惡性瘧原蟲pfcp2.9融合抗原免疫反應(yīng)特性、效力和穩(wěn)定性的研究

1、第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文惡性瘧原蟲PfCP-2.9融合抗原免疫反應(yīng)特性、效力和穩(wěn)定性的研究姓名：薛向陽申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：病原生物學(xué)指導(dǎo)教師：潘衛(wèi)慶20030401第二車醫(yī)人學(xué)硼士研究生學(xué)位論文摘 要瘧疾依然是嚴(yán)重危害人類健康的傳染病之一，全球每年有3 ～5 億臨床病例，1 0 0 —3 0 0 萬人死于該病，其中大部分是兒童。特別是近幾年來由于抗藥性瘧原蟲蟲株及抗殺蟲劑蚊媒的產(chǎn)生及蔓延，傳統(tǒng)防治瘧疾的方法受到新的挑戰(zhàn)，因此研制一種

2、有效的瘧疾疫苗是瘧疾防治的重要替代途徑。在瘧原蟲復(fù)雜的生活史中，只有紅內(nèi)期是致病的階段，因此，紅內(nèi)期疫苗的研究備受關(guān)注。在眾多的瘧疾候選抗原中，高度保守的裂殖子表面蛋白1 ( M e r o z o i t e S u r f a c e p r o t e i n1 ，M S P - 1 )C 末端1 9 k D 片段( M S P l ．1 9 ) 和裂殖子頂端膜抗原1 ( A p i c a l M e m b r a n e A

3、 n t i g e n1 ，A M A —1 ) 是目前兩個(gè)最有希望的紅內(nèi)期亞單位疫苗。我們實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)成功構(gòu)建了由M S P l —1 9 和A M A 一1 的Ⅲ亞區(qū)l A M A - 1 ( H I ) ] 通過接點(diǎn)序列連接而成的融合蛋白，定名為P f C P 一2 ．9 ，它由畢氏酵母高水平分泌表達(dá)。以M o n t a n i d eI S A 7 2 0為佐劑。P f C P 一2 ．9 能誘導(dǎo)家兔及猴子產(chǎn)生高水平的抗體滴度

4、，動(dòng)物免疫血清體外能抑制裂殖子入侵紅細(xì)胞。目前該疫苗已經(jīng)獲準(zhǔn)進(jìn)入臨床試驗(yàn)。本研究探討了不同遺傳背景小鼠和不同佐劑對(duì)融合蛋白P f C P - 2 ．9 免疫效應(yīng)的影響，并對(duì)該疫苗的穩(wěn)定性和效力進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究。5 種品系小鼠，其中近交系小鼠4 種，遠(yuǎn)交群昆明小鼠1 種，以I S A 7 2 0 為佐劑皮下免疫3 次，以酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)( E L I S A ) 和間接免疫熒光抗體實(shí)驗(yàn)( I F A )檢測(cè)免疫血清中特異性抗體水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)

5、，5 種品系小鼠都能產(chǎn)生針對(duì)P f c P - 2 ．9 的免疫應(yīng)答，三次免疫后血清中特異性抗體滴度達(dá)1 0 5 以上，而且免疫血清能識(shí)別瘧原蟲天然抗原。所誘導(dǎo)的四種I g G 抗體亞型中，I g G l 和I g G 2 a 是免疫血清中主要的抗體類型，與之同時(shí)，免疫血清中也能檢測(cè)到I g G 2 b 和1 9 6 3的存在。但特異性抗體滴度、抗體亞型及對(duì)天然抗原的識(shí)別情況，因遺傳背景不同而出現(xiàn)差異。叫及B A L B ／c a 小鼠