藥品質(zhì)量管理注射劑的質(zhì)量檢測(cè)

1、學(xué)習(xí)目標(biāo),知識(shí)目標(biāo)●掌握常用注射劑的質(zhì)量檢測(cè)方法●熟悉注射劑常規(guī)檢查項(xiàng)目●掌握注射劑中常見附加劑對(duì)含量測(cè)定的干擾及其排除方法●掌握維生素C注射液、鹽酸普魯卡因注射液、甲硝唑注射液質(zhì)量檢測(cè)的方法。能力目標(biāo)●能對(duì)注射劑進(jìn)行質(zhì)量檢查,注射劑的質(zhì)量檢測(cè),第一節(jié) 注射劑的質(zhì)量檢測(cè)注射劑的定義注射劑的分類注射劑的檢測(cè)步驟注射劑的常規(guī)檢查第二節(jié) 常用注射劑的檢測(cè),注射劑的質(zhì)量檢測(cè),一、注射劑的定義,注射劑是指藥物與適宜的溶劑

2、或分散介質(zhì)制成的供注入體內(nèi)的溶液、乳狀液或混懸液，及供臨用前配制或稀釋成溶液或混懸液的無菌粉末或濃溶液的無菌制劑。,返 回,注射劑的質(zhì)量檢測(cè),二、注射劑的分類,（一）注射液1、溶液型注射液 2、乳狀液型注射液 3、混懸型注射液（二）注射用無菌粉末（三）注射用濃溶液,返 回,注射劑的質(zhì)量檢測(cè),1、外觀及性狀檢查 2、鑒別 3、常規(guī)檢查及雜質(zhì)檢查 4、含量測(cè)定,三、注射劑的檢測(cè)步驟,注射劑的質(zhì)量檢測(cè),裝量檢查 裝量差異

3、檢查 可見異物檢查 不溶性微粒檢查 無菌檢查 熱原或細(xì)菌內(nèi)毒素檢查,返 回,四、注射劑的常規(guī)檢查,注射劑的質(zhì)量檢測(cè),取樣數(shù)量 不大于2ml者取供試品5支標(biāo)示裝量 2ml以上至50ml者取供試品3支 50ml以上的注射液照最低裝量檢查法,返 回,1、裝量檢查,,注射劑的質(zhì)量檢測(cè),檢查法 將內(nèi)容物分別用相應(yīng)體積的干燥注射器及注射針頭抽盡，然后注入

4、經(jīng)標(biāo)化的量具內(nèi)，在室溫下檢視。 測(cè)定油溶液或混懸液的裝量時(shí)，應(yīng)先加溫?fù)u勻，再用干燥注射器及注射針頭抽盡后，同前法操作，放冷，檢視。結(jié)果判斷 每支的裝量均不得少于其標(biāo)示量。,返 回,1、裝量檢查,檢查法 取供試品5瓶(支)，除去標(biāo)簽、鋁蓋，容器外壁用乙醇擦凈，干燥，開啟時(shí)注意避免玻璃屑等異物落入容器中，分別迅速精密稱定，傾出內(nèi)容物，容器用水或乙醇洗凈，在適宜條件下干燥后，再分別精密稱定每一容器的重量

5、，求出每瓶(支)的裝量與平均裝量。每瓶(支)裝量與平均裝量相比較，應(yīng)符合規(guī)定。,返 回,2、裝量差異檢查——注射用無菌粉末,結(jié)果判斷 平均裝量 裝量差異限度 0.05g至0.05g以下 ±15% 0.05-0.15g

6、 ±10% 0.15-0.50g ±7% 0.5g以上 ±5% 如有l(wèi)瓶(支)不符合規(guī)定，應(yīng)另取10瓶 (支)復(fù)試，應(yīng)符合規(guī)定。,返 回,2、裝量差異檢查,定義 可見異物是指在規(guī)定條件下目視可以觀測(cè)至的不溶性物質(zhì)，

7、其粒徑或長(zhǎng)度通常大于50μm檢查方法 燈檢法 光散射法,返 回,3、可見異物檢查,最常用,返 回,3、可見異物檢查——裝置,檢查法 取供試品20支(瓶)，除去容器標(biāo)簽，擦凈容器外壁，輕輕旋轉(zhuǎn)和翻轉(zhuǎn)容器使藥液中存在的可見異物懸浮(注意不使藥液產(chǎn)生氣泡)，置供試品于遮光板邊緣處，在明視距離(指供試品至人眼的距離，通常為25cm)，分別在黑色和白色背景下，手持供試品頸部使藥液輕輕翻轉(zhuǎn)，用目檢視。,

