viili多糖對巨噬細胞raw264.7激活及細胞因子的影響

1、分類號：R 3 9 2密級：( 秘密、機密、絕密)學校代碼：1 0 0 5 7研究生學號：1 0 8 2 9 0 0 4V i i l i 多糖對巨噬細胞R A W 2 6 4 ．7 激活及細胞因子的影響V i i l iE x o p o l y s a c c h a r i d e sO n T h e A c t i v a t i o nO f M a c r o p h a g eR A W 2 6 4 ．7 C e l l

2、 sA n d T h e A s s o c i a t e dC y t o k i n e s專業(yè)名稱：制糖工程指導教師姓名：羅成教授研究生姓名：武俊華申請學位級別：工學碩士論文提交日期：2 0 1 3 年1 月論文課題來源：自選課題學位授予單位：天津科技大學摘要V i i l i 是芬蘭傳統(tǒng)的乳制品，其活性近年來越來越受到人們的關注，本文對V i i l i大分子多糖的提取純化、及調節(jié)免疫活性進行了深入研究。通過反復等電點法除酪

3、蛋白，酶解法、S e v a g e 法除去蛋白，最后乙醇沉淀，得到大分子V i i l i 粗多糖，粗多糖V E P S 得率為5 5r a g ／L ：粗多糖經D E A E 一5 2 純化后得到糖分含量高的三種多糖，合并多糖組分為V E P S ，苯酚．硫酸法測定其總糖含量為8 0 ％。通過傅立葉紅外光譜、氣相色譜、液相色譜分析表明：V i i l i 胞外多糖具有一般多糖的特征結構，v i i l i 胞外多糖結構中含有Ⅱ．糖苷

4、鍵，單糖組成主要由鼠李糖、葡萄糖和半乳糖，且含量分別為：8 ．3 2 ％，4 6 ．1 7 ％和4 0 ．0 9 ％。M T T 法、中性紅吞噬法、G r i e s s 法測定細胞N O 的分泌量的變化，酶聯法( E L I S A )測定I L 一6 、I L ．1 B 等細胞因子的變化，R T - P C R 檢測i N O S 、I L ．6 、I L ．1 pm R N A 表達的變化。實驗結果表明：不同濃度的V E P S

5、能促進巨噬細胞R A W 2 6 4 ．7 的增殖，增強細胞的吞噬能力，并促進細胞因子N O 、I L ．6 、I L ．1 p 的分泌，同時促進i N O S 、I L ．6 、I L ．1 pm R N A 的表達，同一濃度V E P S 不同作用時間對R A W 2 6 4 ．7 細胞細胞因子分泌的影響不同，隨V E P S 作用時問的延長，N O 、I L 一6 、I L —l B 的分泌量不斷增加，作用時間大于7 2 h ，分

6、泌量開始減少。V E P S 抑制L P S 激活的巨噬細胞R A W 2 6 4 ．7 細胞因子的分泌。R T - P C R 從分子水平也證明也以上結果。相同濃度的V E P S 卻又能抑制經L P S 刺激的巨噬細胞分泌細胞因子N O ，I L 一6 ，I L ．1B ，表明V E P S 在免疫反應中起到調節(jié)的作用。電子掃描顯微鏡觀察結果表明：V E P S 能促進R A W 2 6 4 ．7 細胞的形變，成拉長錐形、并伸出偽足

7、，并呈劑量相關，V E P S 濃度越大，形變程度越大。流式細胞儀檢測結果表明：V E P S 處于高濃度時G 1 期細胞減少，G 2 期細胞增多，S 期增多；這與細胞吞噬能力的增強，N O 、I L ．6 、I L 一1 B 的釋放是一致。W e s t e r n B l o t 蛋白質印記分析表明V E P S 能促進R A W 2 6 4 ．7 細胞i N O S 蛋白的表達，激活N O 信號通路。活性關鍵詞：v i i l i