早期多次接種bcg對哮喘小鼠cd439;cd2539;調(diào)節(jié)性t細(xì)胞的影響及其轉(zhuǎn)錄因子foxp3功能的研究

1、浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文早期多次接種BCG對哮喘小鼠CD4CD25調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的影響及其轉(zhuǎn)錄因子Foxp3功能的研究姓名：李茜申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)（呼吸病學(xué)）指導(dǎo)教師：沈華浩20080501⑧加夕，z 掌2 0 0 8 屆博士學(xué)位論文存在爭議。越來越多的證據(jù)表明，過敏性疾病和哮喘中存在C D 4 + C D 2 5 + T r e g 細(xì)胞的功能缺陷或數(shù)目異常，而C D 4 + C D 2 5 + T r e g 細(xì)胞能夠抑

2、制這些疾病的變態(tài)反應(yīng)炎癥的發(fā)展。利用T r e g 的免疫抑制功能來預(yù)防和治療過敏性疾病和哮喘是新的可行的治療思路。T r e g 被認(rèn)為參與了B C G 防治哮喘炎癥反應(yīng)的機(jī)制。分枝桿菌的接種涉及的體內(nèi)慢性的細(xì)胞內(nèi)感染過程使機(jī)體維持一個持續(xù)的免疫應(yīng)答過程，機(jī)體免疫系統(tǒng)調(diào)動免疫防御機(jī)制來控制感染的同時也會以誘導(dǎo)T r e g 等免疫耐受機(jī)制來限制過強(qiáng)的免疫反應(yīng)。研究顯示，結(jié)核感染病人以及B C G 的接種均可誘導(dǎo)F O X P 3 的表

3、達(dá)以及C D 4 + C D 2 5 + T r e g 細(xì)胞的產(chǎn)生。鑒于T r e g 細(xì)胞在哮喘發(fā)病機(jī)制的作用以及分支桿菌感染可能誘導(dǎo)T r e g 細(xì)胞的產(chǎn)生，我們設(shè)計本實(shí)驗(yàn)以研究B C G 接種對哮喘小鼠肺部過敏性炎癥的保護(hù)作用，是否伴隨著C D 4 + C D 2 5 + T r e g 細(xì)胞的變化，以及m g 細(xì)胞發(fā)揮抑制作用的機(jī)制，并利用真核表達(dá)載體對C D 4 + C D 2 5 + 1 ' r e g 細(xì)胞關(guān)鍵

4、基因F o X p 3 進(jìn)行表達(dá)與功能研究。第一部分早期多次接種卡介苗對哮喘小鼠氣道炎癥及C D 4 + C D 2 5 + 調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞通路的影響目的：探討早期多次接種B C G 對哮喘小鼠氣道炎癥的抑制作用是否伴隨著C D 4 + C D 2 5 + 調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞的變化及其可能的作用機(jī)制。方法：新生的C 5 7 B L ／6 小鼠隨機(jī)分為3 組：哮喘組，B C G ( 接種) 組和對照組。B C G 組在出生后第0 、7 、1

5、4 天分別接種B C G ，而O V A 和對照組以等量的生理鹽水注射；從第6 周起，按照程序予o V A 和B C G 組卵白蛋白( O V A ) 致敏并激發(fā)，對照組予生理鹽水處理。小鼠處死后，檢測支氣管肺泡灌洗液( B A L F ) 及肺組織中嗜酸粒細(xì)胞浸潤的情況；使用流式細(xì)胞術(shù)檢測小鼠脾淋巴細(xì)胞中C D 4 + C D 2 5 +T r e g 細(xì)胞／C D 4 + 細(xì)胞比例：R T - P C R 和W b s t e m

6、B l o t 分別檢測F o X p 3m R N A 和蛋白的表達(dá)；脾臟中C T L A ．4 和G I T R 的表達(dá)也以I m P C R 檢測；E L I S A 檢測脾淋巴細(xì)胞上清中I L ．4 、I F N —Y 、I L ．1 0 和T G F ．B 的水平。結(jié)果：B C G 接種顯著減輕了哮喘小鼠B A L F 和肺組織中嗜酸粒細(xì)胞的浸潤。哮喘小鼠脾淋巴細(xì)胞中C D 4 + C D 2 5 + T r e g 細(xì)胞／C