8、返 回,3、可見異物檢查——燈檢法,結(jié)果判定 （1）溶液型靜脈用注射液、注射用濃溶液20支(瓶)供試品中，均不得檢出可見異物。如檢出可見異物的供試品超過1支(瓶)，應(yīng)另取20支(瓶)同法檢查，均不得檢出。 （2）混懸型注射液 20支(瓶)供試品中，均不得檢出色塊、纖毛等可見異物。,返 回,3、可見異物檢查——燈檢法,本法系在可見異物檢查符合規(guī)定后，用以檢查溶液型靜脈用注射劑中不溶性微粒的大小及數(shù)量

9、。 包括光阻法和顯微計(jì)數(shù)法。,返 回,,4、不溶性微粒檢查,不適用于黏度過高和易析出結(jié)晶的制劑，也不適用于進(jìn)入傳感器時(shí)容易產(chǎn)生氣泡的注射劑。,操作條件 在潔凈度10000級(jí)條件下的局部100級(jí)單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行。 全過程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止微生物污染。檢查方法 直接接種法和薄膜過濾法,返 回,,5、無菌檢查,（1）直接接種法——非抗菌作用的供試品

10、 檢查法 即每支(或瓶)供試品按規(guī)定量分別接種至好氧菌、厭氧菌和真菌培養(yǎng)基的容器中。除另有規(guī)定外，好氧菌、厭氧菌培養(yǎng)基每管裝量不少于15ml，真菌培養(yǎng)基每管裝量不少于10ml，每種培養(yǎng)基接種的管數(shù)同供試品的檢驗(yàn)數(shù)量。 另取供試品1支（瓶）作陽性對(duì)照；取溶劑和稀釋液同法操作，作陰性對(duì)照。,返 回,,5、無菌檢查,（1）直接接種法——非抗菌作用的供試品培養(yǎng)與觀察陽性對(duì)照管培養(yǎng)48～72小時(shí)好氧菌、厭氧菌30-35℃

11、，真菌23-28℃培養(yǎng)14天。培養(yǎng)期間應(yīng)逐日觀察并記錄是否有菌生長(zhǎng)。,返 回,,5、無菌檢查,（1）直接接種法——非抗菌作用的供試品結(jié)果判斷 陽性對(duì)照混濁并確定有菌生長(zhǎng)；陰性對(duì)照應(yīng)澄清。 供試品管均澄清，或雖顯渾濁但經(jīng)確證無菌生長(zhǎng)，判供試品符合規(guī)定，若供試品管中任何一管顯渾濁并確證有菌生長(zhǎng)，判供試品不符合規(guī)定。,返 回,,5、無菌檢查,（2）薄膜過濾法——抗菌作用的供試品檢查法 取規(guī)

12、定量，直接過濾，或混合至含適量稀釋液的無菌容器內(nèi)，混勻，立即過濾。用適量的沖洗液沖洗濾膜，沖洗次數(shù)不得少于三次。,返 回,,5、無菌檢查,（2）薄膜過濾法——抗菌作用的供試品檢查法（1）如用封閉式薄膜過濾器，分別將100ml好氧、厭氧菌培養(yǎng)基及真菌培養(yǎng)基加入相應(yīng)的濾筒內(nèi)。（2）如用一般薄膜過濾器，取出濾膜，將其剪成3等份，分別置于含 50ml好氧、厭氧菌培養(yǎng)基及真菌培養(yǎng)基的容器中，其中一份做陽性對(duì)照用。結(jié)果判斷同直接接種法,返

13、 回,,5、無菌檢查,熱原檢查法—家兔法 本法系將一定劑量的供試品，靜脈注入家兔體內(nèi)，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)，觀察家兔體溫升高的情況，以判定供試品中所含熱原的限度是否符合規(guī)定。,返 回,,6、熱原或細(xì)菌內(nèi)毒素檢查,第八章 注射劑的質(zhì)量檢測(cè),試驗(yàn)前準(zhǔn)備（1）75％酒精、脫脂棉、甘油或凡士林、注射用水 （2）設(shè)備及用具：臺(tái)秤、獸用溫度計(jì)；注射器、針頭等應(yīng)置烘箱中用250℃加熱30分鐘除去熱原 （3）供試用家兔，測(cè)體

