組織培養(yǎng)技術(shù)2

1、六、試述體細(xì)胞胚胎發(fā)生的實(shí)際應(yīng)用。六、試述體細(xì)胞胚胎發(fā)生的實(shí)際應(yīng)用。（1）無性繁殖）無性繁殖（2）人工（合成）種子的制備）人工（合成）種子的制備（3）分離可再生的原生質(zhì)體的材料）分離可再生的原生質(zhì)體的材料（4）遺傳轉(zhuǎn)化）遺傳轉(zhuǎn)化（5）代謝產(chǎn)物的合成）代謝產(chǎn)物的合成（6）遺傳資源的保存）遺傳資源的保存單細(xì)胞培養(yǎng)方法單細(xì)胞培養(yǎng)方法有平板培養(yǎng)法、看護(hù)培養(yǎng)法、微室培養(yǎng)法和條件培養(yǎng)基培養(yǎng)法。五、試述細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用。五、試述細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用。1突變體

2、選擇2植物次生代謝產(chǎn)物的生產(chǎn)（細(xì)胞的工廠化生產(chǎn)、高產(chǎn)細(xì)胞系的建立、“種子”培養(yǎng)、細(xì)胞的大量培養(yǎng)）3生產(chǎn)天然的植物成分4生物轉(zhuǎn)化5細(xì)胞固定化二、簡述花藥培養(yǎng)的一般程序。二、簡述花藥培養(yǎng)的一般程序。（1）取材取材：一般而言，單核后期花藥對(duì)培養(yǎng)反應(yīng)較好。（2）預(yù)處理預(yù)處理：適當(dāng)?shù)念A(yù)處理可以顯著提高花藥的愈傷組織誘導(dǎo)率。常用的預(yù)處理方法是低溫冷藏，具體的處理溫度和時(shí)間長度因物種而異：煙草7～9℃，7～14d；水稻7～10℃，10～15d；黑麥1

3、～3℃，7～14d；大麥3～7℃，7～14d。但低溫預(yù)處理對(duì)小麥效果不穩(wěn)定，有時(shí)還有負(fù)效果。（3）消毒消毒：通常只要以70％酒精噴灑或擦拭花器或包被著麥穗的葉鞘表面，即可達(dá)到滅菌要求。（4）接種接種（5）培養(yǎng)方式和培養(yǎng)條件培養(yǎng)方式和培養(yǎng)條件：培養(yǎng)方式：花藥的培養(yǎng)方式主要有3種：一是在瓊脂固化培養(yǎng)基表面培養(yǎng)，二是在加入30％Ficoll(水溶性聚蔗糖)的液體培養(yǎng)基表面飄浮培養(yǎng)，三是利用固體一液體雙層培養(yǎng)基培養(yǎng)，以便既能保持較高的接種密度，

4、培養(yǎng)基又不易失水干涸。培養(yǎng)條件：主要包括溫度和光照。（6）花粉植株的誘導(dǎo)花粉植株的誘導(dǎo)三、簡述花粉分離與純化的方法及花粉培養(yǎng)的方式。三、簡述花粉分離與純化的方法及花粉培養(yǎng)的方式。將小孢子從花藥里游離出來的主要方法有（1）自然散落法（2）擠壓法（①直接擠壓法、②研磨過濾收集法）（3）機(jī)械游離法（①磁攪拌法、②小型攪拌(超速旋切)法）純化方法：過篩、離心收集、使用聚果糖等制成不連續(xù)梯度等方法。花粉培養(yǎng)方式花粉培養(yǎng)方式：平板培養(yǎng)、液體培養(yǎng)、雙

5、層培養(yǎng)、看護(hù)培養(yǎng)、微室培養(yǎng)、條件培養(yǎng)基培養(yǎng)四、影響雄核發(fā)育的因素有哪些？四、影響雄核發(fā)育的因素有哪些？1）基因型）基因型：植物基因型是影響花藥離體培養(yǎng)誘導(dǎo)單倍體成功的最重要的因素之求也不同。（3）胎座和子房對(duì)胚珠培養(yǎng)的影響:胎座或子房的某些組織在胚珠發(fā)育初期起著重要的作用。（4）胚發(fā)育時(shí)期的影響）胚發(fā)育時(shí)期的影響:合子和早期原胚期的胚珠較難剖取和培養(yǎng)，對(duì)培養(yǎng)基成分也要求嚴(yán)格。培養(yǎng)發(fā)育到球形胚期的胚珠，較容易獲得種子，對(duì)培養(yǎng)基的要求也不高

