全國流感監(jiān)測技術指南

1、附件附件2：流感監(jiān)測實驗技術操作規(guī)范流感監(jiān)測實驗技術操作規(guī)范一、流感監(jiān)測臨床標本的采集、運送、處理及流感病毒株的運輸一、流感監(jiān)測臨床標本的采集、運送、處理及流感病毒株的運輸（一）流感臨床標本的采集病毒分離成功與否很大程度上取決于臨床標本的采集時間、質量及其保存和運輸等環(huán)節(jié)。多數標本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次為氣管和支氣管分泌物及尸檢組織。標本采集后應立即放入適當的采樣液中低溫保存。常用的采樣液有以下三種：pH7.4～7.6的Hanks

2、、Eagles或者DMEM培養(yǎng)基。為防止采樣液生長細菌和真菌，在采樣液中可加入抗菌素，加入慶大霉素（終濃度為1mgmL，Gibcocat.no.15750078）和或制霉菌素（終濃度為50UmL）。加入抗菌素以后重新調節(jié)pH值至7.4，分裝每個采樣管3mL，20℃凍存。常用采樣方法有以下幾種：1.鼻拭子：將帶有聚丙烯纖維頭的拭子平行于上顎插入鼻孔，旋轉，保持數秒，待拭子頭吸收分泌物以后，緩慢轉動退出。以另一拭子拭另側鼻孔。將拭子頭浸入采

3、樣液中，棄去尾部。2.咽拭子：用帶有聚丙烯纖維頭的拭子適度用力擦拭雙側扁桃體及咽后壁，應避免觸及舌部。同樣將拭子頭浸入采樣液中，棄去尾部。注：注：亦可將鼻、咽拭子收集于同一采樣管中，以便提高分離率，減少工作量。3清液可直接接種或低溫保存。組織標本的處理：取肺組織標本放至平皿中，用滅菌生理鹽水清洗肺組織2～3遍，研磨成組織懸液，配置成10％～20％的組織懸液，2000rpm離心10min，加入抗菌素，取上清直接接種。注：注：如原始采樣液中

4、未加入抗菌素，應在標本接種前補加，慶大霉素終濃度為10mgmL，青鏈霉素（終濃度:青霉素G100UmL硫酸鏈霉素100μgmL），混勻后置4℃過夜或作用2h后進行接種。臨床標本處理后，將原始標本分為三份，一份用于雞胚接種，一份用于MDCK細胞接種，一份保存待復核用。對于病毒分離陽性的原始標本70℃至少保存6個月，在收到國家流感中心復核鑒定報告后，按照生物安全有關規(guī)定處理；病毒分離陰性的標本隨時按生物安全的有關規(guī)定處理。（四）血清標本的采

5、集、處理、運輸和保存血清標本多用于流感暴發(fā)時的血清學核實診斷。血清標本采集應該包括急性期和恢復期雙份血清單份血清不能用作診斷。急性期血樣應盡早采集，可在采集病毒分離標本的同時采集，但不能晚于發(fā)病后7天?；謴推谘獦觿t在發(fā)病后2～4周采集。一般采集空腹血。1.取一根體積5mL以上，無菌的血清管做好標記，并進行登記。登記的內容包括：醫(yī)院名稱、患者姓名、性別、急性期（Acute，A）或是恢復期（Convalescence，C）、采樣日期（年，月