花生arachishypogaeal.cam基因的克隆與鈣調(diào)控離體幼胚胚性發(fā)育的研究

1、福建農(nóng)林大學(xué)碩士學(xué)位論文花生（Arachis hypogaea L.） CaM基因的克隆與鈣調(diào)控離體幼胚胚性發(fā)育的研究姓名：孟玉環(huán)申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：作物遺傳育種指導(dǎo)教師：莊偉建20040401福建農(nóng)林太學(xué)2 0 0 1 級(jí)碩士學(xué)位論文A b s t r a c tP e a n u t ( A r a c h i sh y p o g a e aL ．) g r o w i n go n d l 、o u g h t s a n

2、d ys o i l u s u a l l yO c c u r se m b r y oa b o r t i o nd u et ot a l c i n t os h o r t a g ei nt h es o l l i nS o u t hC h i n a ，w h i c h i s a n i m p o r t a n t p r o d u c tp r o b l e m ．T ok n o w t h em

3、o l e c u l a rm e c h a l l i s m ，C a Mg e n e s i n p e a n u tw e r ec l o n e df r o mb o t hg e n o m i eD N Aa n de D N Au s i n gt w op r i m e r ’s d e s i g n e da c c o r d i n gt ot h eC a Mc o n s e r v a t

4、i v es e q u e n c e s ．M e a n w h i l ee x p r e s s i O Rv e c t o r s w e l ‘ec o n s t r u c t e d w i t h s e n e ea n d a n t i s e n c e o f P C a M —lc D N A ．I n a d d i t i o n ，t h e e f f e c t s o f ' c

5、 a l c i u mc o n c e n t r a t i o ni n m e d i aw e r ea 1s os t u d J e dd u r i n gb a s e do nt h eb u i l d - u pi s o l a t e dc u l t u r es y s t e m s ．1 h er e s u l t sa r e a s r e ] l o w i n g s ．F o u r g

6、 e n e s ，P C a ～I(xiàn) 一1 ，P C a M 一2 ．P G C a M —l a n d P G C a M 一1 w e r e c l o n e d a n dr e g i e t e r e d i nO e n e b a n ka s A Y 5 1 7 9 3 0 ，A Y 5 1 7 9 3 1 ，A Y 5 1 7 9 3 3a n d A Y 5 7 2 8 5 6r e s p e c t i

7、v e l y ．T h ea n a l y s i ss h o w e dt h a t t h e f o u rd i f f e r e n tg e n e sw e r ea 1 1c o m p o s e do f4 4 7 b pe n c o d i n g1 4 8a m i n oa c i d sw i t has t o pc o d o n ．T h e s e f o u rg e n e s a c

8、 ea l l h i g h l yh o m o l o g o u sw i t h e a c h o t h e ra n da l s o s h a r e d h i g hh o m o l o g yw i t ho t h e rk n o w np l a n t s ，a n dt h e yb l o n g e d t oE F - H a n ds u p e r Q Ⅷi 】Y ．P g C a M 一

9、】g e n e h a da9 7 3 b pi n ℃r o n b e h i n dt h e2 5 t ha m i n oa c i da n dt h ew h a l e1 e n g t hw a s 1 4 2 5 b p ．7 r h e r e w e r e h i g h l yh o m o l o g o u s s e q u e n c e s a m o n g t h e s e f o u rg

10、 e n e s ．T h es e q u e n c e i d e n t i t y b e t w e e n P G C 曲I —l a n dF C a N —l ，P C a M 一2 ，P G C a ～I(xiàn) 一3 w e r e9 7 ％，9 5 ％，9 6 ％f o r n u c l e i c a c [ d s ，a n d9 8 ％，9 6 ％，9 8 ％f o ra m i n oa c i d s ，r

11、e s p e c t i v e l y ．T h es e q u e n c e i d e n t i t yb e t w e e nP G C a M 一3a n dP C a M —l 、P C a M 一2w e r e9 7 ％，8 5 ％f o r n u c l e a r i d e sa n d 9 8 ％、9 6 ％i d e n t i c a l f o r a a l i n o a c i d s ，

12、r e s p e c t i v e l y ．P C a M 一1 a n dP C a b l 一2 a l s o s h o w e d v a r a t i o n i n n u e l e o t i d e ss e q u e n c ew i t h 8 4 ％i d e n t i t y a n c t a m i n oa c i d s s e q u e n c ew i t h9 6 ％i d e n

13、 t i t y ，T h es e n c ea n da n t i s e n c ee D N Ao fP C a M —1 w e r e i n t e g r a t e d r ‘i g h t t y i n t oP C G e n e r a l a n dp E G A D e x p r e s s i o nv e c t o r ，r e s p o c i v e t y ．M e a n w h i l

14、 e ，t h ee f f e c t so fc a l c i u mc o n c e n t r a t i o n O Re m b r y od e v e l o p m e n tf r o mi m m a t u r et om a t u r eo n ei nv i t r o w e r es t u d i e di nt h ep a p e r ．U n d e r c a l c i u md e f

15、 i c i e n c y c i r c u m s t a n c e s t h e e x p l a n t s b e c a m e b r o w n i n gr a p i d l y t o d e a t hw i t h o u t e x p a n s i o n b u tt h o s ei s o l a t e de m b r y o s e x p a n d e dt oa d i f f