衰老細(xì)胞模型構(gòu)建及抗衰老活性物質(zhì)初步篩選研究.pdf

1、衰老被定義為生理完整性的逐漸損失，是生命過(guò)程的必然規(guī)律，這種退化是人類病理學(xué)的主要危害因素，包括癌癥、糖尿病、心血管和神經(jīng)退行性疾病。近五年，衰老細(xì)胞的累積及其分泌表征（SASP）受到了越來(lái)越多的關(guān)注，基于衰老細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞類似的“促幸存抑凋亡”機(jī)制，開展靶向清除衰老細(xì)胞的藥物“senolytics”的發(fā)現(xiàn)是目前抗衰老研究的重點(diǎn)之一。
　　本文主要研究工作有：
　　1.建立鼠腎小管上皮細(xì)胞衰老模型。利用鼠腎小管上皮原代細(xì)胞自

2、身易衰老的特點(diǎn)，采用連續(xù)培養(yǎng)的方法監(jiān)測(cè)細(xì)胞的衰老進(jìn)程。通過(guò)衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶（SA-βgal）染色（SABG染色法）得到不同培養(yǎng)天數(shù)的細(xì)胞衰老比例，通過(guò)碘化丙啶染色、流式細(xì)胞儀檢測(cè)觀察細(xì)胞周期阻滯的情況。結(jié)果顯示培養(yǎng)第7~8天，細(xì)胞半數(shù)衰老，第9天衰老比例>90%，得到細(xì)胞衰老比例隨培養(yǎng)時(shí)間的變化曲線，同時(shí)G0/G1期細(xì)胞比例增多。本模型代替細(xì)胞系的應(yīng)用考察了壓力誘導(dǎo)的早衰（SIPS）模型，解決了目前急性/慢性亞細(xì)胞毒性難以區(qū)分損傷

3、及衰老的問(wèn)題。
　　2.應(yīng)用建立的細(xì)胞衰老模型，本文檢測(cè)了19種藥物對(duì)第7至第9天細(xì)胞衰老進(jìn)程的影響。發(fā)現(xiàn)MW組合物100μg/mL給藥可以明顯延緩細(xì)胞的衰老，衰老比例從92.23%降至63.55%，降低約29%。已知的“senolytics”ABT263在0.5-2.5μM濃度范圍內(nèi)給藥即可發(fā)揮明顯的靶向清除作用。5μM氨磷汀二硫化物、250μg/mL心肌肽、250μM桂哌齊特也表現(xiàn)出類似于ABT263的靶向清除作用。
　

4、　3.應(yīng)用腎小管內(nèi)皮原代及衰老細(xì)胞篩選五種 senolytics候選藥物，結(jié)果顯示5μM ABT263（陽(yáng)性對(duì)照）對(duì)正常細(xì)胞存活率與衰老細(xì)胞存活率的比值（NC/SC）為3.5（>1），10μM氨磷汀二硫化物NC/SC=89，1000μM桂哌齊特NC/SC=4.67。表現(xiàn)出優(yōu)異的抗衰老細(xì)胞靶向性。
　　4.另外發(fā)現(xiàn)心肌肽、氨磷汀硫醇及氨磷汀二硫化物具有促進(jìn)體細(xì)胞增殖的特性，可以重建細(xì)胞數(shù)量，與清除衰老細(xì)胞過(guò)程協(xié)同達(dá)到抗衰老的目的。心