組織培養(yǎng)技術2_第1頁
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1、六、試述體細胞胚胎發(fā)生的實際應用。六、試述體細胞胚胎發(fā)生的實際應用。(1)無性繁殖)無性繁殖(2)人工(合成)種子的制備)人工(合成)種子的制備(3)分離可再生的原生質體的材料)分離可再生的原生質體的材料(4)遺傳轉化)遺傳轉化(5)代謝產物的合成)代謝產物的合成(6)遺傳資源的保存)遺傳資源的保存單細胞培養(yǎng)方法單細胞培養(yǎng)方法有平板培養(yǎng)法、看護培養(yǎng)法、微室培養(yǎng)法和條件培養(yǎng)基培養(yǎng)法。五、試述細胞培養(yǎng)的應用。五、試述細胞培養(yǎng)的應用。1突變體

2、選擇2植物次生代謝產物的生產(細胞的工廠化生產、高產細胞系的建立、“種子”培養(yǎng)、細胞的大量培養(yǎng))3生產天然的植物成分4生物轉化5細胞固定化二、簡述花藥培養(yǎng)的一般程序。二、簡述花藥培養(yǎng)的一般程序。(1)取材取材:一般而言,單核后期花藥對培養(yǎng)反應較好。(2)預處理預處理:適當的預處理可以顯著提高花藥的愈傷組織誘導率。常用的預處理方法是低溫冷藏,具體的處理溫度和時間長度因物種而異:煙草7~9℃,7~14d;水稻7~10℃,10~15d;黑麥1

3、~3℃,7~14d;大麥3~7℃,7~14d。但低溫預處理對小麥效果不穩(wěn)定,有時還有負效果。(3)消毒消毒:通常只要以70%酒精噴灑或擦拭花器或包被著麥穗的葉鞘表面,即可達到滅菌要求。(4)接種接種(5)培養(yǎng)方式和培養(yǎng)條件培養(yǎng)方式和培養(yǎng)條件:培養(yǎng)方式:花藥的培養(yǎng)方式主要有3種:一是在瓊脂固化培養(yǎng)基表面培養(yǎng),二是在加入30%Ficoll(水溶性聚蔗糖)的液體培養(yǎng)基表面飄浮培養(yǎng),三是利用固體一液體雙層培養(yǎng)基培養(yǎng),以便既能保持較高的接種密度,

4、培養(yǎng)基又不易失水干涸。培養(yǎng)條件:主要包括溫度和光照。(6)花粉植株的誘導花粉植株的誘導三、簡述花粉分離與純化的方法及花粉培養(yǎng)的方式。三、簡述花粉分離與純化的方法及花粉培養(yǎng)的方式。將小孢子從花藥里游離出來的主要方法有(1)自然散落法(2)擠壓法(①直接擠壓法、②研磨過濾收集法)(3)機械游離法(①磁攪拌法、②小型攪拌(超速旋切)法)純化方法:過篩、離心收集、使用聚果糖等制成不連續(xù)梯度等方法?;ǚ叟囵B(yǎng)方式花粉培養(yǎng)方式:平板培養(yǎng)、液體培養(yǎng)、雙

5、層培養(yǎng)、看護培養(yǎng)、微室培養(yǎng)、條件培養(yǎng)基培養(yǎng)四、影響雄核發(fā)育的因素有哪些?四、影響雄核發(fā)育的因素有哪些?1)基因型)基因型:植物基因型是影響花藥離體培養(yǎng)誘導單倍體成功的最重要的因素之求也不同。(3)胎座和子房對胚珠培養(yǎng)的影響:胎座或子房的某些組織在胚珠發(fā)育初期起著重要的作用。(4)胚發(fā)育時期的影響)胚發(fā)育時期的影響:合子和早期原胚期的胚珠較難剖取和培養(yǎng),對培養(yǎng)基成分也要求嚴格。培養(yǎng)發(fā)育到球形胚期的胚珠,較容易獲得種子,對培養(yǎng)基的要求也不高

