外分泌源性胰腺癌中抑癌基因p3339;ing1b的研究

1、第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文外分泌源性胰腺癌中抑癌基因p33的研究姓名：于觀貞申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：病理及病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：朱明華20030501第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)位論文 中文摘要p 3 3 №1 6 與p 5 3 間的協(xié)同功能對(duì)胰腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，同時(shí)轉(zhuǎn)染p 3 3 晰1 b 基因及野生型p 5 3 基因，觀察聯(lián)合共轉(zhuǎn)染兩基因及單轉(zhuǎn)染基因組闖細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞周期G 0 ／G 。阻滯率的變化，W e s t e r n —b l o

2、 t 比較轉(zhuǎn)染后口3 3 №1 b 與p 5 3 蛋白表達(dá)水平的差異。結(jié)果：1 ．構(gòu)建兩張組織芯片，分別含1 7 1 和1 9 0 個(gè)位點(diǎn)，免疫組化顯示胰腺癌組織中p 3 3 0 婚1 6 及p 5 3 蛋白表達(dá)陽(yáng)性率分別為7 7 ．9 ％和5 9 ．8 ％，兩者陽(yáng)性分布區(qū)域相同，均定位于細(xì)胞核，且p 3 3 晰1 b 與p 5 3 蛋白在胰腺癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)( P < O ．0 1 ) 。2 ．P C R —S S C P

3、 及D N A 測(cè)序結(jié)果表明口3 3 。蛄掩基因在胰腺癌組織中沒(méi)有大片段的插入或缺失，4 0 例胰腺癌中有1 例經(jīng)S S C P 檢測(cè)出現(xiàn)異常遷移，D N A 測(cè)序證實(shí)在I N G l b基因外顯子2 區(qū)內(nèi)第2 1 5 位編碼子存在T G C - T C C 錯(cuò)義突變；在癌旁組織中p 3 3 肌”5 基因均未發(fā)現(xiàn)突變：I N G l b 基因的低突變率提示在胰腺癌中，突變不是引起p 3 3 啪1 b 抑癌基因功能喪失的主要原因。3 ．L

4、 O H 結(jié)果顯示I N G I 位點(diǎn)附近存在雜合缺失，在2 3 例胰腺癌中，D 1 3 S 2 6 1 ，D 1 3 S 1 0 4 7 ，D 1 3 S 1 3 1 5 和D s 4 2 4 9 0 的缺失率分別為8 ．7 ％、2 1 ．7 ％、1 3 ．o ％和2 6 ．1 ％，總的缺失率為6 0 ．9 ％，且離I N G l 位點(diǎn)越近缺失率越高，但僅有2 ( 8 ．7 ％) 例胰腺癌p 3 3 粥1 b 蛋白表達(dá)喪失。提示染色體

5、的變化可能影響I N G l 蛋白正常功能的發(fā)揮，但不會(huì)導(dǎo)致p 3 3 №1 b 蛋白表達(dá)的缺失。4 ．R T - P C R 結(jié)果表明胰腺癌組織與癌旁組織中p 3 3 眥“b m R N A 的表達(dá)存在差異，9例中6 例p 3 3 啪1 b m R N A 的表達(dá)下降。I N G I 轉(zhuǎn)錄或／和轉(zhuǎn)錄后加工過(guò)程中可能存在異常。此外在這9 例胰腺癌中僅有1 例蛋白不表達(dá)，提示轉(zhuǎn)錄或／和轉(zhuǎn)錄后修飾異?？赡懿挥绊憄 3 3 N 0 1 6 蛋

6、白表達(dá)。5 ．胰腺癌細(xì)胞株S W l 9 9 0 在轉(zhuǎn)染口3 3 嘴伯表達(dá)質(zhì)粒和共轉(zhuǎn)染p 3 3 附0 1 b 與p 5 3 后，細(xì)胞生長(zhǎng)速度明顯減慢，細(xì)胞凋亡率上升，S 期變長(zhǎng)，死亡細(xì)胞數(shù)目增多，W e s t e r n —b l o t顯示兩組中兩者蛋白的表達(dá)均見(jiàn)升高。表明p 3 3 啪№蛋白的過(guò)表達(dá)能夠抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)并且阻止癌細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化；此外還可影響p 5 3 的表達(dá)，可能在調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、誘導(dǎo)細(xì)胞轉(zhuǎn)化方面兩者協(xié)同發(fā)揮作用。