鄉(xiāng)鎮(zhèn)檢驗人員培訓免疫

1、1,第一章 免疫學基礎知識,南充中心醫(yī)院免疫室 李欣,,2010. 4. 3,2,一、免疫（Immune）的定義,免疫的最初概念：免除瘟疫免疫的傳統(tǒng)概念：抗感染免疫現代免疫的概念：是機體識別“自身”與“非己”抗原，對“非己”抗原產生排斥作用，對自身抗原形成天然耐受的一種生理功能。,第一節(jié) 免疫的基本概念,3,正常情況下，這種生理功能對機體有益，可產生抗感染、抗腫瘤和維持機體生理平衡及穩(wěn)定的保護作用。 當免疫功能失調

2、時，在一定條件下，也會對機體產生不利的影響，如：超敏反應、自身免疫病和腫瘤等。,4,二、免 疫 的 功 能,免疫功能是免疫系統(tǒng)在識別和清除“非己”抗原的過程中所產生的各種生物學作用的總稱。主要包括： 1.免疫防御（Immunologic defence)： 是機體針對外來病原體的抗感染功能。正常時可防御病原體的感染；防御功能過強可產生超敏反應，過弱則表現為免疫缺陷。,5,2.免疫自穩(wěn)(immunologic homeos

3、tasis)： 免疫系統(tǒng)維持機體內環(huán)境相對穩(wěn)定的生理機能。 正常：可及時清除體內損傷、衰老、變性的細胞和抗原－抗體復合物，而對自身成份保持免疫耐受； 異常：可發(fā)生生理功能紊亂、自身免疫病等。,6,3.免疫監(jiān)視(immunologic surveillance)： 是機體免疫系統(tǒng)識別、清除體內突變、畸變細胞以及被病毒感染細胞的生理性保護作用。 喪失：機體突變細胞失控，可能導致腫瘤發(fā)生或出現病毒的持續(xù)感染

4、。,7,,,8,,三、免疫的類型及其特征,一、固有免疫：概念：出生時即有的天然免疫，經遺傳獲得，非特 異性，也稱非特異性/先天性免疫。組成：屏障結構、吞噬細胞、某些體液因子。二、適應性免疫：概念：出生后接觸特定抗原獲得的針對該物質 的免疫，也稱獲得性/特異性免疫。包括 體液免疫、細胞免疫。,9,,第二節(jié) 抗原基礎知識 一、抗原概念（antigen，Ag） 是能刺激機體免疫系統(tǒng)產生特異性

5、免疫應答、并能與相應的應答產物（抗體和/或效應淋巴細胞）在體內或體外發(fā)生特異性結合的物質。,10,二、抗原的特性 1 免疫原性： 抗原能刺激特異性免疫細胞，使之活化、增生、分化，最終產生抗體和效應淋巴細胞的特性。2 免疫反應性: 抗原可在體內、外與 相應的抗體/效應淋巴細胞發(fā)生特異性結合，產生免疫反應的特性。,11,三、完全抗原、半抗原、載體1、完全抗原 （complete antigen): 既有免疫原性又有抗原性的物

6、質，如多數蛋白質分子。2、半抗原（Hapten):又稱不完全抗原，單獨存在時只具有免疫反應性而無免疫原性的物質，如二硝基酚、青霉素。,12,3、載體 與半抗原結合后使其具有免疫原性的物質，即半抗原+載體=完全抗原。 四、 耐受原與變應原 1 耐受原 (tolerogen):引起機體產生免疫耐受的抗原。 2 變應原 (allergen): 引起機體產生變態(tài)反應的抗原。,13,五、 抗原的特異性與交叉反應,免疫原

7、性的特異性：某種抗原只能刺激機體產生某種特定的應答產物。如：傷寒桿菌免疫動物產生抗傷寒桿菌抗體 抗原性的特異性：抗原只能與其相應的抗體或致敏淋巴細胞結合。如：傷寒桿菌只能與抗傷寒桿菌抗體結合,14,,1 、 表位與抗原決定簇 抗原決定簇（antigenic determinant,AD）: 又稱表位（epitope），指抗原分子中決定 抗原特異性的特殊的化學基團，是抗原分子與抗體及T

