菲降解細(xì)菌的分離鑒定、降解特性研究及兒茶酚2，3-雙加氧酶基因的克隆與表達(dá).pdf

1、浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文菲降解細(xì)菌的分離鑒定、降解特性研究及兒茶酚2，3雙加氧酶基因的克隆與表達(dá)姓名：周德平申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：微生物學(xué)指導(dǎo)教師：閔航20030501微生物學(xué)碩士論文摘要摘要菲為一種廣泛分布于自然環(huán)境的三環(huán)芳烴，能導(dǎo)致人類呼吸系統(tǒng)和皮膚的病變可誘發(fā)魚類和其它生物的突變、畸變與癌變。目前雖未發(fā)現(xiàn)其與人類癌癥發(fā)生的直接相關(guān)性，但它含有多環(huán)芳烴中與“三致”關(guān)系密切的化學(xué)結(jié)構(gòu)——Kregion和Bayregion，因此成為多環(huán)芳

2、烴污染研究的模式化臺(tái)物。對(duì)菲生物降解的研究不僅有助于環(huán)境中菲污染的消除，還可幫助人們了解其它多環(huán)芳烴的降解機(jī)制及生物降解的可行性，為多環(huán)芳烴及石油污染環(huán)境的生物修復(fù)提供相應(yīng)的理論依據(jù)和治理措施。本研究分離選育了3株菲降解細(xì)菌菌株。并研究了其中一株降解性能異常突出的分離菌株的生長(zhǎng)特性、菲降解影響因素、降解途徑及部分的相關(guān)酶基因。實(shí)驗(yàn)結(jié)果分述如下：l、本研究從石油污染土壤中分離到3株菲降解細(xì)菌(zx4、zx6和E～rAl7)，它們都能以菲為

3、唯一碳源和能源生長(zhǎng)。經(jīng)鑒定3菌株都?xì)w于鞘氨醇單胞菌屬(黝加gDⅢ∞口j)，其中zx4菌株為少動(dòng)鞘氨醇單胞菌(印^岫，om?！薄辮∞c抽D60出)，zx6菌株為溶芳烴鞘氨醇單胞菌(印^fHgnⅢo“∞∞Ⅲd出s)，EvAl7菌株比較獨(dú)特，尚未能鑒定到種。3菌株中，zx4菌株的生長(zhǎng)和菲降解性能最好，在14d中對(duì)培養(yǎng)基中含量為1000mgL。菲的降解率可達(dá)987％。2、zx4菌株的最適生長(zhǎng)溫度為35℃。培養(yǎng)基初始pH對(duì)zx4菌株生長(zhǎng)和菲降解的

4、影響比較特殊：培養(yǎng)基初始pH6時(shí)，與初始pH7相比，zx4菌株的生長(zhǎng)較好但對(duì)非的降解在2d后便基本停滯，不利于菲的徹底降解；培養(yǎng)基初始pH為6時(shí)隨著培養(yǎng)基中菲含量的增加，zx4菌株的生長(zhǎng)出現(xiàn)底物飽和現(xiàn)象T、veen80的加入對(duì)其生長(zhǎng)呈抑制效應(yīng)；而初始pH為7時(shí)，zx4菌株的生長(zhǎng)和菲降解速率始終隨著菲含量的增加而增大，1heen80的加入對(duì)其生長(zhǎng)和菲降解速率都有顯著促進(jìn)作用。氨源NH4N03、(NH4)2SO、NaN03和(NH4)2HP

5、04對(duì)zx4菌株生長(zhǎng)的影響差異不大，但氮源為(NH4)2s04時(shí)菲的降解更為迅速。酵母膏、蛋白胨和葡萄糖等有機(jī)物的加入都可不同程度地促進(jìn)zx4菌株的生長(zhǎng)和菲降解。與菲的單基質(zhì)培養(yǎng)相比多環(huán)芳烴萘、非的共基質(zhì)培養(yǎng)不僅促進(jìn)了zx4菌株的生長(zhǎng)，且提高了其對(duì)菲的降解速率；與zx4菌株的純培養(yǎng)相比，菲降解菌株zx4、EvAl7的混培雖然對(duì)整體生物量的影響不大卻可明顯提高培養(yǎng)基中菲的降解速率。此結(jié)果顯示，共基質(zhì)培養(yǎng)和多種菌株的混培在PAHs污染的生物