女貞過氧化物酶分離、純化及酶學性質研究.pdf

1、過氧化物酶(Peroxidase，POD，EC1.11.1.7)是廣泛存在于各種動物、植物和微生物體內的、其結構和作用機理并不完全相同的一類含血紅素的氧化酶，一般含有鐵或銅等金屬離子，具有多種生理功能。 論文以女貞(LigustrumlucidumAit.)為材料，研究了女貞葉及果實POD的分離純化，女貞果實POD熱穩(wěn)定性及海藻糖和β-環(huán)糊精的影響，以及女貞果實POD部分酶學性質。 從女貞果實中分離得到一種POD，純化過

2、程包括勻漿、硫酸銨-丙酮協(xié)同沉淀、SephadexG-100凝膠柱層析和DEAE-纖維素陰離子交換層析，純化倍數(shù)為48，回收率13.3％，分子量為22kDa。從女貞葉質外體蛋白中分離得到單一條帶的POD，分子量為62kDa。 女貞葉POD粗酶具有較高的熱穩(wěn)定性，60℃下加熱60min，酶活剩余61％。在35℃、40℃、45℃、50℃水浴中加熱一小時后，剩余酶活都在90％以上。在80℃下處理5min，酶活完全喪失，70℃下處理5m

3、in，酶活剩余71％。在分別添加了適宜濃度的海藻糖和β-環(huán)糊精后，女貞葉POD粗酶在60℃下熱穩(wěn)定性分別提高了11％和9.8％。女貞葉POD粗酶最適pH為6.0。 純化后的女貞果實POD最適pH為6.5，最適反應溫度為40℃；熱穩(wěn)定性降低，70℃加熱5min，酶活僅剩余26％，60℃下處理60min酶活剩余44％。女貞果實POD對H2O2的Km值為3.85mmol/L。底物愈創(chuàng)木酚的Km值為6.2mmol/L。 Ala-