14、溫——正常體溫（4）供試品溶液,返 回,,6、熱原或細(xì)菌內(nèi)毒素檢查,第八章 注射劑的質(zhì)量檢測(cè),檢查法 取適用的家兔3只，測(cè)定其正常體溫后15分鐘以內(nèi)，自耳靜脈緩緩注入規(guī)定劑量并溫?zé)嶂良s38℃的供試品溶液，然后每隔30分鐘測(cè)量其體溫1次，共測(cè)6次，以 6次體溫中最高的一次減去正常體溫，即為該兔體溫的升高溫度(℃)。,接下頁,,6、熱原或細(xì)菌內(nèi)毒素檢查,第八章 注射劑的質(zhì)量檢測(cè),結(jié)果判斷

15、 在初試的3只家兔中，體溫升高均低于 0.6℃，并且3只家兔體溫升高總和低于1.4℃；或在復(fù)試的5只家兔中，體溫升高0.6℃或0.6℃以上的家兔不超過1只，并且初試、復(fù)試合并8只家兔的體溫升高總和為3.5℃或 3.5℃以下，均判為供試品的熱原檢查符合規(guī)定。,接下頁,,6、熱原或細(xì)菌內(nèi)毒素檢查,第八章 注射劑的質(zhì)量檢測(cè),返 回,,6、熱原或細(xì)菌內(nèi)毒素檢查,細(xì)菌內(nèi)毒素檢查 本法系利用鱟試劑來檢測(cè)或量化由革蘭陰性菌產(chǎn)生的

16、細(xì)菌內(nèi)毒素，以判斷供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定的一種方法。 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查包括兩種方法：即凝膠法和光度測(cè)定法。,第八章 注射劑的質(zhì)量檢測(cè),凝膠法試驗(yàn)前準(zhǔn)備（1）細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（2）鱟試劑 （3）細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水 （4）試驗(yàn)所用器皿等：250℃干烤至少60分鐘（5）供試品溶液（6）鱟試劑靈敏度復(fù)核及供試液干擾試驗(yàn),返 回,,6、熱原或細(xì)菌內(nèi)毒素檢查,第八章 注射劑的質(zhì)量檢測(cè)

17、,操作方法 （1）檢驗(yàn)用內(nèi)毒素溶液（2）鱟試劑原安瓿8支，2支供試品管，2支陽性對(duì)照管，2支陰性對(duì)照管，2支供試品陽性對(duì)照管。（3）封閉管口，垂直放入37℃±1℃適宜恒溫器中，保溫60分鐘±2分鐘。,接下頁,,6、熱原或細(xì)菌內(nèi)毒素檢查,第八章 注射劑的質(zhì)量檢測(cè),結(jié)果判斷 將試管從恒溫器中輕輕取出，緩緩倒轉(zhuǎn)180 ℃時(shí)，管內(nèi)凝膠不變形，不從管壁滑脫者為陽性，記錄為（+）；凝膠不能保持完整并

18、從管壁滑脫者為陰性，記錄為（-）。供試品管2支均為（－），應(yīng)認(rèn)為符合規(guī)定。,接下頁,,6、熱原或細(xì)菌內(nèi)毒素檢查,第八章 注射劑的質(zhì)量檢測(cè),五、注射劑中常見附加劑的干擾及其排除 1．抗氧劑 常用的抗氧劑有：亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉、維生素等。 干擾：氧化還原法；維生素C干擾紫外分光光度法。,第八章 注射劑的質(zhì)量檢測(cè),排除的方法：①加酸分解,NaHSO3+HCl Na

19、Cl+H2O+SO2,,,第八章 注射劑的質(zhì)量檢測(cè),排除的方法：②加入掩蔽劑法 加丙酮法,加甲醛法,第八章 注射劑的質(zhì)量檢測(cè),2．等滲調(diào)節(jié)劑 等滲調(diào)節(jié)劑：氯化鈉 干擾：離子交換法；銀量法。,五、注射劑中常見附加劑的干擾及其排除,第八章 注射劑的質(zhì)量檢測(cè),干擾機(jī)制：如：復(fù)方乳酸鈉注射液①離子交換RSO3H+CH3CHOHCOONa RSO3Na+CH3CHOHCOOH