6、。②子房培養(yǎng)子房培養(yǎng):（1）子房外植體的制備.（2）培養(yǎng)基:用于子房培養(yǎng)的培養(yǎng)基有MS、White、B5、N6、Nitseh等。此外，培養(yǎng)基的成分對(duì)子房的生長發(fā)育及成熟有很大的影響。（3）培養(yǎng)子房的發(fā)育.（4）影響子房培養(yǎng)的因素:可以通過控制培養(yǎng)基及激素條件調(diào)節(jié)子房發(fā)育的方向。五、離體胎座授粉技術(shù)有哪些方面的應(yīng)用？五、離體胎座授粉技術(shù)有哪些方面的應(yīng)用？①克服自交不親合性.②克服雜交不親合性:離體胎座授粉方法最重要的應(yīng)用潛力，是在那些由于

7、受精前不親合性障礙從未形成過雜種的植物間建立雜種。③通過孤雌生殖產(chǎn)生單倍體:能通過未受精子房培養(yǎng)產(chǎn)生孤雌生殖單倍體的植物已知有大麥、煙草和小麥等。④培育培育抗逆性植物抗逆性植物.一、什么是植物的胚胎培養(yǎng)一、什么是植物的胚胎培養(yǎng)什么是合子胚培養(yǎng)？簡述胚培養(yǎng)的方法什么是合子胚培養(yǎng)？簡述胚培養(yǎng)的方法和應(yīng)用。和應(yīng)用。(1)(1)植物胚胎培養(yǎng)植物胚胎培養(yǎng):是指對(duì)植物的胚、子房、胚珠和胚乳進(jìn)行離體培養(yǎng)，使其發(fā)育成完整植株的技術(shù)。(2)(2)合子胚培

8、養(yǎng)合子胚培養(yǎng):是指在無菌條件下分離和培養(yǎng)有性胚，以期獲得可育植株的一種技術(shù)。(3)(3)方法方法:成熟胚培養(yǎng)成熟胚培養(yǎng):①培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件:培養(yǎng)基只需含無機(jī)鹽和糖即可提供合適的生長條件及打破休眠.②操作:受精后的果實(shí)或種子(帶種皮)表面消毒剝離種胚培養(yǎng)完整植株.幼胚（未幼胚（未成熟胚）培養(yǎng)成熟胚）培養(yǎng):①幼胚指的是尚未成熟即發(fā)育早期的胚。在人工培養(yǎng)基上幼胚培養(yǎng)難成功利用胚乳看護(hù)培養(yǎng)可顯著提高幼胚的成活率.可用同種胚乳也可用異種胚乳.進(jìn)行

9、幼胚培養(yǎng)時(shí)，關(guān)鍵是維持胚性生長。此途徑為需要途徑.②操作:表面消毒(對(duì)受精后子房進(jìn)行表面消毒)切開子房壁取出胚珠剝離胚珠取出完整幼胚培養(yǎng)完整植株.(4)(4)應(yīng)用應(yīng)用:①通過通過“胚拯救胚拯救“獲得遠(yuǎn)緣雜種。獲得遠(yuǎn)緣雜種。通過“胚拯救”即可克服這種受精后障礙，產(chǎn)生遠(yuǎn)緣雜種。“胚拯救”的方式有3種：一是雜種幼胚在人工培養(yǎng)基上培養(yǎng)，二是雜種幼胚的胚乳看護(hù)培養(yǎng)，三是雜種幼胚的愈傷組織培養(yǎng)。其步驟是：有性雜交雜種幼胚培養(yǎng)雜種愈傷組織形成愈傷組織

10、增值莖芽分化植株再生。②獲得單倍體獲得單倍體。在遠(yuǎn)緣雜交之后，通過染色體的定向消除而產(chǎn)生單倍體，是胚培養(yǎng)的另一項(xiàng)新用途。③打破種子休眠，縮短育種周期打破種子休眠，縮短育種周期。在有些情況下，園藝植物如落葉樹的育種工作，會(huì)因種子休眠期太長而延誤。通過胚的離體培養(yǎng)，可使休眠期縮短。許多植物的種子發(fā)育不完全或有抑制物存在而影響種胚發(fā)芽。④提高種子萌發(fā)率。提高種子萌發(fā)率。長期營養(yǎng)繁殖的植物具有形成種子的能力，但其生活力較低，萌發(fā)成苗率低下，胚培