高效液相色譜原理和操作詳解

1、高效液相色譜我國藥典收載高效液相色譜法項目和數(shù)量比較表：數(shù)量方法項目1985年版1990年版1995年版2000年版鑒別934150檢查1240160HPLC法含量測定760117387鑒于HPLC應用在藥品分析中越來越多，因此每一個藥品分析人員應該掌握并應用HPLC。I概論..................................................................................

2、............................................................2一、液相色譜理論發(fā)展簡況一、液相色譜理論發(fā)展簡況............................................................................................................2二、二、HPLC的特點和優(yōu)點的特點和優(yōu)點......

3、..........................................................................................................2三、色譜法分類三、色譜法分類...................................................................................................

4、.............................3四、色譜分離原理四、色譜分離原理............................................................................................................................3II基本概念和理論........................................

5、.................................................................................5一、基本概念和術(shù)語一、基本概念和術(shù)語........................................................................................................................

6、5二、塔板理論二、塔板理論....................................................................................................................................8三、速率理論三、速率理論（又稱隨機模型理論）....................................................

7、........................................9IIIHPLC系統(tǒng)..............................................................................................................................10一、輸液泵一、輸液泵................................

8、......................................................................................................11二、進樣器二、進樣器..........................................................................................................

9、............................13三、色譜柱三、色譜柱......................................................................................................................................14四、檢測器四、檢測器..................................

10、....................................................................................................17五、數(shù)據(jù)處理和計算機控制系統(tǒng)五、數(shù)據(jù)處理和計算機控制系統(tǒng)..........................................................................................

11、........20六、恒溫裝置六、恒溫裝置..................................................................................................................................20IV固定相和流動相.........................................................

12、............................................................20一、基質(zhì)（擔體）一、基質(zhì)（擔體）..........................................................................................................................20二、化學鍵合固定相二、化學鍵合固定相

13、......................................................................................................................22三、流動相三、流動相..........................................................................................

14、............................................231流動相的性質(zhì)要求............................................................................................................232流動相的選擇................................................

15、....................................................................243流動相的pH值.................................................................................................................244流動相的脫氣....................

16、................................................................................................255流動相的濾過...................................................................................................................

17、.256流動相的貯存....................................................................................................................267鹵代有機溶劑應特別注意的問題.............................................................................

18、.......268HPLC用水........................................................................................................................26樣品量少，容易回收——樣品經(jīng)過色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備。三、色譜法分類三、色譜法分類按兩相的物理狀態(tài)可分為：氣相色譜法(GC)和液相色譜法(LC)

19、。氣相色譜法適用于分離揮發(fā)性化合物。GC根據(jù)固定相不同又可分為氣固色譜法(GSC)和氣液色譜法(GLC)，其中以GLC應用最廣。液相色譜法適用于分離低揮發(fā)性或非揮發(fā)性、熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)。LC同樣可分為液固色譜法(LSC)和液液色譜法(LLC)。此外還有超臨界流體色譜法(SFC)，它以超臨界流體（界于氣體和液體之間的一種物相）為流動相（常用CO2），因其擴散系數(shù)大，能很快達到平衡，故分析時間短，特別適用于手性化合物的拆分。按原理分為吸附色

20、譜法(AC)、分配色譜法(DC)、離子交換色譜法(IEC)、排阻色譜法(EC，又稱分子篩、凝膠過濾(GFC)、凝膠滲透色譜法(GPC）和親和色譜法。（此外還有電泳。）按操作形式可分為紙色譜法(PC)、薄層色譜法(TLC)、柱色譜法。四、色譜分離原理四、色譜分離原理高效液相色譜法按分離機制的不同分為液固吸附色譜法、液液分配色譜法（正相與反相）、離子交換色譜法、離子對色譜法及分子排阻色譜法。1液固色譜法液固色譜法使用固體吸附劑，被分離組分在

21、色譜柱上分離原理是根據(jù)固定相對組分吸附力大小不同而分離。分離過程是一個吸附－解吸附吸附－解吸附的平衡過程。常用的吸附劑為硅膠或氧化鋁，粒度5~10μm。適用于分離分子量200~1000的組分，大多數(shù)用于非離子型化合物，離子型化合物易產(chǎn)生拖尾。常用于分離同分異構(gòu)體。2液液色譜法液液色譜法使用將特定的液態(tài)物質(zhì)涂于擔體表面，或化學鍵合于擔體表面而形成的固定相，分離原理是根據(jù)被分離的組分在流動相和固定相中溶解度不同而分離。分離過程是一個分配平衡

22、分配平衡過程。涂布式固定相應具有良好的惰性；流動相必須預先用固定相飽和，以減少固定相從擔體表面流失；溫度的變化和不同批號流動相的區(qū)別常引起柱子的變化；另外在流動相中存在的固定相也使樣品的分離和收集復雜化。由于涂布式固定相很難避免固定液流失，現(xiàn)在已很少采用?，F(xiàn)在多采用的是化學鍵合固定相，如C18、C8、氨基柱、氰基柱和苯基柱。液液色譜法按固定相和流動相的極性不同可分為正相色譜法(NPC)和反相色譜法(RPC)。正相色譜法正相色譜法采用極性