8、CR/BCR受體特異結合的部位，也是被免疫細胞識別的標志及免疫反應具有特異性的物質基礎。 表位的性質、數目和空間構象決定了抗原 的特異性。,15,,2、抗原抗體反應的特異性 抗原的特異性是相對的，因為天然的抗原分子表面可存在著多種表位，不同的抗原分子表面存在相同或相似的表位，可引起交叉反應。3、抗原結合價： 能和相應抗體結合的功能性表位的數目 半抗原→ 單價 天然抗原→ 多價

9、多價抗原可同時與多種/多個抗體結合,16,4、 共同抗原和交叉反應 （1）共同抗原：兩種或兩種以上抗原具有的相同或相似的表位。,,,,,,,表位1,表位2,表位3,表位1,,A抗原,B抗原,17,,,（2）交叉反應：抗體與具有相同或相似的表位的抗原之間出現的反應。 血 清(Ab1、Ab2) + AgA 特異性反應 Ab1+AgB

10、 交叉反應 意義 與疾病發(fā)生有關：如急性腎小球腎炎 用于疾病診斷：如外斐反應,,,,,表位1,,表位3,表位1,,A抗原,B抗原,表位2,,,18,1、病原微生物及其代謝產物（1）病原微生物 如細菌、病毒、螺旋體，對機體有較強的免疫原性。（2）細菌的代謝產物 外毒素： 類毒素:外毒素經0.3%-0.4%的甲醛處理后,使其失去毒性而保留免疫原性的物質。,六、 醫(yī)學上重要的抗原,19,2、動物免

11、疫血清 用類毒素免疫動物后，動物的血清中可含有大量的抗毒素，即動物的免疫血清。這種抗血清對人體而言既提供特異性抗體，又是異種蛋白。3、異嗜性抗原 又稱Forssman抗原，指一類與種屬無關，存在于人、動物、植物和微生物之間的共同抗原。如：溶血性鏈球菌/人腎小球基底膜之間的共同抗原。,20,4、同種異型抗原 同一種屬不同個體之間的不同抗原。如人類的ABO、Rh血型抗原、HLA等。5、自身抗原 隱蔽的自身抗原與

12、自身免疫系統(tǒng)隔絕的組織受到外傷等因素而暴露，如：腦組織、精子外傷暴露。被修飾的自身抗原自身組織在理化、生物等作用下結構發(fā)生改變，如：變性的IgG。,21,6、腫瘤抗原 腫瘤特異性抗原（Tumor Specific Antigen，TSA）腫瘤相關抗原（Tumor Associated Antigen，TAA）7、超抗原(super antigen,SAg) 只需極低濃度即可激活5%-20%T細胞克隆，產生極強的免疫應答的抗原。

13、,22,8、其他 有絲分裂原： 植物血凝素、刀豆蛋白A T細胞 細菌脂多糖、葡萄球菌A蛋白 B細胞,,,23,七 佐劑 概念： 一類與抗原一起或預先注入機體，能增強機體對抗原的免疫應答或改變免疫應答類型的非特異性免疫增強劑。如：羊毛脂，石蠟油，內毒素。常見為福氏佐劑。,24,第三節(jié) 免疫球蛋白,,25,一﹑概 述,Ab：是由抗原刺激B 淋巴細胞轉化為漿細胞后所產生，并能與相應抗原特異性結合

14、、具有免疫功能的球蛋白，也稱為抗體（antibody,Ab）。,Ig：把具有抗體活性或化學結構與抗體相似的球蛋白統(tǒng)稱為免疫球蛋白。,26,,,Ig與Ab的關系,Ig與Ab的區(qū)別：Ig是化學結構的概念，Ab 是生物學功能的概念。所有的Ab都是Ig，但Ig并非都有抗體活性。,Ig,Ab,,,27,二、Ig的基本結構1、基本結構：由兩條相同的重鏈和兩條相同的輕鏈通過二硫鍵連接而成的四肽鏈結構。,28,抗體的立體模型,29,Ig的基本結構,,

15、30,2、免疫球蛋白的功能區(qū),VH和VL：與抗原特異性結合的部位；CL和CH1：某些同種異型Ig遺傳標記；IgG的CH2、IgM的CH3： 補體C1q結合點 激活補體經典途徑；CH3/CH4 結合不同細胞表面FcR 不同生物學效應。,,,31,1、IgG血清含量最多；半衰期最長；出生后3個月開始合成，3-5歲接近成人水平；是唯一能通過胎盤的Ig，發(fā)揮自然被動免疫功能；具有活化補體經典途徑的能力

