一株降解有機(jī)磷農(nóng)藥細(xì)菌的分離與鑒定.pdf

1、摘要農(nóng)業(yè)產(chǎn)量的增加離不開農(nóng)藥的使用，其中有機(jī)磷農(nóng)藥因?yàn)榫哂惺褂帽憬?、效率較高和經(jīng)濟(jì)低廉等方面的優(yōu)點(diǎn)，所以在20世紀(jì)70年代逐步取代有機(jī)氯農(nóng)藥，成為國內(nèi)外在防治農(nóng)業(yè)蟲害方面最常用的農(nóng)藥。但隨著有機(jī)磷農(nóng)藥的大量應(yīng)用，由此帶來的環(huán)境污染也給人們的健康帶來嚴(yán)重威脅。因此，尋找利用可降解有機(jī)磷農(nóng)藥微生物對于環(huán)境保護(hù)具有重要意義。本文從山東省淄博市郊區(qū)的蔬菜大棚的土壤樣品中分離出的一株能降解有機(jī)磷農(nóng)藥敵敵畏(二甲基二氯乙烯基磷酸酯)的細(xì)菌。根據(jù)對該

2、菌進(jìn)行了形態(tài)特征分析、生理生化特征分析以及16SrDNA序列同源性分析，將該菌鑒定為熒光假單胞菌，命名為熒光假單胞菌P。測定了該菌的最適生長pH值和溫度及其對敵敵畏的降解效率，結(jié)果顯示，該菌的最適生長溫度為27。C，最適生長pH值為70，熒光假單胞菌P能有效的降解敵敵畏，實(shí)驗(yàn)條件下4天內(nèi)對敵敵畏的降解率為612％。同時，通過硫酸銨分級沉淀、DEAE—Sepharose4B離子交換層析和Superdex一75凝膠過濾層析從該菌純化了有機(jī)磷

3、水解酶。SDSPAGE分析濕示該水解酶的分子量約為333kDa。該研究將為開發(fā)可降解敵敵畏的微生物制劑和恢復(fù)農(nóng)藥污染的土壤應(yīng)用研究奠定了理論基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：敵敵畏，降解菌，熒光假單胞菌P，有機(jī)磷水解酶目錄弓l言1第一章一株能降解敵敵畏的細(xì)菌的分離鑒定與降解特性的研究31材料和方法一311材料”3111微生物采集3112主要儀器設(shè)備3113主要試劑412方法4121微生物的分離純化4122土壤菌液的稀釋4123細(xì)菌的接種4124革蘭氏染色5

4、125鞭毛染色6126生理生化指標(biāo)的測定6127基因組DNA的提取1212816SrDNA序列的PCR擴(kuò)增13129PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳檢測1413O測序結(jié)果分析以及系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹的構(gòu)建一14131標(biāo)樣溶液和試樣溶液的配制”15132工作波長的確定一’15133標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制”15134敵敵畏降解率的測定一l5135最適溫度和最適pH值的測量16136敵敵畏降解酶的定位一162結(jié)果與分析1621降解敵敵畏的細(xì)菌菌株的分離162