20、RSO3H +NaCl RSO3Na +HCl②氫氧化鈉滴定 CH3CHOHCOOH+NaOH CH3CHOHCOONa+H2OHCl+NaOH NaCl+H2O,五、注射劑中常見附加劑的干擾及其排除,,,,,第八章 注射劑的質(zhì)量檢測(cè),排除的方法： 先用銀量法測(cè)定氯化鈉的量，再?gòu)南臍溲趸c的體積中，減去氯化鈉消耗硝酸銀的體積，據(jù)此可計(jì)算供試品待測(cè)主藥的量。,五、注射劑中常見附加

21、劑的干擾及其排除,第八章 注射劑的質(zhì)量檢測(cè),L－抗壞血酸,第二節(jié) 常用注射劑的質(zhì)量檢測(cè),一、維生素C注射液的質(zhì)量檢測(cè) （一）結(jié)構(gòu)與性質(zhì),1.結(jié)構(gòu),性質(zhì),2,二烯醇結(jié)構(gòu),二酮基結(jié)構(gòu),二烯醇結(jié)構(gòu),有活性,有活性,無活性,C3－OH的pKa = 4.17,C2－OH的pKa = 11.57,,,一元酸,L(+)－抗壞血酸活性最強(qiáng),手性C（C4、C5）,*,*,與堿反應(yīng),鑒別試驗(yàn),（二）,去氫抗壞血酸,VitC,,

22、（1）與AgNO3反應(yīng),（2）與2，6 - 二氯靛酚反應(yīng),(ChP2000),氧化型,,,玫瑰紅色,,,(ChP2000),（玫瑰色）,（無色）,,（三）雜質(zhì)檢查,1.溶液的顏色：分光光度法 取本品，加水稀釋成每1ml中含維生素C50mg的溶液，照紫外-可見分光光度法（附錄ⅣA），在420nm的波長(zhǎng)處測(cè)定，吸光度不得過0.06。,2. pH值 應(yīng)為5.0~7.03. 細(xì)菌內(nèi)毒素 取本品，依法檢查，每1m

23、l中含內(nèi)毒素量應(yīng)小于2.5EU,（三）雜質(zhì)檢查,,指示劑 淀粉指示液,,H+,精密量取本品適量（約相當(dāng)于維生素C 0.2g），加水15ml與丙酮2ml，搖勻，放置5分鐘，加稀醋酸4ml與淀粉指示液1ml，用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至溶液顯藍(lán)色并持續(xù)30秒鐘不褪。每1ml碘滴定液（0.05mol/L）相當(dāng)于8.806mg的C6H8O6,,,酸性環(huán)境 稀 HAC,新沸冷H2O,減慢VitC被O2氧化速

24、度,立即滴定,趕走水中O2,減少O2的干擾,加丙酮,減少亞硫酸氫鈉干擾,,,二、鹽酸普魯卡因注射液的質(zhì)量檢測(cè),芳伯氨基,,酯鍵,易水解,脂烴胺,,Cl－反應(yīng),,（一）結(jié)構(gòu)與性質(zhì),1.芳伯氨基,可用重氮化-偶合反應(yīng)鑒別和亞硝酸鈉滴定法測(cè)含量,2.酯鍵 易水解 引入特殊雜質(zhì)對(duì)氨基苯甲酸,3.脂烴胺側(cè)鏈 弱堿性 （1）可與生物堿沉淀試劑發(fā)生 沉淀反應(yīng)進(jìn)行鑒別

25、 （2）可用非水堿量法測(cè)定含量 （3）可與酸成鹽,4.溶解性 游離堿易溶于有機(jī)溶劑 其鹽易溶于水,（二）鑒別,1.芳香第一胺反應(yīng),（重氮化-偶合反應(yīng)）,,HCl,HCl,,,重氮鹽,偶氮化合物,2.水解反應(yīng),,二乙氨基乙醇↑,紅石蕊試紙變藍(lán),,,+,,,,,使?jié)駶?rùn)的紅色石蕊試紙變藍(lán),,3.氯化物的 反應(yīng),ChP附錄“一般鑒別試驗(yàn)”,1. 沉淀反應(yīng),使碘化鉀-淀粉試紙