16、（IgG3>IgG1>IgG2）；具有調理作用、ADCC作用。是主要的抗感染抗體，具有抗菌、中和病毒和中和毒素的作用；,三﹑五類Ig的特性和功能,32,2、IgM,為五聚體，分子量最大，稱為巨球蛋白；個體發(fā)育中最先出現的Ig，胚胎晚期即能產生，臍帶血IgM增高提示胎內感染（如風疹病毒、巨細胞病毒感染等）；抗原刺激機體時，是體內最先產生的Ig；血清IgM升高說明有近期感染；有強大激活補體能力，在機體免疫防御的早期中具

17、有重要作用。,33,3、IgA,有單體的血清型和分泌型IgA；分泌型IgA是機體粘膜局部抗感染免疫的重要因素（呼吸道和消化道）；初乳中的sIgA可對嬰幼兒發(fā)揮自然被動免疫作用。 4、IgE屬親細胞抗體，可與肥大細胞、嗜堿性粒細胞表面FcεR結合，介導I型超敏反應；是血清中含量最低的Ig；主要由呼吸道、胃腸道粘膜固有層的漿細胞產生。,34,5、IgD,血清中含量低，其生物學作用尚不清楚；SmIgD可作為B細

18、胞分化成熟標記，成熟B細胞同時表達SmIgM和SmIgD。,35,4﹑免疫球蛋白的生物學活性,(1)特異性結合抗原(2)激活補體 (3)通過與細胞FcR結合發(fā)揮生物效應：(4)選擇性傳遞 IgG通過胎盤；sIgA穿過粘膜的功能(5)具有免疫原性,36,免疫球蛋白的功能,37,第二章 抗原或抗體的檢測,南充中心醫(yī)院免疫室 李欣,38,第一節(jié) 概述,抗原-抗體反應包括沉淀反應、凝集反應、溶解反應、補體結合反應和

19、中和反應等。 抗原-抗體反應可用已知的特異性抗體檢測未知的抗原；也可用已知的抗原檢測未知的抗體。免疫熒光技術、免疫酶技術、同位素標記技術、發(fā)光免疫分析等免疫標記技術提高了抗原抗體反應的敏感性。,39,一﹑抗原-抗體反應的特點,抗原-抗體的結合是特異性結合,抗原抗體結合是分子表面的非共價鍵結合,抗原抗體反應可分為兩個階段 特異性結合階段 可見的反應階段,抗原和抗體結合是否呈現可見的反應現 象，于兩者的分子

20、比例密切相關,40,抗原抗體比例對反應現象的影響,41,42,二﹑抗原-抗體反應受多種因素影響,1 電解質：抗原-抗體反應通常應用0.85%的氯化鈉作為稀釋液 ，以供給適應濃度的電解質。2 溫度：一般常使用反應在37度水浴 或孵育箱中進行。3.酸堿度：抗原-抗體反應適應的酸堿度 為PH6--8。4.抗原抗體比例,抗原-抗體反應受多種因素影響,43,第二節(jié) 抗原抗體的檢測方法,凝集反應沉淀反應補體溶血反應和補體結合反應中和反

21、應用標記抗體或抗原進行的抗原抗體反應,44,一.凝集反應 (Agglutination),細菌、紅細胞等顆粒性抗原與相應抗體結合后形成凝集 現象，稱為凝聚反應。 (1)、直接凝集：將細菌或紅細胞與相應的抗體直接反應，出現細菌凝集或紅細胞凝集現象。又分為玻片法和試管法。 (2)、間接凝集：將可溶性抗原包被在紅細胞或乳膠顆粒表面，與相應抗體反應出現顆粒凝集現象。,45,血 球 凝 集,46,47,二.沉淀反應 （Precipitat

22、ion),血清蛋白質、細胞裂解液或組織浸液等可溶性抗原與相應抗體結合后出現沉淀物，這一類反應稱為沉淀反應。沉淀反應可在液體中進行，如絮狀沉淀。大多沉淀反應是用半固體瓊脂凝膠為介質，進行瓊脂擴散故也稱免疫擴散。 1.單向瓊脂擴散試驗 2.火箭電泳 3.雙向瓊脂擴散試驗 4.對流免疫電泳,48,49,50,51,52,三.免疫標記技術,用熒光素、同位素或酶等示蹤物質 標記抗體（或抗原）進行抗原-抗體反應。標

