究生命和人類疾病的重要手段。本文對電子顯微術在肝病研究領域中的應用情況作了綜述著重介紹了在肝病臨床診斷、肝炎的研究、多種理化因素對肝細胞超微結構的影響中所做的貢獻。本文通過查閱多種文獻資料，對電鏡技術在肝臟病變研究中的作用進行綜述。關鍵詞：生物電鏡；肝病研究；超微結構一.前言從20世紀30年代開始，隨著電子顯微技術的問世，人們能在原子的尺度

2、上觀察研究物質的結構，使人們的對物體的觀察由宏觀世界進入了原子級的微觀世界。目前的電鏡種類很多，有透射電鏡(TEM)、掃描電鏡(SEM)、掃描隧道電鏡、原子力電鏡等，但應用于臨床病理診斷中的主要是透射電鏡和掃描電鏡。前者注重組織核細胞內(nèi)的超微結構，后者則用于觀察組織和細胞內(nèi)的表面形貌。經(jīng)過80余年的發(fā)展，電子顯微鏡技術已成為醫(yī)學科學領域內(nèi)不可缺少的研究手段及工具，對醫(yī)學科學研究起著重要作用。臨床病理診斷為最終診斷，目前電鏡診斷技術已廣泛

3、應用于現(xiàn)代臨床病理診斷中，特別是在傳統(tǒng)的臨床診斷手段無法確診的病例，電子顯微鏡發(fā)揮著重大作用。二.生物電鏡在肝病診斷中的應用隨著電鏡技術的發(fā)展，以前無法明確通過病人表征或光鏡診斷和辨別的疾病已經(jīng)可以在電鏡下一覽無余，電鏡技術為一些難以確診的疾病提供了豐富的科學依據(jù)，為醫(yī)學的進步和發(fā)展做出了巨大貢獻。下面本文主要介紹Gilbert綜合征、糖尿病(DM)、肝豆狀核變性活檢組織中肝臟超微結構的改變。（1）Gilbert綜合征Gilbert綜合

4、征的肝組織表現(xiàn)不一。某些肝活檢標本，可發(fā)現(xiàn)血竇面肝細胞膜改變，細胞表面變平滑、微絨毛消失，Disse間隙膠原纖維增加；某些患者，可出現(xiàn)巨大線粒體，常含有增多，副晶格樣包涵體、較明顯的基質致密顆粒。肝細胞常見脂褐素顆粒多分布于毛細膽管周圍肝細胞內(nèi)，可單獨出現(xiàn)或伴隨其他改變。Gilbert綜合征的色素顆粒大小不等，卵圓形或不規(guī)則形并含有電子致密塊狀顆粒，與電子密度略低的聚集物以及脂滴互相混雜。這些溶酶體顆粒的基質由細小的、弱嗜鋨性的顆粒組成

5、。少數(shù)顆粒類似DubinJohnson綜合征的顆粒，但顆粒較小，缺少致密核芯結構。Gilbert綜合征需與其他遺傳性高膽紅素血癥鑒別，如CriglerNajjar綜合征、DubinJohnson綜合征和Rot綜合征。CriglerNajjar綜合征的超微結構改變中肝細胞缺少脂褐素、Kupffer細胞有膽色素沉積，DubinJohnson綜合征有特殊的含致密核芯結構的溶酶體，Rot綜合征除含雙色調溶酶體外，還可出現(xiàn)毛細膽管發(fā)育不良等表現(xiàn)，

6、可資鑒別。此外，還應排除溶血性黃疸，特別是遺傳性球形紅細胞增多癥，可通過掃描電鏡檢查紅細胞形態(tài)進行確診。有時Gilbert綜合征還可合并遺傳性球形紅細胞增多癥，更要注意鑒別診斷。對于急、慢性肝炎后出現(xiàn)的肝炎后高膽紅素血癥，尤其是非結合膽紅素持續(xù)或反復增高的病例應注意有無Gilbert綜合征的背景[1，2]。（2）糖尿病RER脫顆粒在血脂高的DM組更明顯這種病變導致脂蛋白合成障礙內(nèi)質網(wǎng)合成甘油三酯貯積增加。與臨床上DM患者常合并脂代謝異常

7、特別是高甘油三酯血癥和脂肪肝相(2)乙型肝炎40例慢性乙型肝炎患者，血清HBVDNA水平和肝組織某些超微結構損傷（線粒體腫脹、溶酶體增多、匯管區(qū)淋巴細胞浸潤、Kupffe細胞增生、肝細胞淤膽和間質纖維組織增生）呈正相關，但不呈直線相關（r=0.21，t=1.12，P0.05）；血清HBVDNA水平和肝組織某些超微結構損傷（內(nèi)質網(wǎng)增生擴張、高爾基體擴張、貯脂細胞增生、毛細膽管擴張淤膽、毛細血管增生）無相關性（P0.05）。血清HBVDNA

