tfh細(xì)胞和b細(xì)胞共培養(yǎng)體系與hepg2.2.15細(xì)胞相互作用研究

1、重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文Tfh細(xì)胞和B細(xì)胞共培養(yǎng)體系與HepG2.2.15細(xì)胞相互作用研究姓名：梁文申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：任紅201205重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文6 ．混合培養(yǎng)液上清檢N - 混合培養(yǎng)l 周后，應(yīng)用E L I S A 法檢測(cè)培養(yǎng)上清液H B e A b ；7 ．混合培養(yǎng)液上清H B V D N A 水平測(cè)定：將收集的上清液經(jīng)D N A 提取液處理后進(jìn)行P C R 擴(kuò)增，按照H B VD N A 熒

2、光定量P C R 檢測(cè)試劑盒操作步驟進(jìn)行。8 ．混合培養(yǎng)細(xì)胞C X C R 5m R N A 水平測(cè)定：( 1 ) 提取總R N A ：按照高純總R N A 快速提取試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。( 2 ) 合成e D N A ：以每l O u l 反應(yīng)體系4 0 0 n g 總R N A 按逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行合成。( 3 ) P e R 擴(kuò)增：C X C R 5 引物：F ： 5 一C T C C T C T C C A T C C A C

3、A T C A C C T - 3 ，R ：5 - C G T T T C T G C T T G G T T C T C T T G G - 3 。反應(yīng)條件為：9 5 ℃3 0 S ；9 5 。C 5 S ，6 0 ℃3 1 S ，4 0 個(gè)循環(huán)。2 也甜方法分析基因表達(dá)水平，B - a c t i n 為內(nèi)參。9 ．統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：用S P S S l 7 ．0 軟件進(jìn)行分析，采用t 檢驗(yàn)和方差分析，以P < O ．0 5為差異有

4、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1 ．同一患者外周血來(lái)源的T f h 細(xì)胞和脾臟來(lái)源的T f h 細(xì)胞表型存在差異。外周血來(lái)源的T f h 細(xì)胞I C O S ，P D L l ，P D L l 表達(dá)低于脾臟W f h 細(xì)胞，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P < 0 ．0 5 ) ，而C C R 7 表達(dá)高于脾臟W f h 細(xì)胞，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P < O ．0 5 ) ；2 ．同一患者外周血來(lái)源的T f h 細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子I F N -

5、 Y ( 8 ．3 2 ±1 ．2 1 ) 明顯高于脾臟來(lái)源的T f h 細(xì)胞分泌I F N —Y ( 3 ．8 3 ±0 ．3 2 ) ，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P < O ．0 5 ) ：3 ．應(yīng)用磁珠分選法能夠成功獲得C X C R 5 + 細(xì)胞：用流式細(xì)胞儀鑒定細(xì)胞的純度和構(gòu)成：C X C R 5 + 細(xì)胞純度為8 5 ．5 3 ±5 ．7 7 ％，其中t f h 細(xì)胞占：2 3 ．8 

6、7;7 ．4 ％，B 細(xì)胞占：3 5 ．6 ±7 ．6 ％：4 ．C X C R 5 + 細(xì)胞和人肝癌細(xì)胞系H e p G 2 ．2 ．1 5 細(xì)胞在體外混合培養(yǎng)1 周后，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)T f h 細(xì)胞表型的變化，發(fā)現(xiàn)P D l ，P D L l ，I C O S 均明顯低于培養(yǎng)前，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P < O ．0 5 ) 。T f h 細(xì)胞分泌因子I F N - Y 的表達(dá)情況也明顯高于培養(yǎng)前，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)