氨茶堿對支氣管哮喘患者外周血cd439;t淋巴細胞和cd439;cd2539;t調(diào)節(jié)細胞自噬的影響

1、中山大學博士學位論文氨茶堿對支氣管哮喘患者外周血CD4T淋巴細胞和CD4CD25T調(diào)節(jié)細胞自噬的影響姓名：梁瑞韻申請學位級別：博士專業(yè)：內(nèi)科學指導教師：伍衛(wèi)20080515氨茶堿對支氣管哮喘患者外周血C D 4 + T 淋巴細胞和c D 4 + C D 2 5 ’T 調(diào)節(jié)細胞自噬的影響中山大學博士學位論文研究目的本實驗擬首先觀察不同濃度氨茶堿對健康人外周血T 淋巴細胞及C D 4 + T 、C D 8 + T 亞群和C D 4 + C

2、D 2 5 + T r e g 自噬和凋亡的影響，得到可調(diào)節(jié)其自噬的最低濃度，接著通過觀察小劑量氨茶堿和地塞米松對哮喘患者外周血C D 4 + T 淋巴細胞和C D 4 + C D 2 5 + T r e g 細胞的自噬和凋亡的調(diào)節(jié)作用，以及對C D 4 + C D 2 5 + T r e g 表達F o X p 3 的影響。進一步了解小劑量氨茶堿對哮喘患者C D 4 + T 淋巴細胞和C D 4 + C D 2 5 + T r e g

3、 的免疫調(diào)節(jié)作用。為小劑量氨茶堿的臨床應用提供了新的理論指導依據(jù)。第一章氨茶堿對健康人外周血T 淋巴細胞及其亞群自噬的免疫調(diào)節(jié)作用茶堿類藥物是目前治療哮喘的常用藥物，近年的研究表明在其血漿濃度尚未影響氣道平滑肌張力時就發(fā)揮著免疫調(diào)節(jié)和抗炎的作用。而T 淋巴細胞及其亞群通過自噬來達到免疫穩(wěn)態(tài)。本實驗擬通過觀察不同濃度氨茶堿作用于體外培養(yǎng)的健康人T 淋巴細胞及C D 4 + 、C D 8 + T 亞群和C D 4 + C D 2 5 + T

4、 r e g 自噬和凋亡的情況，分析小劑量氨茶堿對上述免疫細胞自噬的免疫調(diào)節(jié)作用。并得出可影響其自噬的最低氨茶堿濃度，為后續(xù)的實驗提供小劑量氨茶堿的劑量依據(jù)。l 方法經(jīng)密度梯度離心法、尼龍棉柱法和磁分離法分離所得的健康人T 淋巴細胞及C D 4 + 、C D 8 + T 淋巴細胞和C D 4 + C D 2 5 + T 調(diào)節(jié)細胞，分氨茶堿( 不同濃度) 、地塞米松( D Ⅺ訂) 及空白( b l a n k ) 組培養(yǎng)后觀察細胞光鏡及電

5、鏡形態(tài)學、M D C 熒光染色，并用流式細胞儀檢測自噬和凋亡細胞比例和C D 4 + C D 2 5 + T 調(diào)節(jié)細胞的F o X p 3 表達情況。2 結(jié)果2 ．1 流式細胞術(shù)檢測健康人外周血T 淋巴細胞及其亞群( C D 4 + 、C D 8 + 、C D 4 十C D 2 5 + T 細胞) 的純度T 淋巴細胞的純度為8 1 ．3 ％～9 4 。5 ％；C D 4 + T 淋巴細胞的純度為8 4 。l ％～9 0 ．4 ％；C D