一株菲降解細菌的分離鑒定、特性研究以及關(guān)鍵菲降解基因的克隆.pdf

1、多環(huán)芳烴(Polycyclicaromatichydrocarbon，PAHs)在環(huán)境中分布十分廣泛，極易在環(huán)境中累積并可通過食物鏈傳遞，對人類健康和生態(tài)環(huán)境具有很大危害性。菲因具有獨特的化學(xué)結(jié)構(gòu)，成為PAHs研究中的模式化合物，菲污染的研究不僅有利于污染環(huán)境中菲的去除，還可為其它PAHs污染的防治提供有價值的資料。 本論文的主要工作包括：通過選擇性富集培養(yǎng)，從沈撫灌區(qū)石油污染土壤中分離到一株菲降解菌，命名為L2，該菌株能以菲為

2、唯一碳源和能源生長；對該菌株進行了培養(yǎng)條件的優(yōu)化以及特性的研究；通過形態(tài)學(xué)、生理生化和16SrDNA比對分析以及系統(tǒng)發(fā)育研究對該菌株進行鑒定；最后對降解途徑中的關(guān)鍵酶基因進行克隆并分析。得到的主要結(jié)論如下： 1、試驗證實該菌株能以菲為唯一碳源和能源生長，通過對L2菌株培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件優(yōu)化，確定其最佳培養(yǎng)基為玉米粉4％，蛋白胨1％，NaC11％，酵母膏0.5％；最佳培養(yǎng)條件為pH值7.0-7.2，溫度28℃-30℃，150ml容積

3、三角瓶裝液量50ml；并且在以菲為唯一碳源的液體培養(yǎng)基中菲濃度的適量增加有利于該菌株的生長。 2、對細菌L2進行形態(tài)觀察、生理生化測試及16SrDNA序列比對分析。16SrDNA序列分析表明該菌株與不動桿菌屬的多個菌株序列相似性高達98％以上，據(jù)此可確定該L2菌株在分子系統(tǒng)發(fā)育分類學(xué)上屬于不動桿菌屬，這與形態(tài)及生理生化鑒定結(jié)果相吻合，將該菌命名為Acinetobactersp.L2，并構(gòu)建了系統(tǒng)發(fā)育進化樹，發(fā)現(xiàn)L2菌株與Acin

4、etobactersp.DG880[AY258108]親源關(guān)系最近。 3、通過對L2菌株的特性研究，發(fā)現(xiàn)該菌株具有鄰苯二酚2，3-雙加氧酶活性，并且其酶活力隨培養(yǎng)基中菲濃度的增加呈先增加后減小趨勢；培養(yǎng)基中菲濃度對其菲降解速率也有影響，實驗結(jié)果表明，在培養(yǎng)7天后L2菌株對培養(yǎng)基中菲濃度50mg/mL、100mg/mL、150mg/mL的降解率分別為80％、90.38％和97.4％。 4、本文通過設(shè)計簡并引物以及特異引物進