hepg2.2.15細胞脂肪變性對hbv基因表達及socs3和srebp1c通路的影響

1、山西醫(yī)科大學博士學位論文HepG2.2.15細胞脂肪變性對HBV基因表達及SOCS-3和SREBP-1c通路的影響姓名：王艷申請學位級別：博士專業(yè)：內(nèi)科學（傳染病學）指導教師：趙龍鳳2011-03-20山西醫(yī)科大學博士學位論文IV第一部分 HepG2.2.15 細胞脂肪變性模型的建立。第二部分 HepG2.2.15 細胞脂肪變性對 HBVDNA 和蛋白表達的影響研究。第三部分 HBV 對脂肪變性 HepG2.2.15 細胞 SOCS-3

2、 及 SREBP-1c 通路的影響研究。第四部分 TGFβ1 對 HepG2.2.15 細胞脂肪變性的影響研究。第一部分 第一部分 第一部分 第一部分 HepG2.2.15 HepG2.2.15 HepG2.2.15 HepG2.2.15 細胞脂肪變性 細胞脂肪變性 細胞脂肪變性 細胞脂肪變性模型的建立 模型的建立 模型的建立 模型的建立實驗一 實驗一 實驗一 實驗一 HepG2 HepG2 HepG2 HepG2 及 及 及 及 He

3、pG2.2.15 HepG2.2.15 HepG2.2.15 HepG2.2.15 細胞的培養(yǎng)與觀察 細胞的培養(yǎng)與觀察 細胞的培養(yǎng)與觀察 細胞的培養(yǎng)與觀察目的 目的 建立 HepG2/HepG2.2.15 細胞凍存、復蘇和傳代的條件，了解細胞增殖特性及HBV 的復制和表達能力。方法 方法 采用無菌培養(yǎng)方法，細胞培養(yǎng)液中添加 G418，倒置顯微鏡觀察細胞生長狀況，臺盼藍細胞的計數(shù)及活力鑒定，熒光實時定量 PCR 方法檢測細胞上清液中的 H

4、BV DNA，時間分辨熒光分析儀檢測 HBsAg 和 HBeAg。結果 結果 含 10% FBS 培養(yǎng)基可維持細胞的指數(shù)生長，含 70% FBS 的凍存液可保證細胞復蘇成活率達 90%，HepG2.2.15 細胞 HBVDNA、HBsAg 及 HBeAg 量隨培養(yǎng)時間延長而穩(wěn)步增長。結論 結論 HepG2/HepG2.2.15 生長快速，對培養(yǎng)基和凍存液血清濃度要求較高。定期向HepG2.2.15 細胞培養(yǎng)液中添加 G418 可保證 H

5、epG2.2.15 內(nèi) HBV 的穩(wěn)定復制和蛋白表達。實驗二 實驗二 實驗二 實驗二 HepG2 HepG2 HepG2 HepG2 及 及 及 及 HepG2.2.15 HepG2.2.15 HepG2.2.15 HepG2.2.15 細胞脂肪變性模型的構建 細胞脂肪變性模型的構建 細胞脂肪變性模型的構建 細胞脂肪變性模型的構建目的 目的 建立 HepG2/HepG2.2.15 細胞脂肪變性的實驗條件。方 法 方 法 選 擇 油 酸

6、（ OA ） 作 為 脂 肪 誘 導 劑 ， 設 定 0.1 ～ 0.4mM 濃 度 梯 度 對HepG2/HepG2.2.15 細胞進行脂變誘導。細胞分為對照組、二甲基亞砜（ DMSO，油酸溶劑）組和不同濃度 OA 組。MTT 法檢測細胞相對活性并制作細胞生長曲線，油紅 O-蘇木素染色觀察細胞內(nèi)脂滴情況并計算脂變率。結果 結果 生長曲線結果顯示，OA 濃度≤0.2mM 時細胞增殖活力不受影響，OA 濃度＞0.2mM 后隨 OA 濃度增

7、高細胞的增殖能力逐漸下降， 0.2%DMSO 不影響細胞的增殖。 油紅O 染色結果顯示， 在 0.2mM 濃度 OA 作用下 24h 時細胞內(nèi)開始出現(xiàn)橘紅色小脂滴， 隨作用時間的延長脂滴逐漸增多增大，72h 時形成明顯脂變。HepG2.2.15 細胞在 24h、48h 時的平均脂變率均低于 HepG2 細胞（P=0.028，0.022） ，72h 時無明顯差異（P=0.372） 。結論 結論 0.2mM 濃度的 OA 作用 72h 可使