23、記物質與抗體（或抗原）的化學連接未改變抗體（或抗原）的免疫學特性，同時標記物的性質依然存在，因而極大的提高了反應的靈敏度，可以對微量物質進行定量、定性或定位檢測。免疫標記技術主要有四種基本類型：免疫熒光技術、免疫膠體金標記技術、免疫酶技術和同位素標記技術。,53,1.免疫熒光顯微技術,用熒光素（常用的有異硫氰酸熒光素），與抗體連接成熒光抗體，再與待測標本的抗原反應，置熒光顯微鏡下觀察，抗原抗體復合物散發(fā)出熒光，借此對標本中的抗原作鑒定和

24、定位。 包括直接熒光法、間接熒光法和補體法。,,,54,間接免疫熒光法示意圖,55,56,用熒光抗體示蹤或檢查相應抗原的方法稱熒光抗體法；用已知的熒光抗原標記物示蹤或檢查相應抗體的方法稱熒光抗原法。因為熒光色素不但能與抗體球蛋白結合，用于檢測或定位各種抗原，也可以與其他蛋白質結合，用于檢測或定位抗體，但是在實際工作中熒光抗原技術很少應用，所以人們習慣稱為熒光抗體技術，或稱為免疫熒光技術。,2.免疫熒光測定技術,57,（1）時間分辨

25、熒光免疫技術,原理：TRFIA 是用三價稀土離子及其螯合劑作為示蹤物，如銪（Eu3+) 來標記抗體、抗原，待反應體系發(fā)生后，用時間分辨熒光儀測定最后產物中的熒光強度，根據熒光強度和相對熒光強度比值，判斷反應體系中分析物的濃度，達到定量分析的目的。,58,優(yōu)點：技術集酶標記、同位素標記技術的優(yōu)點于一身，具有靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好、標記物制備簡便、儲存時間長、無放射性污染、檢測重復性好、操作流程短、標準曲線范圍寬和應用范圍廣泛等優(yōu)點，

26、,59,注意：所用試劑和器材務必防塵； Eu3+標記物的溶解和稀釋必須盡 量準確，務必在加樣1小時內配制。,60,（2）電化學發(fā)光免疫分析技術,原理：電化學發(fā)光免疫分析技術是繼放射免疫分析法、酶免疫分析法、熒光免疫分析法、化學發(fā)光免疫分析法后的最先進的免疫分析方法。電化學發(fā)光（ECL）是一種在電極表面由電化學引發(fā)的特異性化學發(fā)光反應，實際上包括了電化學和化學發(fā)光兩個過程。直接以[Ru(bpy)3]2+標記抗體，反

27、應時標記物直接發(fā)光。且[Ru(bpy)3]2+在電極表面的反應過程可以周而復始進行，產生許多光子，使光信號得以增強。,61,優(yōu)點：非放射性標記物避免了放射性核素的污染；磁性微粒（2.8µm）為固相載體表面積大，吸附率高，近似均相免疫反應； 鏈霉親和素與生物素是最特異及牢固的結合；應用范圍廣；檢測敏感度高；檢測所需樣本量少。,62,2.酶免疫測定(Enzyme Immunoassay, EIA),是用酶（常用的有辣根過氧化物酶

28、HRP和堿性磷酸酶AP) 標記的抗體進行的抗原抗體反應。EIA將抗原抗體反應的特異性與酶催化作用的高效性相結合，通過酶作用于底物后顯色來判定結果。常用的方法有酶聯(lián)免疫吸附試驗和酶免疫組化法，前者測定可溶性抗原或抗體，后者測定組織或細胞表面的抗原。,63,(1).酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA),將已知的抗原或抗體吸附在固相載體（聚苯乙烯微量反應板）表面，使抗原抗體反應在固相表面進行。用洗滌法將液相中游離成分洗除。主要有雙抗體夾心法、間接法

