第一向等電聚焦系統(tǒng)

1、第一向等電聚焦（IEF）圖示：圖示：EttanIPGph3等電聚焦儀器和等電聚焦儀器和EttanIPGph3控制軟件控制軟件雙向電泳的第一向IEF電泳采用IPGph，實驗將變得很簡單。IPGph包括半導(dǎo)體溫控系統(tǒng)(18C25C)和程序化電源(8000V，1.5mA)?？刹捎闷胀ㄐ湍z條槽一步完成膠條的水化、上樣和電泳，大大減少操作步驟。IPGph一次可進行12個膠條槽的電泳(71113，18，24cm)，因采用高電壓(8000V)，可縮短

2、聚焦時間。最新推出的通用型杯上樣膠條槽因采用可移動的上樣杯和電極，適合任何長度的IPG膠條，尤其適合極性等電點蛋白的分離。1IPG膠條的水化和電泳（1）儀器：IPGph（2）試劑：水化液（8M尿素，2%CHAPS，15mMDTT和0.5%IPG4）IPG膠條上覆蓋適量（1.5mL）ImmobilineDryStrip覆蓋油（從兩側(cè)往中間加），蓋上蓋子。5）將標(biāo)準(zhǔn)型膠條槽的尖端背面電極與IPGph儀器的陽極平臺接觸；膠條槽的平端背面電極與

3、IPGph儀器的陰極平臺接觸（在此過（在此過程中，需用水平儀檢查平臺是否平衡，然后用兩塊白色條形板壓在膠程中，需用水平儀檢查平臺是否平衡，然后用兩塊白色條形板壓在膠條槽上，最后蓋上條槽上，最后蓋上IPGph的蓋子）的蓋子）。6）設(shè)置IPGph儀器運行參數(shù)：IPG膠條水化的電壓，溫度和時間；等電聚焦電泳時的梯度電壓和溫度。電泳參數(shù)見表2.2。表2.2：IPGph運行條件運行條件步驟電壓時間S1Stp30V11:00HrS2Stp100V1

4、:00HrS3Grd1000V1:00HrS4Grd8000V2:00HrS5Stp8000V50000VhrS6Stp500V12:00Hr低電壓時水化，有利于高分子量蛋白進入膠中，并減少蛋白形成聚集體。低電壓時水化，有利于高分子量蛋白進入膠中，并減少蛋白形成聚集體。7）IPG膠條水化后可自動進行等電聚焦電泳。8）暫時不進行第二向的IPG膠條可夾在兩層塑料薄膜中于80C保存幾個月。注意：不推薦每條IPG膠條的電流超過50μA，因為這有