大豆高效轉(zhuǎn)基因技術(shù)體系的建立及na39;h39;逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(tanhx2)基因的導(dǎo)入研究

1、寧夏大學(xué)碩士學(xué)位論文大豆高效轉(zhuǎn)基因技術(shù)體系的建立及Na/H逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（TaNHX2）基因的導(dǎo)入研究姓名：姬月梅申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：作物遺傳育種指導(dǎo)教師：宋曉華;邱麗娟20080201寧夏J ：學(xué)碩f j 學(xué)f 矗論艾 摘要皇曼! ! ! 曼! 曼! 曼! I 一：I I__ I I I I I _ I I I 曼曼曼曼曼曼曼皇曼皇蔓曼曼舅曼! 曼! 曼曼A b s t r a c tT h es o y b e a n ( G l

2、 y c i n em a x ( L ．) m e r r ) i so n eo ft h em a j o ro i l a n df e e d c r o p s ．I t i s t h e m o s ti m p o r t a n t r e s o u r c eo f p r o t e i ni nh u m a n d i e ta n d i n d u s t r ym a t e r i a l ．S o

3、 y b e a ni nm e d i c i n e p r e v e n t sa n dc u r e 8d i s e a s e sa n d h a s a sw e l la sh e a l t ha s p e c t s ，b u ta l s ot h eu s eo f c e r t a i n ．O nt h ew o r l d t r a n s g e n i cs o y b e a no fh

4、e r b i c i d e - r e s i s t a n tr a p i d l y d e v e l o pa n dd i s p l a y s i nt h eb r e e d i n g o f t r a n s g e n i cs o y b e a nv a r i e t i e si m p r o v e m e n ti n t h e b r o a dp r o s p e c t sf o

5、 r f u t u r ed e v e l o p m e n t ．I n s h a r pc o n t r a s t ，C h i n a ' st r a n s g e n i cs o y b e a n b r e e d i n g s l o w l y p r o g r e s s ，m a i no p e r a t i o ni ng e n e t i ct r a n s f o r m

6、a t i o ni s e f f i c i e n c y o fl o wa n d r e n e w a b l et r a n s f o r m e d p l a n t s ，a n da l s of r e q u e n c yo f r e c u r r e n c ep o o r i s l o w ．T h e r e f o r e ，t h ee s t a b l i s h m e n t

7、o fa n i d e a l a n de f f i c i e n t s o y b e a nt r a n s f o r m a t i o n s y s t e m a r e t h e f o c u s o fc u r r e n tr e s e a r c h ．．T h eo b j e c t i v e o ft h i s s t u d y i s t o o p t i m i z e t h

8、 e c o n d i t i o n s o ft h e c o t y l e d o nn o d e s y s t e mo fA g r o b a c t e r i u m - m e d i a t e ds o y b e a nt r a n s f o r m a t i o nS O t h a tt h et r a n s f o r m a t i o np l a n t s c a nb eo b

9、 t a i n e d ．T h e c o t y l e d o n s o f s o y b e a n f o r u s e e x p l a n t s ，d u a l c o n t a i n i n g p l a n t e x p r e s s i o n v e c t o rp B I N 4 3 8 —3 5 S - T a N H X 2 A g r o b a c t e r i u mA G

10、L l t h ec o n v e r s i o no f s o y b e a na n de x p l o r ee x p l a n t ss m a l l ，m e d i u m m a j o r c o m p o n e n t s ，e x t e r n a lf a c t o r ss u c h a sc u l t u r et i m ee x p l a n t s t h ei m p a

11、c to f d i f f e r e n t i a t i o nt o o p t i m i z e t h eg e n e t i c t r a n s f o r m a t i o n c o n d i t i o n s ，a n d i m p r o v e t h e t r a n s g e n i c s o y b e a n g e n e t i ct r a n s f o r m a t i

12、 o n e f f i c i e n c y , f o s t e r r e s i l i e n c e o fw h e a t r e l a t e d N a + H a n t i p o r t e r t r a n s p o r t e r g e n e( T a N H X 2 ) t r a n s g e n i c s o y b e a n g e r m p l a s m ．T h e m

13、a i n r e s u l to f t h i sr e s e a r c ha sf o l l o w s ：I d e n t i f i c a t i o n o fah i 【g h r a t e o fr e n e w a b l e s o y b e a ng e n o t y p e s ．1 5v a r i e t i e s o fc o t y l e d o n s o fs o y b e

14、a ng e n o t y p e s 、) l ，i t l lA g r o b a c t e f i u ms t r a i n s ( i n c l u d i n gp B I N 4 3 8p l a s m i d ) A G L ld i s s e m i n a t e d ，d i f f e r e n tg e n o t y p e sB u d r e g e n e r a t i o nr a

15、t ea n d t h er a t ea r es i g n i f i c a n t l yc h a n g e t h er a n g eo f 2 2 ～7 3 ％a n d 4 ～5 8 ％s u i t a b l ef o r s c r e e n i n gf r o m t h eg e n e t i ct r a n s f o r m a t i o no f s o y b e a n g e n

16、o t y p e s ， i n c l u d i n gi n tZ h o n g d o u3 2 ，J i l i n a r a b i c a l ，S u i n o n g 1 4 a n d Z a o s h u 1 8 ，a n do t h e re a r l yv a r i e t i e s ．R e s e a r c hf o u n d t h a tc o n v e r s i o nr a

17、 t ea n dt h e h i i g hr a t eo fr e n e w a b l es o y b e a ng e n o t y p e s ，A g r o b a c t e r i u ma l s oq u i t es e n s i t i v e ．O n t h ep Hv a l u ea n d6 一B A o nt h e r o l eo fg e n e t i c t r a n s f

18、 o r m a t i o n ．U s eo ft h eZ h o n g d o u 3 2s o y b e a n r e s e a r c hi n t o c o n d i t i o n s ， r e s e a r c hs h o w st h a t i n t h ei n d u c t i o np h a s e o f B u d ，b o m h o r m o n e st o e n t e

19、 rt h ec e l l so fp l a n t s a n ds u i t a b l ef o rs o y b e a ng r o w t ha n d d e v e l o p m e n to fs e l f - o p t i m u mp Hv a l u eo f 5 ．7 ．I nt h ec u l t u r eo f Z h o n g d o u 3 2 ．i nt h eg e r m i n

20、 a t i o n a n d a d v e n t i t i o u sb u d s a r et w o k i n d so fm e d i u ma n d 6 - B A ，B u d r a t i o ，a n dn o to n l y i na s i n g l ec u l t u r eF o u n d a t i o n6 - B A i n c r e a s e d0 ．7 t i m e sO

21、 V e r ．E s t a b l i s h e dt h eb e s t g e n e t i ct r a n s f o r m a t i o n m e t h o d s ．T h r o u g ht h eg e r m i n a t i o nm e d i u m6 - B Ac o n c e n t r a t i o n ( A ) 一i n d u c e dB u dn u r t u r e6