高效液相色譜思考題與練習(xí)題

1、思考題與練習(xí)題1.高效液相色譜是如何實(shí)現(xiàn)高效、快速、靈敏的？解：氣相色譜理論和技術(shù)上的成就為液相色譜的發(fā)展創(chuàng)造條件，從它的高效、高速和高靈敏度得到啟發(fā)，采用510μm微粒固定相以提高柱效，采用高壓泵加快液體流動(dòng)相的流速；設(shè)計(jì)高靈敏度、死體積小的紫外、熒光等檢測(cè)器，提高檢測(cè)靈敏度，克服經(jīng)典液相色譜的缺點(diǎn)，從而達(dá)到高效、快速、靈敏。2.簡(jiǎn)述液相色譜中引起色譜峰擴(kuò)展的主要因素，如何減少譜帶擴(kuò)張，提高柱效？解：液相色譜中引起色譜峰擴(kuò)展的主要因素

2、為渦流擴(kuò)散、流動(dòng)相傳質(zhì)、停留流動(dòng)相傳質(zhì)及柱外效應(yīng)。在液相色譜中要減少譜帶擴(kuò)張，提高柱效，要減少填料顆粒直徑，減小填料孔穴深度，提高裝填的均勻性，采用低黏度溶劑作流動(dòng)相，流速盡可能低，同時(shí)要盡可能采用死體積較小的進(jìn)樣器、檢測(cè)器、接頭和傳輸管線等。3.色譜柱A柱長(zhǎng)為15cm，載體粒度為5μm。另一B柱長(zhǎng)為30cm，載體粒度為10μm。兩柱的柱效相等嗎？解：∵l=Ldp∴l(xiāng)A=150.0005=30000lB=300.0010=30000A柱

3、的折合柱長(zhǎng)為30000，B柱的折合柱長(zhǎng)也為30000，表明組分在兩根柱內(nèi)從柱入口到出口都經(jīng)過30000個(gè)載體顆粒，兩柱的柱效相等。4.流動(dòng)相為什么要脫氣？常用的脫氣方法有拿幾種？解：流動(dòng)相中溶解氣體存在以下幾個(gè)方面的害處（1）氣泡進(jìn)入檢測(cè)器，引起光吸收或電信號(hào)的變化，基線突然跳動(dòng)，干擾檢測(cè)；（2）溶解在溶劑中的氣體進(jìn)入色譜柱時(shí)，可能與流動(dòng)相或固定相發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；（3）溶解氣體還會(huì)引起某些樣品的氧化降解，對(duì)分離和分析結(jié)果帶來誤差。因此，因

4、為組分的分配系數(shù)為K=CsCmCs與Cm分別為組分在固定相和流動(dòng)相中的濃度當(dāng)分子直徑大于孔徑時(shí)此時(shí)Cm=0∴K=0.當(dāng)分子直徑小于固定相孔徑時(shí)組分向空隙內(nèi)流動(dòng)相擴(kuò)散達(dá)到平衡時(shí)一半組分在空隙內(nèi)一半組分在空隙外此時(shí)K=1.0若分子直徑介于以上兩種極限情況之間K一定介于0與1之間可見體積排阻色譜中任何祖父呢的分配系數(shù)為0≤K≤1如果K1說明此時(shí)的分離方式已不是純粹的體積排阻色譜其分離過程受到其他作用力(如吸附)的支配.9.為了測(cè)定鄰氨基苯酚中

5、微量雜質(zhì)苯胺現(xiàn)有下列固定相:硅膠ODS鍵合相流動(dòng)相有:水甲醇異丙醚己烷應(yīng)選用哪種固定相流動(dòng)相為什么解：鄰氨基苯酚中微量雜質(zhì)苯胺測(cè)定為了良好分離應(yīng)讓苯胺先出峰由于苯胺的極性小于鄰氨基苯酚因此應(yīng)采用正相色譜法選用硅膠為固定相異丙醚己烷為流動(dòng)相.10.在ODS鍵合相固定相甲醇水為流動(dòng)相時(shí)試判斷四種苯并二氮雜苯的出現(xiàn)峰順序.為什么1.2.3.4.解：色譜條件為反相鍵合相色譜體系在反相色譜體系中極性大的組分k小首先出峰按四種苯并二氮雜苯的結(jié)構(gòu)出峰