CDK2AP1與雞胚性腺發(fā)育相關(guān)基因調(diào)控關(guān)系初步研究.pdf

1、動(dòng)物性腺的分化和發(fā)育一直是人們研究的熱點(diǎn)，對(duì)生物學(xué)基礎(chǔ)研究和繁殖疾病的治療等方面有重要意義。研究發(fā)現(xiàn)哺乳動(dòng)物性別開關(guān)基因SRY,而禽類的性別決定和性腺發(fā)育調(diào)控機(jī)制還不清楚。本實(shí)驗(yàn)室篩選出早期雞胚性腺發(fā)育過程中雌、雄個(gè)體差異表達(dá)基因CDK2AP1，在小鼠中的研究發(fā)現(xiàn)它對(duì)性腺的發(fā)育起著重要作用。本研究利用超表達(dá)和RNAi干涉技術(shù)，在DF-1細(xì)胞中研究該基因與雞胚性腺發(fā)育生長相關(guān)基因間的調(diào)控關(guān)系，初步確定它在雞胚性腺發(fā)育中的功能。研究結(jié)果如下

2、:
　　 1.WISH檢測(cè)CDK2AP1在3.5d(St22)和4.5d(St25)雞胚以及5.5d(St28)和6.5d(St30)泌尿生殖系統(tǒng)中的表達(dá)，結(jié)果顯示該基因在3.5d(St22)和4.5d(St25)胚胎多種組織中均有表達(dá)，頭部和四肢尤為明顯，且雌、雄雞胚差異顯著。它在5.5d(St28)雌、雄性腺中表達(dá)差異不明顯，6.5d(St30)雌性性腺中表達(dá)量高于雄性;在5.5d(St28)雌、雄性腺中表達(dá)范圍和強(qiáng)度大于6

3、.5d(St30)。
　　 2.構(gòu)建了CDK2AP1超表達(dá)載體RCASBP.B-CDK2AP1-GFP和三個(gè)CDK2AP1干涉載體RCASBP.B-GFP-U6-shRNA(UCR1、UCR2、UCR3)，體外超表達(dá)和干涉CDK2AP1，結(jié)果顯示CDK2AP1在超表達(dá)組中表達(dá)量（qPCR和WB檢測(cè)）顯著上升，在UCR1和UCR3干涉組中顯著下降(P＜0.01)，UCR1干涉效果最好而UCR2干涉效果不明顯(P＞0.05)。

4、>　　 3.分析了CDK2AP1與性腺發(fā)育和分化相關(guān)基因的調(diào)控關(guān)系，qPCR和WB結(jié)果一致顯示CDK2AP1能顯著上調(diào)AR(P＜0.01)和FOXO3a表達(dá)水平(P＜0.05)，qPCR表明它可調(diào)控ERα的表達(dá);顯著下調(diào)CDK2表達(dá)量;而對(duì)EMT調(diào)控因子TWIST2表達(dá)水平?jīng)]有顯著影響(P＞0.05)?？沙醪酱_定CDK2AP1可調(diào)控性腺發(fā)育相關(guān)基因AR、ERα和FOXO3a，以及CDK2表達(dá)水平，促進(jìn)雌、雄性腺的發(fā)育。