8、定量PCR法可真實反映乙型肝炎病毒感染、復制及病程變化。在臨床上動態(tài)檢測慢性乙型肝炎患者血清HBVDNA含量，有利于動態(tài)了解其肝組織某些超微結構損傷（線粒體腫脹、溶酶體增多、匯管區(qū)淋巴細胞浸潤、Kupffe細胞增生、肝細胞淤膽和間質纖維組織增生）變化；但是同時也提示：不能夠通過此法動態(tài)了解其肝組織另外一些超微結構損傷（內(nèi)質網(wǎng)增生擴張、高爾基體擴張、貯脂細胞增生、毛細膽管擴張淤膽、毛細血管增生）。由于乙型肝炎患者血清HBVDNA水平和肝組

9、織某些超微結構損傷（線粒體腫脹、溶酶體增多、匯管區(qū)淋巴細胞浸潤、Kupffe細胞增生、肝細胞淤膽和間質纖維組織增生）不呈直線相關，所以不能通過慢性乙型肝炎患者血清HBVDNA含量水平來妄加推測其肝組織某些超微結構損傷（線粒體腫脹、溶酶體增多、匯管區(qū)淋巴細胞浸潤、Kupffe細胞增生、肝細胞淤膽和間質纖維組織增生）的具體水平。HBVDNA是病毒復制和傳染性的直接標志。HBVDNA含量水平測定對于判斷乙型肝炎病毒復制程度、傳染性大小，抗病毒

10、藥物療效，病情變化和預后，為調整抗病毒藥物劑量、確定療程，可以提供可靠依據(jù)[8910]。（3）輸血后丙型肝炎過去大多認為肝細胞的改變均具有非特異性，與慢性乙型肝炎肝組織的改變幾乎相似且無明顯鑒別特征。本材料所見肝細胞間隙增寬，胞質密度降低，肝細胞內(nèi)線粒體縮小，形態(tài)異常。PTHC超微結構可見狄氏腔炎細胞浸潤，肝細胞腔隙有膠原沉積，儲脂細胞多見。大量的浸潤細胞將產(chǎn)生大量的淋巴因子，促使膠原增生對肝細胞產(chǎn)生毒性，從而引起肝損傷并導致炎癥慢性化

11、及纖維化。HCV免疫組化和原位雜交顯示多數(shù)肝小葉呈陰性反應，陽性細胞數(shù)量減少，多成散在性分布；HCVRNA多存在于肝小葉的肝細胞，并可見枯否氏細胞，單核細胞，竇襞內(nèi)皮細胞，及膽管上皮細胞。由于HCV的感染水平很低，感染人群血液循環(huán)中的HCVRNA含量波動是一般的免疫組化和原位雜交很難檢測出來的，但低含量HCVRNA水平即能引起HCV感染[11]。四多種理化因素對肝細胞超微結構的影響現(xiàn)代社會中環(huán)境污染日趨嚴重，各種微波、次聲波和有害氣體充

12、釋在我們身邊，因此，研究微波輻射、次聲波、二氧化硫等對肝細胞的影響對公民健康具有重要意義，下面本文將在這方面進行概述。（1）林蛙油營養(yǎng)液對微波輻射的保護作用林蛙油是地道的東北特產(chǎn)含有多種氨基酸、無機元素、維生素和多種復合多肽等生物活性因子可以提高機體免疫力功能和抗應激能力并能明顯提高巨噬細胞的吞噬率和吞噬指數(shù)清除自由基增強機體非特異性免疫功能和體液免疫功能。己糖激酶廣泛存在于以糖為能源的肝細胞內(nèi)是單糖氧化成能量被人體吸收利用的第一個關鍵

13、酶當肝臟受到損傷時該酶隨之下降。從實驗中可以看出C組損傷最為嚴重超微結構變化主要表現(xiàn)在肝竇明顯出血肝內(nèi)脂肪滴較多可見髓樣小體血清中C組己糖激酶活性也明顯低于空白對照組(A組)和林蛙油營養(yǎng)液超重輻射林蛙油營養(yǎng)液組(F組)超微結構變化與酶的變化基本一致。給予林蛙油營養(yǎng)液可使肝組織損害有所改善但與損害因素前和損害因素后給予無明顯關系(超微結構和酶的變化D組與E組均相差不大)。F組線粒體多、粗面內(nèi)質網(wǎng)豐富特別是糖原顆粒增多同時F組的己糖激酶水平