中國不同疫區(qū)l.d.its序列分析及l(fā).p.pal、hsp60基因克隆和真核表達

1、四川大學(xué)博士學(xué)位論文中國不同疫區(qū)L.d.ITS序列分析及L.p.PAL、HSP60基因克隆和真核表達姓名：田玉申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：病原生物學(xué)指導(dǎo)教師：陳建平20050429深入研究，從基因水平上進一步揭示我國不同疫區(qū)杜氏利什曼原蟲分離株之間的關(guān)系，從而在根本上為我國黑熱病的防治提供科學(xué)依據(jù)。核糖體存在于所有的原核生物和真核生物細胞內(nèi)，主要功能是作為細胞中蛋白質(zhì)合成場所。利什曼原蟲編碼核糖體的基因r D N A 基因位于單一的染色體上

2、，頭尾相接，呈串珠狀，拷貝數(shù)為1 6 0 個重復(fù)單位。每個熏復(fù)單位均可編碼1 8 S R N A 、5 ．8 S R N A 和2 8 S R N A ，編碼r R N A 基因長度為8 k b ，而重復(fù)單位之間為非轉(zhuǎn)錄的基因間隔區(qū)( N T S ) ，長度平均為8 ．5 k b 。r D N A基因內(nèi)轉(zhuǎn)錄基因間隔區(qū)( I T S ) 平均長度為l k b 。由于r D N A 基因的高度保守性使其突變累積在成串重復(fù)排列的r R N A

3、 基因之間和兩側(cè)的間隔區(qū)序列中，而使核糖體基因間隔區(qū)序列具有種內(nèi)和種間、以及亞種和株的特異性，從而應(yīng)用于分類學(xué)和種株鑒定，I T S 的序列分析在植物、動物、真菌、原蟲等系統(tǒng)進化和分類學(xué)研究中已被廣泛應(yīng)用。本研究用P C R 方法擴增我國荒漠、山丘及平原疫區(qū)杜氏利什曼原蟲分離株L ．d X J 7 7 1 ，L ．d S C l 0 及厶d $ 1 9 2 的I T S 片段( 包含5 ．8 SR N A 基因及其兩側(cè)的I T S l

4、和I T S 2 片段) ，分別將其克隆入p M D l 8 一T v e c t o r ，進行序列測定及分析。首次報道了我國荒漠、山丘和平原疫區(qū)杜氏利什曼原蟲分離株的I T S 序列及三者之間的差異。研究結(jié)果顯示：5 ．8 S R N A 基因不論是這三個疫區(qū)分離株之間，還是與G e n e b a n k 內(nèi)其他利什曼原蟲分離株之間，其核苷酸序列一致性均達到9 9 ％以上，充分顯示了r R N A 基因的保守性。而I T S l

5、及I T S 2 片段則在各分離株之間存在較大的差異性，也充分顯示了我國三個疫區(qū)分離株之間及與國外利什曼原蟲分離株之間同源程度的差異。其中三．d S C I O 與L d ．S D 2 均缺失L ．dX J 7 7 1 的I T S 2 片段第4 5 9 ～5 3 6 位共計7 8 個核苷酸序列，系國內(nèi)外首次報道。根據(jù)我國3 個疫區(qū)利什曼原蟲分離株的I T S 序列的差異，可推導(dǎo)出荒漠分離株、山丘分離株與平原分離株之間存在同源性的差異，