氯氮平對脂肪細(xì)胞PPARγ、C-EBPα、ADD1-SREBP-,1C-、LPL和DGAT1基因表達(dá)的調(diào)控.pdf

1、背景：氯氮平是第二代非典型性抗精神病藥物，廣泛地應(yīng)用于臨床，其臨床療效較好，但也伴隨著許多副作用，其中最嚴(yán)重的副作用是體重增加。目前的解釋是氯氮平對幾種受體具有高度的親和力，主要是通過阻斷5-HT2C、多巴胺D2、組胺H1受體和促進(jìn)5-HT1A受體而引起攝食的增加。在分子水平上，氯氮平是否直接作用于脂肪細(xì)胞分化成熟過程中的轉(zhuǎn)錄因子以及與脂肪細(xì)胞特異性蛋白來發(fā)揮作用呢?目前尚不清楚。 目的：在細(xì)胞水平通過氯氮平對脂肪細(xì)胞分化成熟的

2、影響以及它對脂肪細(xì)胞因子PPARγ、C/EBPα、ADD1/SREBP1C、LPL and DGAT1等基因表達(dá)的調(diào)控研究，闡明氯氮平誘導(dǎo)體重增加或肥胖的作用機(jī)制。 方法：1)細(xì)胞培養(yǎng)和分化：0％胎牛血清培養(yǎng)3T3-L1細(xì)胞，細(xì)胞完全融合融合兩天后，含5μg/ml insulin、1μmol/L DEX和10mmonl/L IBMX的10％胎牛血清誘導(dǎo)細(xì)胞，2天換液一次。2)油紅O染色：細(xì)胞促分化的同時(shí)加入氯氮平，用油紅染色觀察

3、脂滴。3)運(yùn)用RT-PCR以及western-blotting技術(shù)檢測氯氮平和羅格列酮對3T3-L1細(xì)胞的PPARγ、C/EBPα、ADD1/SREBP1C、LPL和DGAT1基因mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平的影響。4)用甘油三酯試劑盒檢測3T3-L1細(xì)胞內(nèi)甘油三酯的含量。 結(jié)果：1)3T3-L1細(xì)胞在不同劑量氯氮平刺激下，ADD1/SREBP1C的mRNA表達(dá)量增加隨著氯氮平劑量增加而增加，在10μM時(shí)達(dá)到最高值，沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；

4、2)不同劑量氯氮平刺激下，LPLmRNA表達(dá)量增加隨著氯氮平劑量增加而減少，在10、50、100μM處與對照組相比有顯著性差異(P值分別為0.049，0.044，0.037)：3)3T3-L1細(xì)胞在不同劑量氯氮平刺激下，LPL蛋白表達(dá)量隨著氯氮平劑量增加而減少，存在劑量依賴性。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示10、50、100μM氯氮平組與對照組相比，明顯減少LPL蛋白表達(dá)(P值分別為0.001，0.000，0.000)：4)不同劑量氯氮平對DGAT1蛋

5、白表達(dá)無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；5)氯氮平處理組隨著天數(shù)的增加明顯減少LPL蛋白表達(dá)，氯氮平組隨著天數(shù)的增加，其LPL蛋白表達(dá)量減少。各天數(shù)之間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均為0.000)。對照組、羅格列酮組和DMSO組不同天數(shù)LPL蛋白表達(dá)量無顯著性差異(P>0.05)；6)不同天數(shù)，對照組、氯氮平組、羅格列酮組和DMS0組對DGAT1蛋白表達(dá)量無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義各劑量組間無顯著性差異(P>0.05)；5)氯氮平和羅格列酮均能明顯增加3T3-L1細(xì)胞內(nèi)