viili多糖對(duì)巨噬細(xì)胞raw264.7激活及細(xì)胞因子的影響

1、分類(lèi)號(hào)：R 3 9 2密級(jí)：( 秘密、機(jī)密、絕密)學(xué)校代碼：1 0 0 5 7研究生學(xué)號(hào)：1 0 8 2 9 0 0 4V i i l i 多糖對(duì)巨噬細(xì)胞R A W 2 6 4 ．7 激活及細(xì)胞因子的影響V i i l iE x o p o l y s a c c h a r i d e sO n T h e A c t i v a t i o nO f M a c r o p h a g eR A W 2 6 4 ．7 C e l l

2、 sA n d T h e A s s o c i a t e dC y t o k i n e s專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)：制糖工程指導(dǎo)教師姓名：羅成教授研究生姓名：武俊華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：工學(xué)碩士論文提交日期：2 0 1 3 年1 月論文課題來(lái)源：自選課題學(xué)位授予單位：天津科技大學(xué)摘要V i i l i 是芬蘭傳統(tǒng)的乳制品，其活性近年來(lái)越來(lái)越受到人們的關(guān)注，本文對(duì)V i i l i大分子多糖的提取純化、及調(diào)節(jié)免疫活性進(jìn)行了深入研究。通過(guò)反復(fù)等電點(diǎn)法除酪

3、蛋白，酶解法、S e v a g e 法除去蛋白，最后乙醇沉淀，得到大分子V i i l i 粗多糖，粗多糖V E P S 得率為5 5r a g ／L ：粗多糖經(jīng)D E A E 一5 2 純化后得到糖分含量高的三種多糖，合并多糖組分為V E P S ，苯酚．硫酸法測(cè)定其總糖含量為8 0 ％。通過(guò)傅立葉紅外光譜、氣相色譜、液相色譜分析表明：V i i l i 胞外多糖具有一般多糖的特征結(jié)構(gòu)，v i i l i 胞外多糖結(jié)構(gòu)中含有Ⅱ．糖苷

4、鍵，單糖組成主要由鼠李糖、葡萄糖和半乳糖，且含量分別為：8 ．3 2 ％，4 6 ．1 7 ％和4 0 ．0 9 ％。M T T 法、中性紅吞噬法、G r i e s s 法測(cè)定細(xì)胞N O 的分泌量的變化，酶聯(lián)法( E L I S A )測(cè)定I L 一6 、I L ．1 B 等細(xì)胞因子的變化，R T - P C R 檢測(cè)i N O S 、I L ．6 、I L ．1 pm R N A 表達(dá)的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：不同濃度的V E P S

5、能促進(jìn)巨噬細(xì)胞R A W 2 6 4 ．7 的增殖，增強(qiáng)細(xì)胞的吞噬能力，并促進(jìn)細(xì)胞因子N O 、I L ．6 、I L ．1 p 的分泌，同時(shí)促進(jìn)i N O S 、I L ．6 、I L ．1 pm R N A 的表達(dá)，同一濃度V E P S 不同作用時(shí)間對(duì)R A W 2 6 4 ．7 細(xì)胞細(xì)胞因子分泌的影響不同，隨V E P S 作用時(shí)問(wèn)的延長(zhǎng)，N O 、I L 一6 、I L —l B 的分泌量不斷增加，作用時(shí)間大于7 2 h ，分

6、泌量開(kāi)始減少。V E P S 抑制L P S 激活的巨噬細(xì)胞R A W 2 6 4 ．7 細(xì)胞因子的分泌。R T - P C R 從分子水平也證明也以上結(jié)果。相同濃度的V E P S 卻又能抑制經(jīng)L P S 刺激的巨噬細(xì)胞分泌細(xì)胞因子N O ，I L 一6 ，I L ．1B ，表明V E P S 在免疫反應(yīng)中起到調(diào)節(jié)的作用。電子掃描顯微鏡觀察結(jié)果表明：V E P S 能促進(jìn)R A W 2 6 4 ．7 細(xì)胞的形變，成拉長(zhǎng)錐形、并伸出偽足

7、，并呈劑量相關(guān)，V E P S 濃度越大，形變程度越大。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果表明：V E P S 處于高濃度時(shí)G 1 期細(xì)胞減少，G 2 期細(xì)胞增多，S 期增多；這與細(xì)胞吞噬能力的增強(qiáng)，N O 、I L ．6 、I L 一1 B 的釋放是一致。W e s t e r n B l o t 蛋白質(zhì)印記分析表明V E P S 能促進(jìn)R A W 2 6 4 ．7 細(xì)胞i N O S 蛋白的表達(dá)，激活N O 信號(hào)通路。活性關(guān)鍵詞：v i i l i