29、BAS-ELISA等。 (2) ELISA方法有:a.雙抗體 / 抗原夾心法測抗原 / 抗體: 包被在固相載體上的抗體 / 抗原與加入的待測抗原 / 抗體及酶標抗體 / 抗原三者在一定條件下進行溫育反應，若待測樣本中含有特異性抗原 / 抗體，則在孔內形成抗體 / 抗原-抗原 / 抗體-酶復合物, 經過嚴格洗滌后,復合物與底物作用后將顯色。,64,b.間接法測抗體： 將抗原包被在固相載體上，樣本中含有特異性抗體則結

30、合成抗原－抗體復合物，再與加入的酶標記抗抗體結合, 形成抗原－抗體－酶標抗抗體復合物。酶催化底物顯色。C.竟爭法測抗體： 包被抗原于固相載體上，檢測時加入樣本和酶標記抗體，如樣本中含有特異性抗體將與酶標記抗體竟爭與包被的固相抗原結合形成抗原－抗體復合物，固相上無酶催化底物，而不顯色。,65,包被抗體于固相載體上，檢測時加入樣本、中和抗原和酶標記抗體，如待測樣本中含有特異性抗體將與固相抗體竟爭中和抗原結合形成抗體－抗原－抗體復

31、合物，固相上無酶催化底物，而不顯色。d. 固相捕獲法測IgM抗體： 將抗抗體（抗人µ鏈）包被于固相載體上，如樣本中含有特異性抗體則結合成抗抗體－抗體復合物，加入抗原及酶標記抗體則進一步形成抗抗體－抗體－抗原－酶標記抗體復合物。酶催化底物并顯色。,66,67,68,ELISA原理及分類,69,3.膠體金法,膠體金法，又稱金標法，是一種常用的標記技術，是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原抗體的一種新型的免疫標記技術。目

32、前在醫(yī)學檢驗中的應用主要是免疫層析法和快速免疫金滲濾法，具有簡單、快速、準確和無污染等優(yōu)點。各類快速檢測試紙均采用免疫層析法，大量以塑料為載體的快速檢測塊均采用快速免疫金滲濾法,70,層析法免疫膠體金檢測試劑結構示意圖,71,C1—金標記鼠抗人HCG;T—金標記鼠抗人HCG+HCG+抗HCG; (測定區(qū)) C2---多余金標記鼠抗人HCG+羊抗小鼠HCG.(質控區(qū))此圖為雙抗體夾心法，顯色為陽性；競爭法相反。,

33、72,第三章 肝炎標志物檢測,,南充中心醫(yī)院免疫室 李欣,73,第一節(jié) 五型肝炎病毒,一.乙型肝炎病毒 乙型肝炎病毒（HBV）是具有復雜結構的DNA病毒，核心內含有一雙股DNA和DNA聚合酶，外面有一層含有表面抗原（HBsAg）的外衣 HBV的抗原復雜，其外殼中有表面抗原，核心成分中有核心抗原和e抗原，感染后可引起機體的免疫反應，產生相應的抗體。HBV感染的種屬范圍很窄，只局限于人和黑猩猩。 1. 乙型肝炎表面

34、抗原(HBsAg)和表面抗體(抗-HBs)HBsAg存在于病毒顆粒的外殼以及小球形顆粒和管狀顆粒。于感染后2-12周，丙氨酸轉氨酶(ALT)升高前，即可由血內測到， HBsAg有“a”、“b”、“y”、“r”、“w”等多種抗原決定簇，其中“a”是共同的抗原決定簇，在我國的主要是adr亞型。,74,乙肝病毒解剖模型（1）,75,乙肝病毒解剖模型（2）,76,抗-HBs對同型感染具有保護作用。近期感染者所產HBs屬IgM，而長期存在血中的為

35、抗-HBsIgG。 前S1及前S2蛋白具有與HBsAg不同的抗原。完整的HBV顆粒含有S蛋白及前S2蛋白，而缺陷病毒顆粒則無前S1蛋白。血清中出現前S1、前S抗原是HBV活動性復制的標志。 HBsAg陽性患者原發(fā)性肝癌的發(fā)病概率為正常人的200倍以上； 2. HBcAg主要存在于受染的肝細胞核內，復制后被釋至胞漿中，由胞漿中形成的HBsAg包裹，裝配成完整的病毒顆粒后釋放入血。血液中一般不能查到游離的HBcAg。血中的

36、Dane顆粒經去垢劑處理后可以查到其核心部分的HBcAg和DNA聚合酶。,77,早期出現者主要是抗-HBcIgM，是近期感染的重要標志；抗-HBcIgG出現較遲，但可長期存在。抗-HBc對HBV感染無保護作用。血清中抗-HBcIgM陽性表明體內有HBV復制，且有肝細胞損害；若抗-HbcIgG陽性且滴度高，伴以抗-HBs陽性，則為乙型肝炎恢復期；若抗-HBcIgG呈低滴度，抗-HBcIgM陰性，而抗-HBs陽性，則是既往感染的標志。3.

