儀器分析實(shí)驗(yàn)薄層色譜4.6介紹

1、2011年4月1日,色譜法用途與分類 薄層色譜法 薄層色譜基本原理 薄層色譜基本特點(diǎn) 薄層色譜法的主要類型和吸附色譜原理 吸附薄層色譜的吸附劑 展開劑的選擇 比移值(Rf值)的求取 實(shí)驗(yàn)二 硅膠粘合薄層的活度測(cè)定,2011年4月1日,,色譜法是分離純化和鑒定有機(jī)物的重要方法之一。 色譜法可分為柱色譜、紙色譜、薄層色譜、氣相色譜及高效液相色譜等類型。,2011年

2、4月1日,薄層色譜法 (thin layer chromatography；TLC),固定相（吸附劑或載體）涂布成一均勻薄層，點(diǎn)樣，（密閉的容器中）展開，斑點(diǎn)顯色，（與對(duì)照物質(zhì)）比較進(jìn)行定性定量。,2011年4月1日,薄層色譜基本原理 薄層色譜（Thin Layer Chromatography）常用TLC表示，它是將固定相均勻地涂在薄板（如玻璃板）上，依靠毛細(xì)作用力或重力，使流動(dòng)相通過固定相的一種色譜。,2011年4月1日,特點(diǎn)：

3、快，需十至幾十分鐘，同時(shí)展開多個(gè)試樣。試樣預(yù)處理簡(jiǎn)單，對(duì)試樣限制少。 載樣量比較大，適用于制備。 儀器簡(jiǎn)單，操作方便。分離能力較強(qiáng)。 靈敏度較高。,薄層色譜法的主要類型和吸附色譜原理,吸附薄層色譜法原理：組分在薄層板上吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的過程。吸附系數(shù)不等實(shí)現(xiàn)分離?！　∫话銟O性強(qiáng)的組分K大，Rf（比移值）?。粯O性弱的組分 K小，Rf值大。分配薄層色譜法,,,,2011年4月1日,吸附薄層色譜的吸

4、附劑,吸附劑硅膠：多孔性微粒，表面帶有硅醇基，呈弱酸性。原理：硅醇基(吸附中心)與極性基團(tuán)形成氫鍵（吸附性）。組分與硅醇基形成氫鍵（被吸附）的能力不同而分離?！　?yīng)用：酸性和中性物質(zhì)的分離，如有機(jī)酸酚類、醛類等 硅膠活度與含水量的關(guān)系：含水量高，活性級(jí)數(shù)高，活度低?；罨杭訜嶂?05℃左右，除去吸附水提高活度。（注意溫度不可過高）,吸附薄層色譜的展開劑(流動(dòng)相)洗脫能力 極性強(qiáng)的溶劑洗脫能力強(qiáng)常用溶劑

5、的極性強(qiáng)弱順序：　　　水＞酸＞吡啶＞甲醇＞乙醇＞正丙醇＞丙酮＞乙酸乙酯＞乙醚＞氯仿＞二氯甲烷＞甲苯＞苯＞三氯乙烷＞四氯化碳>環(huán)己烷>石油醚。,,,,吸附薄層色譜的展開劑（混合劑） 先用單一溶劑展開，若Rf值太小，則加入一定量極性強(qiáng)的溶劑，（如乙醇、丙酮等），如果Rf值太大，則加入適量極性弱的溶劑(如環(huán)己烷、石油醚等)，以降低極性。,定性參數(shù)1,比移值(Rf值)溶質(zhì)移動(dòng)距離與流動(dòng)相移動(dòng)距離之比。Rf =L/L0

6、 L為原點(diǎn)（origin）至斑點(diǎn)中心的距離，L0為原點(diǎn)至溶劑前沿（solvent front）的距離 與組分及色譜條件有關(guān),,,,2011年4月1日,實(shí)驗(yàn)二 硅膠粘合薄層的活度測(cè)定 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1．掌握粘合薄層的制備方法。 2．了解粘合薄層活度測(cè)定方法。二、實(shí)驗(yàn)原理 硅膠粘合薄層活度的測(cè)定方法，目前一般都采用Stahl（斯塔爾）活度測(cè)定法，以二甲黃、蘇丹紅G、靛酚藍(lán)各40mg，

7、溶于100ml揮發(fā)性溶劑中，滴加于薄層上，用石油醚展開10cm，應(yīng)不移動(dòng)，如改用苯展開則應(yīng)分成三個(gè)斑點(diǎn)，其Rf值分別為：二甲黃0.58，蘇丹紅0．19（？），靛酚藍(lán)0．08，展開時(shí)間約為30—40分鐘，經(jīng)本法測(cè)定合格的硅膠薄層其活度與柱色譜法所定活度的Ⅱ一Ⅲ級(jí)相當(dāng)。,2011年4月1日,,三、儀器及試劑1．色譜缸2．二甲黃、蘇丹紅、靛酚藍(lán)3．硅膠(色譜用)、羧甲基纖維素鈉。,2011年4月1日,四、操作步驟1．粘合薄層板的鋪制：

8、 稱取羧甲基纖維素鈉(CMC—Na) 0．75g，加入100ml水中加熱使溶解，放冷，放置后取14ml,再分次加入硅膠5g，調(diào)成糊狀后倒在清潔的玻璃板上，可幌動(dòng)或轉(zhuǎn)動(dòng)玻板，使其均勻流布于整塊玻板上，而獲得均勻的液層。將玻璃平放晾干，然后于110℃活化40分鐘，置干燥器中貯存?zhèn)溆谩?2011年4月1日,2．點(diǎn)樣：取羧甲基維纖素硅膠板一塊(7．5×15cm)在距板一端lcm處，用鉛筆輕輕劃一直線作為起始線，在起始線中

9、點(diǎn)用鉛筆作一標(biāo)記(o)，用內(nèi)徑約lmm的平口毛細(xì)管點(diǎn)加混合溶液，其直徑應(yīng)為2—3mm。,2011年4月1日,,3.展開,將點(diǎn)好的樣晾干或吹干后將板置于盛有展開劑石油醚(沸點(diǎn)60—90℃)的色譜缸中，浸入深度為0.5cm，待展開劑前沿離起始線約10cm處，混合物應(yīng)不移動(dòng)，取出硅膠板，待石油醚揮發(fā)后，再按同法以苯為展開劑，展開時(shí)間約為30—40分鐘，取出薄層板立即劃出前沿線，待苯揮散，觀察斑點(diǎn)的位置，,2011年4月1日,,,2011年4月

10、1日,五、注意事項(xiàng) 1．活化后薄層板應(yīng)貯于干燥器中，以免吸收濕氣而降低活性。2．點(diǎn)樣量不宜太多，否則會(huì)拖尾分離不好。3．展開劑苯中含水量的多少會(huì)影響Rf值，故須用于燥的苯和器皿。4．展開劑不要加得過多，起始線切勿浸入展開劑中,2011年4月1日,,2011年4月1日,薄層色譜操作方法要求,制板　均勻點(diǎn)樣　集中展開　(多種方式) 預(yù)飽和顯色,2011年4月1日,五十年代中期，斯塔爾（Stahl）