葛根素對(duì)lps誘導(dǎo)raw264.7細(xì)胞炎性細(xì)胞因子表達(dá)的影響及機(jī)制

1、論文題目：蔓揠蠢越L 墮透昱叢型2 §生Z 細(xì)胞盔世鲴照國(guó)王盍鯊的毖咆叢扭劍答辯委員會(huì)主席： 王壓麴援答辯委員會(huì)成員： 直蟲毯數(shù)撞墮塵豎麴攫論文答辯時(shí)間： 2 Q ! ! 生Q §旦! ! 目溫州睦學(xué)院碩士學(xué)位論文一、論文摘要題名葛根素對(duì)L P S 誘導(dǎo)R A w 2 6 4 ．7 細(xì)胞炎性細(xì)胞因子表達(dá)的影響及機(jī)制( 中文摘要)研究目的通過(guò)觀察葛根素( P u e r a r i n ) 預(yù)處理對(duì)細(xì)菌脂多糖( L i

2、 p o p o l y s -a c c h a r i d e ，L P S ) 體外誘導(dǎo)激活小鼠巨噬細(xì)胞R A W 2 6 4 7 后細(xì)胞的形態(tài)變化、細(xì)胞內(nèi)核轉(zhuǎn)錄因子．x B ( n u c l e a r f a e t o r - l c B ，N F ．K B ) 及炎性細(xì)胞因子表達(dá)的影響，探討其抗炎機(jī)制，為葛根素應(yīng)用于急性肺損傷( A c u t e L u n gI n j u r y ，A L l ) ／急性呼吸窘迫綜

3、合征( A c u t e R e s p i r a t o r y D i s l r e s ss y n d r o m e ，A R D S ) 的臨床治療提供理論依據(jù)。方法1 、細(xì)胞分組取對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)良好的細(xì)胞隨機(jī)分為空白對(duì)照組、L P S 模型組( L P S 1 u g ／m L ) 、葛根素預(yù)處理+ L P S 組( 葛根素1 0 0 、2 0 0 、4 0 0 u m o l F L 預(yù)處理細(xì)胞2 4 h 后，換含L

4、P S1 u e , ／m L 培養(yǎng)基孵育細(xì)胞2 4 h ) 。各組在相同的時(shí)聞點(diǎn)加入L P S ( 空白對(duì)照組加入等量P B S ) 。2 、采用C C K ．8 法測(cè)定不同濃度葛根素和L P S 對(duì)巨噬細(xì)胞R A W 2 6 4 7 活性的影響，以選擇臺(tái)適濃度：以檢測(cè)的吸光度( A b s o r b a I l c e ，A ) 值大小作為細(xì)胞相對(duì)數(shù)量的比較，3 、G i e m s a 染色，光學(xué)顯微鏡下觀察巨噬細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變。

5、4 、采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)( E L I S A ) 法檢測(cè)細(xì)胞上清液中M I P 一2 、T N F - Ⅱ表達(dá)水平。S 、采用實(shí)時(shí)熒光定量P c R ( q R T - P C R ) 動(dòng)態(tài)測(cè)定N F —K 1 3 p 6 5 m R N A 的表達(dá)。結(jié)果1 、采用C C K 一8 法檢測(cè)及改進(jìn)寇氏法計(jì)算葛根素的最丈無(wú)毒濃度( T C0 )為5 2 0 3 6 1u m o l ／L ，半數(shù)毒性濃度( T C5 0 ) 為5 4 5