37、 HBeAg僅存在于HBsAg陽性者的血液中，通常伴有肝內HBVDNA的復制，血中存在較多Dane顆粒和HBVDNA聚合酶活性增高，因此，HBeAg陽性是病毒活動性復制的重要指標，傳染性高。急性肝炎患者若HBeAg持續(xù)陽性10周以上，則易于轉為持續(xù)感。,78,HBV是通過接觸、血液及血制品、母嬰垂直傳播等方式傳播。在我國約有60％的乙肝病毒攜帶者是通過母嬰垂直傳播的。二.甲型肝炎病毒（HAV） HAV屬微小核糖核酸病毒

38、 (RNA)主要引起急性感染，經糞－口途徑傳播，有季節(jié)性，可引起暴發(fā)流行。三.丙型肝炎抗體(HCV) 測定丙型肝炎抗體是判定急、慢性丙型肝炎的重要指標。丙型肝炎病毒（HCV）是一種具有脂質外殼的RNA病毒 HCV感染者血中的HCV濃度極低，抗體反應弱而晚，血清抗-HCV在感染后平均18周陽轉，至肝功能恢復正常時消退，而慢性患者抗-HCV可持續(xù)多年并具有傳染性。,79,在2個月左右的潛伏期后，只有大約四分之一的病人會出現食欲

39、差、疲倦、黃疸等癥狀；而大部分的患者卻沒有任何感覺。而且，感染后大約要經過二十年左右才會出現肝硬化。因此，有很多人根本不知道自己經感染。而丙肝可導致肝臟慢性炎癥壞死和纖維化，部分患者可發(fā)展為肝硬化甚至肝細胞癌（HCC），對患者的健康和生命危害極大 HCV主要通過輸血和血制品來進行傳播。,四.丁型肝炎病毒(HDV) 是一種缺陷的嗜肝單鏈RNA病毒，需要HBV的輔助才能進行復制，因此HDV和HBV同時或重疊感染。,80,五.

40、戊型肝炎病毒（HEV） HEV對氯仿敏感，在4℃或—20℃下易被破壞，在鹼性環(huán)境中較穩(wěn)定。HEV存在于替伏末期及發(fā)病初期的患者糞便中。有明顯的季節(jié)性，多散發(fā)于雨季后，糞口傳播是主要的傳播途徑。甲型和戊型肝炎病毒主要引起急性感染，經糞－口途徑傳播，有季節(jié)性，可引起暴發(fā)流行。乙、丙、丁型肝炎常表現為慢性經過，主要經血液傳播，無季節(jié)性，多為散發(fā)，并可發(fā)展為肝硬化和肝細胞癌。,81,第二節(jié) 五型肝炎病毒 （抗體）檢測,,8

41、2,類風濕性因子（RF）：是一種以變性IgG為靶抗原的自身抗體，主要存在于類風濕性關節(jié)炎患者的血清和關節(jié)液中，它是一種抗變性IgG的抗體，可與IgGFc段結合。檢測方法一般有膠乳凝集試驗、雙抗原夾心ELISA法、速率散射比濁法。膠乳凝集試驗 ：將變性IgG包被于聚苯乙烯膠乳顆粒上，這種致敏膠乳在與待測血清中的RF相遇時，即發(fā)生肉眼可見的凝集。正常人1：20稀釋血清為陰性，操作要求56℃30分鐘滅活，（滅活C1q以阻止假陽性凝集）。,