26、顯藍(lán)色,△,4. 氧化還原反應(yīng),（三）特殊雜質(zhì)檢查,,對(duì)氨基苯甲酸,本品干燥時(shí)較穩(wěn)定，但其水溶液易水解和氧化，故中國(guó)藥典規(guī)定其注射液應(yīng)檢查對(duì)氨基苯甲酸,檢查方法 TLC（雜質(zhì)對(duì)照品法）,雜質(zhì)來源 中間體、水解產(chǎn)物,,,（四）含量測(cè)定,亞硝酸鈉滴定法,中國(guó)藥典指示終點(diǎn)方法 永停法,（一）性質(zhì)與結(jié)構(gòu)1.結(jié)構(gòu) 甲硝唑結(jié)構(gòu),返 回,第

27、八章 注射劑的質(zhì)量檢測(cè),,三、甲硝唑注射液的質(zhì)量檢測(cè),三、甲硝唑注射液的質(zhì)量檢測(cè)2.性質(zhì)（1）有硝基，在鋅粉、鹽酸作用下，還原生成氨基，可發(fā)生重氮化或重氮化-偶合反應(yīng)；（2）為含氮的雜環(huán)化合物，與三硝基苯酚反應(yīng)生成黃色鹽，熔點(diǎn)150℃；（3）有紫外吸收。,第八章 注射劑的質(zhì)量檢測(cè),（二）鑒別（1）取本品適量（約相當(dāng)于甲硝唑l0mg），加氫氧化鈉試液2ml微溫，即得紫紅色溶液；滴加稀鹽酸使成酸性即變成黃色，

28、再滴加過量氫氧化鈉試液則變成橙紅色。,返 回,第八章 注射劑的質(zhì)量檢測(cè),三、甲硝唑注射液的質(zhì)量檢測(cè),三、甲硝唑注射液的質(zhì)量檢測(cè),（2）取本品適量（約相當(dāng)于甲硝唑 0.1g），置水浴上蒸干，殘?jiān)恿蛩崛芤海?→100）4ml，應(yīng)能溶解；加三硝基苯酚試液10ml，放置后即生成黃色沉淀。,三、甲硝唑注射液的質(zhì)量檢測(cè) （三）雜質(zhì)檢查1. 2-甲基-5-硝基咪唑取本品適量，用水稀釋制成每1ml中約含甲硝唑0.lmg的溶液，

29、作為供試品溶液。用高效液相色譜法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。,返 回,第八章 注射劑的質(zhì)量檢測(cè),三、甲硝唑注射液的質(zhì)量檢測(cè) （三）雜質(zhì)檢查2. 氯化物精密量取本品適量(約相當(dāng)于甲硝唑50mg)，加水至50m1，加2%糊精溶液5ml，碳酸鈣0.1g與熒光黃指示液5-8滴，搖勻，用硝酸銀滴定液(0.lmol/L)滴定至渾濁液由黃綠色變?yōu)槲⒓t色。消耗硝酸銀滴定液(0.lmol/L)應(yīng)為13.2-14.6m1或35.1-38.8m1

30、(250m1：500mg)。,返 回,第八章 注射劑的質(zhì)量檢測(cè),三、甲硝唑注射液的質(zhì)量檢測(cè) （三）雜質(zhì)檢查,3.pH值 應(yīng)為4.5~7.04. 不溶性微粒 取裝量為100ml的本品1瓶，依法檢查(Ⅸ C)，應(yīng)符合規(guī)定。,三、甲硝唑注射液的質(zhì)量檢測(cè) （三）雜質(zhì)檢查,5.細(xì)菌內(nèi)毒素 取本品，依法檢查（Ⅺ E），每1ml中含內(nèi)毒素量應(yīng)小于0.35EU6.無菌

31、取本品適量（不少于10ml),用薄膜過濾法處理后，增加無孢核菌菌液陽性對(duì)照管，依法檢查（附錄Ⅺ H),應(yīng)符合規(guī)定。,（四）含量測(cè)定 精密量取本品適量，加鹽酸溶液(9→1000)定量稀釋制成每1ml中約含甲硝唑 12.5μg的溶液，照紫外-可見分光光度法(附錄ⅣA)，在277nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，按C6H9N3O3的吸收系數(shù)( )為377nm計(jì)算，即得。,返 回,第八章 注射劑的質(zhì)量檢測(cè),,,三、甲硝唑注射液的