脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞與自體髓核細(xì)胞共培養(yǎng)中相互作用分子機(jī)制初步研究.pdf

1、目的：低氧環(huán)境下，通過(guò)非細(xì)胞接觸共培養(yǎng)自體髓核細(xì)胞與脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，探討髓核細(xì)胞與脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞間旁分泌下相互作用，為椎間盤退變性疾病的細(xì)胞移植治療提供新的細(xì)胞來(lái)源。
　　 方法：①250g 雄性SD大鼠斷頸處死，取腹股溝脂肪墊處脂肪，0.1％膠原酶消化，體外接種培養(yǎng)，采用極限稀釋法純化細(xì)胞。②利用流式細(xì)胞技術(shù)對(duì)細(xì)胞表面標(biāo)記進(jìn)行鑒定(Sca-1，CD44，CD45，CD11b)。③低氧環(huán)境下，自體髓核細(xì)胞與脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞按

2、不同比率共培養(yǎng)。脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞在藻酸鹽中培養(yǎng)，髓核細(xì)胞在培養(yǎng)皿底部培養(yǎng)。④兩周后，細(xì)胞記數(shù)板檢測(cè)髓核細(xì)胞增殖數(shù)量、RT-PCR檢測(cè)髓核外基質(zhì)表達(dá)；同時(shí)免疫組化和RT-PCR檢測(cè)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞外基質(zhì)表達(dá)。
　　 結(jié)果：①共培養(yǎng)后，髓核細(xì)胞增殖明顯，少量脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞作用髓核細(xì)胞即出現(xiàn)明顯增殖；同時(shí)髓核細(xì)胞活性增強(qiáng)，細(xì)胞外基質(zhì)Ⅱ型膠原蛋白（Collagen Ⅱ）、聚焦蛋白聚糖（aggrecan）合成增加，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

3、﹤0.01）。②免疫染色顯示脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞外基質(zhì)出現(xiàn)Collagen Ⅱ。RT-PCR結(jié)果證實(shí)，脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞中髓核細(xì)胞標(biāo)志基因和軟骨細(xì)胞標(biāo)志基因的表達(dá)，實(shí)驗(yàn)組明顯高于對(duì)照組，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.01）。
　　 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)初步探討了自體髓核細(xì)胞與脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞間相互作用機(jī)制：①髓核細(xì)胞能促進(jìn)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞向髓核樣細(xì)胞分化，且分化效率與髓核細(xì)胞數(shù)量相關(guān)；②脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞能促進(jìn)髓核細(xì)胞增殖，同時(shí)恢復(fù)退變髓核細(xì)胞活