42、第三節(jié) 類風濕診斷,83,臨床意義：未經治療的類風濕性關節(jié)炎患者其陽性率為80%，且滴定度常在1：160以上。 RF不是僅在RA患者中出現，在SLE、進行性全身性硬化癥等自身免疫性疾病患者和部分老年人中RF的陽性率可達28.9%--50%，因而RF對RA患者并不具有嚴格特異性，,抗鏈球菌溶血素“O”，簡稱抗“O”或ASO 溶血性鏈球菌產生的一種代謝產物能溶解紅細胞，所以這種產物被取名為“O”溶血素，人體感染了A組溶血性

43、鏈球菌后，“O”溶血素在體內作為一種抗原物質存在。為了測定這種能中和鏈球菌溶血素“O”的抗體含量，就稱為抗鏈球菌溶血素“O”試驗。,84,臨床意義:溶血性鏈球菌感染、猩紅熱、丹毒、鏈球性咽炎、扁桃體炎。對風濕熱、急性腎小球腎炎有間接診斷價值、若多次檢測結果遞增，并伴紅細胞沉降率加快可有助于診斷。,85,第四章 免疫學檢驗室內質量控制 （ELISA）,南充中心醫(yī)院免疫室 李欣,86,質量管

44、理的基本要求,免疫檢驗要保證檢驗結果的準確、可靠、及時、有效，并盡可能使各實驗室間檢驗結果可比性，這是免疫檢驗質量保證的基本目的。ELISA實驗室內質控的重點是對低值弱陽性標本檢測的精密性進行檢測。臨床免疫學檢驗主要采用血清標本，檢驗項目既有傳染性病原體的抗原及抗體，還有腫瘤標志物、激素、特種蛋白、細胞因子、治療藥物等；既有定量檢測，又有定性檢測。,87,一、分析前質量保證,主要是患者準備、標本的正確采集、輸送及保存。防止溶血、乳糜血

45、、血液污染，治療藥物及激素測定還應注意采集標本的時間，甚至患者體位都能影響檢測結果。溶血標本會增加非特異性顯色造成假陽性。 儀器保持最佳工作狀態(tài)。所要控制的儀器包括移液器（加樣槍），水浴箱（溫箱），洗板機和酶標儀。,88,1.加樣：加標本應用微量移液器，按規(guī)定的量加至微孔板孔底的 1/3 處，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產生氣泡。加每份標本應更換吸嘴，干吸頭預先在樣本中抽吸三次。滴瓶滴加試劑時，應先將滴瓶搖勻并擠去

46、第 1 滴有氣泡的試劑，注意垂直加樣，并力求量的一致。,一、分析中質量保證,89,2.溫育應嚴格按照試劑盒要求選擇溫育次數和間，力求準確、一致。溫育采用能使反應液迅速達到平衡的水浴法。為減少邊緣效應，水要浸至板條的1/3處，不可將板條疊加放置?？杉臃饽l以防止蒸發(fā)。,90,3.洗滌,甩去孔內反應液。用洗滌液過洗一遍（即注滿孔后即刻甩去）。將微孔重新注滿洗液后浸泡 1-2 分鐘，間歇搖動。甩去孔內液體，拍板，用紙徹底吸

47、干。重復以上操作至少 5 次，注意各種試劑盒的洗滌液盡量不要混用。洗板機洗滌時一定按要求設置洗滌參數，務必要板架放平 ，填充孔不能高于標本孔，標本孔不能有凝塊，以免堵孔。,91,4.顯色及判讀結果,注意加顯色液次序和顯色時間。比色前務必擦干板底。注意灰區(qū)值的判定及處理 。,92,一、分析后質量保證,鉤狀效應現象若樣本中抗原濃度過高，會出現高濃度后帶現象，此時免疫反應被明顯抑制，測定結果偏低。要消除此干擾，只有對樣本進行適當稀釋后

48、重新測定。對雙抗體夾心法則抗原時出現的假陰性標本需稀釋（1：250、1：500、1：1000）后重測。,灰區(qū)值需重復實驗或換試劑重測以確定其陰陽性，如仍落在灰區(qū)范圍內則報告陽性。,93,一步法ELISA抗原濃度與顯色變化的反映曲線,94,二步法ELISA抗原濃度與顯色變化的反映曲線,95,對某些罕見模式，必須進行復查。試劑盒陰性、陽性對照或標準濃度系列：陰性對照值≤ 0.05，陽性對照值＞ 0.8 ，（陽性對照值－陰性對照值）＞