6、。②子房培養(yǎng)子房培養(yǎng):(1)子房外植體的制備.(2)培養(yǎng)基:用于子房培養(yǎng)的培養(yǎng)基有MS、White、B5、N6、Nitseh等。此外,培養(yǎng)基的成分對子房的生長發(fā)育及成熟有很大的影響。(3)培養(yǎng)子房的發(fā)育.(4)影響子房培養(yǎng)的因素:可以通過控制培養(yǎng)基及激素條件調節(jié)子房發(fā)育的方向。五、離體胎座授粉技術有哪些方面的應用?五、離體胎座授粉技術有哪些方面的應用?①克服自交不親合性.②克服雜交不親合性:離體胎座授粉方法最重要的應用潛力,是在那些由于

7、受精前不親合性障礙從未形成過雜種的植物間建立雜種。③通過孤雌生殖產生單倍體:能通過未受精子房培養(yǎng)產生孤雌生殖單倍體的植物已知有大麥、煙草和小麥等。④培育培育抗逆性植物抗逆性植物.一、什么是植物的胚胎培養(yǎng)一、什么是植物的胚胎培養(yǎng)什么是合子胚培養(yǎng)?簡述胚培養(yǎng)的方法什么是合子胚培養(yǎng)?簡述胚培養(yǎng)的方法和應用。和應用。(1)(1)植物胚胎培養(yǎng)植物胚胎培養(yǎng):是指對植物的胚、子房、胚珠和胚乳進行離體培養(yǎng),使其發(fā)育成完整植株的技術。(2)(2)合子胚培

8、養(yǎng)合子胚培養(yǎng):是指在無菌條件下分離和培養(yǎng)有性胚,以期獲得可育植株的一種技術。(3)(3)方法方法:成熟胚培養(yǎng)成熟胚培養(yǎng):①培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件:培養(yǎng)基只需含無機鹽和糖即可提供合適的生長條件及打破休眠.②操作:受精后的果實或種子(帶種皮)表面消毒剝離種胚培養(yǎng)完整植株.幼胚(未幼胚(未成熟胚)培養(yǎng)成熟胚)培養(yǎng):①幼胚指的是尚未成熟即發(fā)育早期的胚。在人工培養(yǎng)基上幼胚培養(yǎng)難成功利用胚乳看護培養(yǎng)可顯著提高幼胚的成活率.可用同種胚乳也可用異種胚乳.進行

9、幼胚培養(yǎng)時,關鍵是維持胚性生長。此途徑為需要途徑.②操作:表面消毒(對受精后子房進行表面消毒)切開子房壁取出胚珠剝離胚珠取出完整幼胚培養(yǎng)完整植株.(4)(4)應用應用:①通過通過“胚拯救胚拯救“獲得遠緣雜種。獲得遠緣雜種。通過“胚拯救”即可克服這種受精后障礙,產生遠緣雜種?!芭哒取钡姆绞接?種:一是雜種幼胚在人工培養(yǎng)基上培養(yǎng),二是雜種幼胚的胚乳看護培養(yǎng),三是雜種幼胚的愈傷組織培養(yǎng)。其步驟是:有性雜交雜種幼胚培養(yǎng)雜種愈傷組織形成愈傷組織

10、增值莖芽分化植株再生。②獲得單倍體獲得單倍體。在遠緣雜交之后,通過染色體的定向消除而產生單倍體,是胚培養(yǎng)的另一項新用途。③打破種子休眠,縮短育種周期打破種子休眠,縮短育種周期。在有些情況下,園藝植物如落葉樹的育種工作,會因種子休眠期太長而延誤。通過胚的離體培養(yǎng),可使休眠期縮短。許多植物的種子發(fā)育不完全或有抑制物存在而影響種胚發(fā)芽。④提高種子萌發(fā)率。提高種子萌發(fā)率。長期營養(yǎng)繁殖的植物具有形成種子的能力,但其生活力較低,萌發(fā)成苗率低下,胚培

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