pfcp2.9重組瘧疾疫苗免疫接種與瘧疾自然感染免疫應(yīng)答特性的比較研究

1、第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文PfCP-2.9重組瘧疾疫苗免疫接種與瘧疾自然感染免疫應(yīng)答特性的比較研究姓名：廖源申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：病原生物學(xué)指導(dǎo)教師：潘衛(wèi)慶20090501第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文免疫應(yīng)答反應(yīng)的特異性及產(chǎn)生瘧疾免疫保護(hù)作用的區(qū)域，本實(shí)驗(yàn)室已構(gòu)建和表達(dá)了M S P l ．1 9 和A M A l ( I I I ) 兩個(gè)重組蛋白和P 2 8 合成肽，以及M S P l ．1 9 的兩個(gè)E G F 樣結(jié)構(gòu)域即E G F l

2、和E G F 2 。為了解P f C P ．2 ．9 重組疫苗的免疫原性，以P f C P ．2 ．9 及其組分M S P l ．1 9 、A M A l ( I I I ) 為包被抗原，選取6 8 份P f C P ．2 ．9 疫苗的臨床試驗(yàn)志愿者免疫血清( 其中4 8 份為免疫組，2 0 份為安慰劑組) ，利用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定( E n z y m e ．1 i n k e di m m u n o s o r b e n ta s

3、 s a y ，E L I S A ) 的方法檢測(cè)各組分抗原在志愿者體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體的水平。結(jié)果顯示，除了2 0 名安慰劑組志愿者外，其余4 8 名志愿者均能產(chǎn)生針對(duì)P f C P - 2 ．9 、M S P l ．1 9 、A M A l ( I I I ) 的特異性抗體。比較這4 8 名免疫組志愿者免疫血清中針對(duì)各組分抗原的抗體效價(jià)發(fā)現(xiàn)，以抗P f C P ．2 ．9 抗體為最高，平均為1 3 ，9 3 1 ，最高的志愿者達(dá)1

4、0 6 以上。6 8 名志愿者分別來(lái)自三個(gè)免疫劑量組( 5 u g ，2 0 u g ，5 0 u g ) ，經(jīng)過(guò)對(duì)各組抗體效價(jià)均數(shù)的統(tǒng)計(jì)分析，5 0 u g 組明顯高于5 u g 組和2 0 u g 組，存在顯著差異( P0 ．0 5 ) 。大部分免疫組志愿者血清中針對(duì)P f C P 一2 ．9 特異性抗體水平遠(yuǎn)高于相應(yīng)的針對(duì)M S P l ．1 9 以及A M A I ( 1 H ) 的抗體效價(jià)之和，提示融合抗原較兩個(gè)組分具有更強(qiáng)的

5、免疫原性。通過(guò)E I I S A 實(shí)驗(yàn)和統(tǒng)計(jì)分析H L A —D R B l 基因類型與P f C P ．2 ．9 抗體免疫應(yīng)答水平的關(guān)聯(lián)性發(fā)現(xiàn)，H L A ．D R 6 可能抑制了P f C P ．2 ．9 免疫志愿者抗體免疫應(yīng)答。為了解P f C P ．2 ．9 重組疫苗免疫志愿者血清對(duì)天然蟲(chóng)體的識(shí)別能力，用本實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的惡性瘧原蟲(chóng)海南株( F C C l ／H 【N ) 進(jìn)行間接熒光抗體實(shí)驗(yàn)( I F A ) ，結(jié)果發(fā)現(xiàn)重組疫苗免

6、疫志愿者血清能識(shí)別天然蟲(chóng)體；通過(guò)裂解惡性瘧原蟲(chóng)海南株( F C C l ／H N ) 蟲(chóng)體，抽提其膜蛋白進(jìn)行W e s t e r n —B l o t 試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)重組疫苗免疫志愿者血清能識(shí)別M S P ．1 和A M A l 的條帶。提示P f C P ．2 ．9 重組蛋白與天然構(gòu)象十分接近。在以上實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，我們進(jìn)一步分析了志愿者免疫血清的抗體類型，結(jié)果表明，I g G l 是免疫血清中的主要抗體類型。免疫血清中也同時(shí)能檢測(cè)到